一种CD7阳性单核细胞及其分选方法和减重应用技术

本发明专利技术公开了一种CD7阳性单核细胞及其分选方法和减重应用。该分选方法包括下述步骤：(1)将骨髓细胞经红细胞裂解后，依次进行死细胞染色、抗体染色；抗体包括CD7抗体、Cd11b抗体、Ly6G抗体、Ly6C抗体、IgG抗体；(2)基于死细胞染色结果，圈选单个细胞得到区域A，在区域A中的APC/Cy7

【技术实现步骤摘要】
一种CD7阳性单核细胞及其分选方法和减重应用


[0001]本专利技术属于细胞治疗
，具体涉及一种CD7阳性单核细胞及其分选方法和减重应用。

技术介绍

[0002]随着社会经济的发展和人们生活方式的改变，我国超重和肥胖患病率迅速攀升。肥胖症常伴随导致高血糖、高血脂、高血压以及高尿酸血症等代谢紊乱以及各种癌症的发病率增加。目前，针对肥胖症的主要治疗方法包括生活方式干预、药物治疗以及减重手术。然而，这些治疗方法尽管最初可以有效减轻体重，但很难维持10％以上的体重减轻，并且大多数人在减重后容易出现明显的体重反弹。因此，如何控制体重反弹在肥胖个体的治疗中至关重要，有必要探索新的治疗策略。
[0003]研究表明，免疫细胞在机体抵抗肥胖过程中发挥重要作用，使用免疫细胞治疗肥胖是一种新兴的研究领域，但目前免疫治疗使用的重组细胞成本高昂、并有可能导致免疫反应过度、免疫抑制等潜在安全风险，而自体免疫细胞回输治疗有望降低此种风险。目前，尚未见到制备CD7阳性单核细胞用于治疗肥胖相关代谢功能紊乱的报道。

