一种小立碗藓中DNA大片段的转化方法技术

本发明专利技术公开了一种小立碗藓中DNA大片段的转化方法。本发明专利技术提供了一种小立碗藓中DNA大片段的转化方法，包括如下步骤：采用聚乙二醇介导小立碗藓原生质体转化，依靠同源重组将外源目的DNA大片段整合入小立碗藓基因组预定位点；所述外源目的DNA大片段为50

【技术实现步骤摘要】
一种小立碗藓中DNA大片段的转化方法


[0001]本专利技术涉及生物
，具体涉及一种小立碗藓中DNA大片段的转化和替换内源序列方法。

技术介绍

[0002]小立碗藓(Physcomitrium patens)生长所需营养简单，容易培养；其配子体在生活史中占优势，对其突变体的表型可以进行直接研究；其核基因组易于与有同源片段的外源DNA发生高频率的同源重组，从而使得精确的基因破坏和基因敲除成为可能，为基因功能的研究提供了良好的材料。小立碗藓与高等陆生植物有很多相似特点，而小立碗藓的一些特性使得它比其他植物更易于进行分子生物学的研究。小立碗藓在国外已经成为植物分子生物学研究的模式生物。
[0003]同时，小立碗藓是合成生物学的底盘物种，可以作为重组治疗蛋白药物和具有商业价值的天然产物的异源表达底盘宿主。利用小立碗藓表达复杂产物需要转化大片段，但目前尚未有转化多基因大片段DNA的报道。

技术实现思路

[0004]本专利技术的目的是提供一种小立碗藓中DNA大片段的转化方法。
[0005]第一方面，本专利技术要求保护一本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种小立碗藓中DNA大片段的转化方法，包括如下步骤：采用聚乙二醇介导小立碗藓原生质体转化，依靠同源重组将外源目的DNA大片段整合入小立碗藓基因组上重组预定位点；所述外源目的DNA大片段为50
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100kb。2.根据权利要求1所述的转化方法，其特征在于：所述外源目的DNA大片段的两端与所述小立碗藓基因组上重组预定位点之间均具有1kb的上下游同源臂。3.根据权利要求1或2所述的转化方法，其特征在于：根据所述外源目的DNA大片段的序列以及位于所述小立碗藓基因组上重组预定位点上下游各1kb序列，得到小立碗藓同源重组DNA大片段的序列；所述小立碗藓同源重组DNA大片段的序列自上游到下游依次为所述小立碗藓基因组上重组预定位点上游1kb序列、所述外源目的DNA大片段的序列、所述小立碗藓基因组上重组预定位点下游1kb序列；然后制备得到所述小立碗藓同源重组DNA大片段。4.根据权利要求3所述的转化方法，其特征在于：在所述方法中，将所述小立碗藓同源重组DNA大片段转化小立碗藓原生质体，待转化后的小立碗藓原生质体再生后，先利用抗生素初步筛选出阳性株系，然后再进行基因型鉴定，最后进行全基因组测序分析，从而获得将所述外源目的DNA大片段整合入小立碗藓基因组上重组预定位点的重组小立碗藓。5.根据权利要求1
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4中任一所述的转化方法，其特征在于：所述方法中，所述外源目的DNA大片段整合入所述小立碗藓基因组上重组预定位点为如下任一：(B1)所述外源目的DNA大片段插入到所述小立碗藓基因组上重组预定位点；(B2)所述外源目的DNA大片段替换掉所述小立碗藓基因组上重组预定位点之间的天然序列。6.根据权利要求1
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【专利技术属性】
技术研发人员：焦雨铃，陈连阁，汪颖，
申请(专利权)人：中国科学院遗传与发育生物学研究所中国科学院大学，
类型：发明
国别省市：