一种利拉鲁肽注射液有关物质的HPLC测定方法技术

本发明专利技术公开一种利拉鲁肽注射液有关物质的HPLC测定方法，该方法采用磷酸二氢钾缓冲液

【技术实现步骤摘要】
一种利拉鲁肽注射液有关物质的HPLC测定方法


[0001]本专利技术涉及一种利拉鲁肽注射液有关物质的HPLC分析方法。

技术介绍

[0002]利拉鲁肽(Liraglutide)，化学名Arg34Lys26
‑
(N
‑
ε
‑
(γ
‑
Glu(N
‑
α
‑
十六酰基)))
‑
GLP
‑
1[7
‑
37]，是一种人胰高糖素样肽
‑
1(GLP
‑
1)类似物，用于治疗糖尿病。利拉鲁肽的活性由其与GLP
‑
1受体间特定的相互作用介导，导致环磷酸腺苷(cAMP)的增加。利拉鲁肽能够以葡萄糖浓度依赖的模式刺激胰岛素的分泌，同时以葡萄糖浓度依赖的模式降低过高的胰高糖素的分泌。因此，当血糖升高时，胰岛素分泌受到刺激，同时胰高糖素分泌受到抑制。与之相反，在低血糖时利拉鲁肽能够减少胰岛素分泌，且不影响胰高糖素的分泌。利拉鲁肽的降血糖机理还包括轻微延长胃排空时间。利拉鲁肽能够通过减轻饥饿感和能量摄入降低体重和体脂量。
[0003]利拉鲁肽注射液有关物质测定中，常见的杂质结构式如下：
[0004][0005]目前，未有利拉鲁肽注射液有关物质HPLC检测方法的报道及文献资料。因此，开发一种简单可行，能将利拉鲁肽及其存在的几种杂质依次洗脱且分离，并做定量分析的方法势在必行且具有重要的意义。