技术实现思路

[0004]本专利技术目的在于克服重组细胞可能导致的免疫反应过度、免疫抑制等潜在的安全风险，而提供了一种CD7阳性单核细胞及其分选方法和减重应用。
[0005]CD7通常被认为是T细胞表面标志物，本专利技术鉴定了一种骨髓来源的CD7阳性单核细胞，肥胖小鼠骨髓CD7阳性单核细胞在经历饮食限制减重后显著扩增，是一种减重相关的免疫细胞。本专利技术中的CD7阳性单核细胞可以利用小鼠骨髓细胞制备，该细胞能够用于治疗肥胖相关代谢功能紊乱，可用于抵抗肥胖。
[0006]本专利技术还提供了一种CD7阳性单核细胞的分选方法，其包括下述步骤：
[0007](1)将骨髓细胞经红细胞裂解后，依次进行死细胞染色、抗体染色，得待测样品；
[0008]所述抗体包括CD7抗体、Cd11b抗体、Ly6G抗体、Ly6C抗体、IgG抗体；
[0009](2)基于死细胞染色结果，圈选单个细胞得到区域A，在区域A中的APC/Cy7
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Zombie/Cd11b门圈选Cd11b阳性的髓系细胞得到区域B，在区域B中的Ly6C/Ly6G门圈选Ly6G阴性Ly6C阳性的单核细胞得到区域C，在区域C的CD7门圈选CD7阳性单核细胞。
[0010]本专利技术中，所述骨髓细胞可取自肥胖小鼠经历饮食限制减重后的小鼠骨髓细胞；例如：高脂喂养5周后普食喂养3周的减重小鼠。
[0011]本专利技术中，所述骨髓细胞可采用下述方法获得：于无菌环境下取小鼠股骨、胫骨，使用1ml无菌注射器及无菌PBS冲洗骨髓腔收获骨髓细胞；使用1ml移液枪吹打分散骨髓细胞，经100μm细胞滤网过滤残渣，于4℃低温离心机800rpm离心5分钟，弃上清。
[0012]本专利技术中，所述红细胞裂解可采用下述方法进行：加入3ml红细胞裂解液，吹打分散骨髓细胞，室温孵育5分钟以充分裂解红细胞；5分钟后，加入等体积含1％胎牛血清的PBS
中止裂解，于4℃低温离心机800rpm离心5分钟，弃上清。
[0013]本专利技术中，所述死细胞染色可采用下述方法进行：加入PBS配制的死细胞染料室温孵育15分钟，加入含1％胎牛血清的PBS，于4℃低温离心机800rpm离心5分钟，弃上清。
[0014]本专利技术中，所述步骤(2)可包括下述步骤：使用FSC
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A/SSC门去除细胞碎片，在FSC
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A/FSC
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H门圈选单个细胞，在单个细胞的APC/Cy7
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Zombie/BV510
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Cd11b门圈选Cd11b阳性的髓系细胞，在Cd11b阳性的髓系细胞的PE/Cy7
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Ly6C/PE
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Ly6G门圈选Ly6G阴性Ly6C阳性的单核细胞，在Ly6G阴性Ly6C阳性的单核细胞的PE/Cy7
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Ly6C/FITC
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CD7门圈选CD7阳性单核细胞。
[0015]本专利技术还提供了一种采用上述的分选方法制得的CD7阳性单核细胞。
[0016]本专利技术还提供了一种CD7阳性单核细胞在制备治疗和/或预防肥胖相关代谢性疾病的药物中的应用。
[0017]本专利技术中，所述CD7阳性单核细胞可为采用前述分选方法制得的CD7阳性单核细胞。
[0018]本专利技术中，所述肥胖相关代谢性疾病可为营养过剩导致的体重增加代谢性疾病。
[0019]本专利技术中，所述肥胖相关代谢性疾病可为胰岛素抵抗代谢性疾病。
[0020]综上所述，由于采用了上述技术方案，本专利技术的有益效果是：
[0021]本专利技术中制备的CD7阳性单核细胞可有效抵抗营养过剩导致的体重增加、胰岛素抵抗等代谢功能紊乱，促进脂肪组织产热能力，抵抗机体体重反弹，并不引起机体炎症免疫反应。
[0022]具体地：
[0023](1)CD7阳性单核细胞可抵抗营养过剩导致的体重增加，提高机体的胰岛素耐量和葡萄糖耐量。
[0024](2)CD7阳性单核细胞可促进脂肪组织UCP1等产热基因的表达，提高机体呼吸代谢水平，促进机体的产热能力。
[0025](3)CD7阳性单核细胞注射后机体循环炎症因子水平无明显变化。
附图说明
[0026]图1为流式细胞分选骨髓来源CD7阳性单核细胞的圈门策略及不同饮食情况下CD7阳性单核细胞的比例。
[0027]图2为高脂喂养小鼠注射CD7阳性单核细胞后的体重、组织重量。
[0028]图3为高脂喂养小鼠注射CD7阳性单核细胞后的呼吸代谢水平。
[0029]图4为高脂喂养小鼠注射CD7阳性单核细胞后的胰岛素耐量和葡萄糖耐量。
[0030]图5为高脂喂养小鼠注射CD7阳性单核细胞后脂肪组织产热基因的表达情况。
[0031]图6为小鼠注射CD7阳性单核细胞后循环炎症因子水平。
具体实施方式
[0032]下面结合附图，对本专利技术作详细的说明。
[0033]为了使本专利技术实现的技术手段、创作特征、达成目的与功效易于明白了解，下面结合具体实施例和附图进一步阐述本专利技术。
[0034]下面将结合本专利技术实施例中的附图，对本专利技术实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本专利技术一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本专利技术保护的范围。
[0035]第一部分：
[0036]实施例1：CD7阳性单核细胞分选
[0037]骨髓细胞来源的CD7阳性单核细胞在肥胖小鼠经历饮食限制减重后显著扩增，因此选取该模型小鼠用于CD7阳性单核细胞分选。
[0038]具体方法如下：
[0039](1)收获骨髓细胞：于无菌环境下分别取普食喂养8周的小鼠、高脂喂养8周的小鼠及高脂喂养5周后普食喂养3周的减重小鼠的股骨、胫本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种CD7阳性单核细胞的分选方法，其特征在于，其包括下述步骤：(1)将骨髓细胞经红细胞裂解后，依次进行死细胞染色、抗体染色，得待测样品；所述抗体包括CD7抗体、Cd11b抗体、Ly6G抗体、Ly6C抗体、IgG抗体；(2)基于死细胞染色结果，圈选单个细胞得到区域A，在区域A中的APC/Cy7
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Zombie/Cd11b门圈选Cd11b阳性的髓系细胞得到区域B，在区域B中的Ly6C/Ly6G门圈选Ly6G阴性Ly6C阳性的单核细胞得到区域C，在区域C的CD7门圈选CD7阳性单核细胞。2.如权利要求1所述的CD7阳性单核细胞的分选方法，其特征在于，所述骨髓细胞取自肥胖小鼠经历饮食限制减重后的小鼠骨髓细胞。3.如权利要求1所述的CD7阳性单核细胞的分选方法，其特征在于，所述骨髓细胞采用下述方法获得：于无菌环境下取小鼠股骨、胫骨，使用1ml无菌注射器及无菌PBS冲洗骨髓腔收获骨髓细胞；使用1ml移液枪吹打分散骨髓细胞，经100μm细胞滤网过滤残渣，于4℃低温离心机800rpm离心5分钟，弃上清。4.如权利要求1所述的CD7阳性单核细胞的分选方法，其特征在于，所述红细胞裂解采用下述方法进行：加入3ml红细胞裂解液，吹打分散骨髓细胞，室温孵育5分钟以充分裂解红细胞；5分钟后，加入等体积含1％胎牛血清的PBS中止裂解，于4℃低温离心机800rpm离心5分钟，弃上清。5.如权利要求1所述的CD7阳性单核细胞的分选方法，其特征在于，所述死细胞染色采用下述方法进行：加入P...

【专利技术属性】
技术研发人员：罗湘杭，周海燕，冯旭，
申请(专利权)人：中南大学湘雅医院，
类型：发明
国别省市：