技术实现思路

[0006]本专利技术的目的在于针对现有技术的不足，提供一种测定利拉鲁肽注射液有关物质的HPLC分析方法。该方法利用梯度洗脱的高效液相色谱法，实现了有效的洗脱、分离和定量
利拉鲁肽注射液中的有关物质，使有关物质与主峰完全分离，分析速度快，检测效果好。
[0007]为达到上述目的，本专利技术采取以下技术方案：
[0008]一种利拉鲁肽注射液有关物质的HPLC测定方法：
[0009]所述利拉鲁肽及其有关物质的化学结构式如下：
[0010][0011][0012]所述HPLC测定方法的操作步骤如下：
[0013](1)待测样品溶液的制备
[0014]i溶液制备：将利拉鲁肽注射液用50％乙腈配制成浓度0.2mg/ml的溶液，通过色谱分析，得到图谱并进行分析，通过对样品溶液进行分析得到样品中利拉鲁肽的峰面积；
[0015]ii溶液制备：取i溶液用稀释液稀释成浓度为2μg/ml的对照溶液；
[0016](2)样品检测
[0017]采用C18色谱柱，流动相由流动相A和流动相B组成，其中，所述流动相A为磷酸二氢钾缓冲液和乙腈的混合溶液，所述流动相A中磷酸二氢钾缓冲液的浓度为0.01mol/L～0.1mol/L，用磷酸调pH为2.0～6.0，其中乙腈的体积分数为5％～25％；所述流动相B为乙腈和水的混合溶液，其中乙腈的体积分数为60％～100％。
[0018]梯度洗脱时间与流动相比例如下：
[0019][0020]流速为0.7～1.2ml/min，检测波长为205nm～254nm，柱温为30℃～60℃，取步骤(1)制备好的待测样品溶液i、ii分别注入HPLC，检测后得到图谱并进行分析，通过自身对照法得到样品中利拉鲁肽有关物质的含量。
[0021]本专利技术优选的技术方案如下：
[0022]1、本专利技术采用的检测波长为205nm～254nm，其中检测波长为254nm时，紫外吸收强度适中，故检测波长优先选择254nm。
[0023]2、本专利技术采用的缓冲盐溶液用磷酸调pH范围2.0～6.0，使用pH值为2.8时，分离度最高，故选择pH为2.8。
[0024]3、本专利技术的方法的流动相A中，乙腈的体积分数是5％～25％，优选乙腈的体积分数为20％，原因在于保证达到基线分离的前提下，使用乙腈体积分数20％的流动相进行样品测试可以使分析时间最短，提高分析效率。
[0025]4、本专利技术的方法的流动相B中，乙腈的体积分数是60％～100％，优选乙腈的体积分数为80％，原因在于保证达到基线分离的前提下，使用乙腈体积分数80％的流动相进行样品测试可以使分析时间最短，提高分析效率。
[0026]5、进一步，步骤(b2)所述的流动相梯度洗脱时间与流动相比例如下：
[0027][0028][0029]6、进一步，步骤(2)所述磷酸二氢钾缓冲液的浓度为0.02mol/L。
[0030]7、进一步，步骤(2)所述流动相的流速为1ml/min。
[0031]8、进一步，步骤(2)所述的柱温为30℃。
[0032]9、最优选测定方案的相关参数是：
[0033]HPLC仪：赛默飞U3000
[0034]色谱柱：Thermo Acclain AmG C18 4.6x150mm 3um
[0035]流动相：以磷酸二氢钾溶液(取磷酸二氢钾置烧杯中，加水700ml溶解，加乙腈200ml混匀，用磷酸调pH至2.8，加水100ml，混匀，过滤，脱气)为流动相A，乙腈：水(80：20)为流动相B。
[0036]检测波长：254nm。
[0037]流速：1ml/min。
[0038]柱温：30℃。
[0039]与现有技术相比，本专利技术具有以下有益效果：
[0040]本专利技术能够有效的分析利拉鲁肽注射液：以磷酸二氢钾缓冲液
‑
乙腈作为流动相，在适当的紫外检测波长和流速下，通过主成分自身对照法测定利拉鲁肽注射液的有关物质。该方法能够使有关物质很好的达到基线分离，能够准确测定利拉鲁肽有关物质的含量。该方法简单、快速、准确、高效，重现性好，为利拉鲁肽注射液质量标准的制定建立了良好的基础。
附图说明
[0041]图1为本专利技术实施例1中流动相B乙腈体积分数为90％系统适用性溶液色谱图；
[0042]图2为本专利技术实施例2中流动相B乙腈体积分数为70％系统适用性溶液色谱图；
[0043]图3为本专利技术实施例3中柱温35℃系统适用性溶液色谱图。
具体实施方式
[0044]以下通过具体实例对本专利技术作进一步的说明，但本专利技术的保护内容不局限于以下实施实例。
[0045]以下实施实例中所使用的仪器和药品如下：
[0046]HPLC仪为赛默飞U3000，紫外检测器，变色龙色谱工作站，色谱柱为Thermo Acclain AmG C18 4.6x150mm 3um，电子分析天平(赛多利斯，十万分之一)，超纯水系统(密理博)，利拉鲁肽注射液，利拉鲁肽对照品，磷酸二氢钾，乙腈。
[0047]实施例1：
[0048]取利拉鲁肽注射液适量，用50％乙腈配制0.2mg/ml的利拉鲁肽注射液供试品溶液。
[0049]采用Thermo Acclain AmG C18 4.6x150mm 3um为色谱柱，以磷酸二氢钾溶液(取磷酸二氢钾置烧杯中本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种利拉鲁肽注射液有关物质的HPLC测定方法，其特征在于：所述利拉鲁肽及其有关物质的化学结构式如下：关物质的化学结构式如下：所述HPLC测定方法的操作步骤如下：(1)待测样品溶液的制备i溶液制备：将利拉鲁肽注射液用50％乙腈配制成浓度0.2mg/ml的溶液，通过色谱分析，得到图谱并进行分析，通过对样品溶液进行分析得到样品中利拉鲁肽的峰面积；ii溶液制备：取i溶液用稀释液稀释成浓度为2μg/ml的对照溶液；(2)样品检测
采用C18色谱柱，流动相由流动相A和流动相B组成，其中，所述流动相A为磷酸二氢钾缓冲液和乙腈的混合溶液，所述流动相A中磷酸二氢钾缓冲液的浓度为0.01mol/L～0.1mol/L，用磷酸调pH为2.0～6.0，其中乙腈的体积分数为5％～25％；所述流动相B为乙腈和水的混合溶液，其中乙腈的体积分数为60％～100％。梯度洗脱时间与流动相比例如下：流速为0.7～1.2ml/min，检测波长为205nm～254nm，柱温为3...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈帅，常东明，王雨晴，
申请(专利权)人：江苏诺泰澳赛诺生物制药股份有限公司，
类型：发明
国别省市：