可利霉素在体外CAR/TCR-T细胞产品制备过程优化中的应用制造技术

本发明专利技术涉及遗传改造T细胞药物技术领域，具体涉及可利霉素在体外CAR/TCR

【技术实现步骤摘要】
可利霉素在体外CAR/TCR
‑
T细胞产品制备过程优化中的应用


[0001]本专利技术涉及遗传改造T细胞药物
，具体涉及可利霉素作为体外T细胞增殖活化抑制剂、遗传改造T细胞制剂以及肿瘤治疗药物的应用，更具体地涉及可利霉素在体外CAR/TCR
‑
T细胞产品制备过程优化中的应用。

技术介绍

[0002]近年来，嵌合抗原受体修饰的T细胞（Chimeric antigen receptor modified T cells, CAR
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T）疗法或T细胞受体修饰的T细胞（T cell receptor modified T cells, TCR
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T）疗法已成为一种热门的肿瘤免疫治疗手段。T细胞功能状态对CAR
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T/TCR
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T细胞治疗效果有重要影响，而大多数肿瘤病人由于长期处于肿瘤负荷状态或接受过放化疗，体内T细胞在功能处于抑制或免疫耐受等情况。
[0003]除了肿瘤患者T细胞活性问题之外，T细胞耗竭也是CAR
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T/TCR
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T细胞治疗中需要关注的问题。T细胞耗竭是指在机体长期处于肿瘤负荷或病毒感染状态或者不利的体外培养环境下，T细胞免疫功能进行性丧失，表现为增殖杀伤能力和细胞因子分泌水平均降低，而免疫抑制性受体分子表达升高。T细胞在体外刺激活化、病毒介导的CAR修饰及扩增过程中，持续受到胞内活化信号的刺激，其耗竭过程比正常T细胞快，而CAR
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T/TCR
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T细胞的快速耗竭将导致体内扩增维持时间变短，肿瘤细胞杀伤能力减弱，从而使病人对治疗反应不佳。
[0004]除此之外，常规的CAR
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T/TCR
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T细胞制备流程也会影响T细胞的CD4
+
/CD8
+
比例。T细胞需要在体外刺激，活化和扩增，由于CD8
+
T细胞的增殖速度明显快于CD4
+
T细胞，使得CD4/CD8比例降低，而CD4
+
/CD8
+
比例均衡性对T细胞发挥良好的抗肿瘤作用至关重要，有研究表明CD8
+
T细胞虽然具有直接的肿瘤杀伤作用，但如果缺少CD4
+
T细胞，会导致CD8
+
T细胞快速耗竭，功能减弱，影响CAR
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T/TCR
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T细胞在后续回输回体内后的扩增和抗肿瘤作用。
[0005]由于目前临床上使用的CAR
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T/TCR
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T细胞大部分来源于肿瘤病人自体T细胞修饰改造，其T细胞功能往往较差，导致CAR
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T/TCR
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T细胞疗法的效果不佳。因此，如何逆转T细胞耗竭状态、保证T细胞免疫疗法在临床治疗中发挥更长效稳定的抗肿瘤作用，研究T细胞的重新激活、克隆性增生、提高其肿瘤浸润能力及肿瘤细胞杀伤能力等成为领域热点。

技术实现思路

[0006]本专利技术意在提供可利霉素在制备遗传改造T细胞制剂中的应用，以解决由于T细胞活性和T细胞耗竭等因素造成的CAR
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T/TCR
‑
T细胞疗法的治疗效果不理想的技术问题。
[0007]为达到上述目的，本专利技术采用如下技术方案：可利霉素在制备遗传改造T细胞制剂中的应用。
[0008]进一步，所述遗传改造T细胞为CAR
‑
T细胞或者TCR
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T细胞。
[0009]进一步，可利霉素添加于遗传改造T细胞的体外培养体系中。
[0010]进一步，可利霉素在体外培养体系中的工作浓度为1.25μM
‑
5μM。
[0011]进一步，体外培养体系为含有可利霉素、IL
‑
7、IL
‑
15、青链霉素双抗、FBS的淋巴细
胞培养基。
[0012]本技术方案还提供了一种可利霉素在制备肿瘤治疗药物中的应用，所述肿瘤治疗药物包括经过体外培养的遗传改造T细胞，体外培养的环境中含有1.25μM
‑
5μM可利霉素；所述肿瘤为血液瘤或者实体瘤。
[0013]进一步，所述可利霉素用于减缓遗传改造T细胞的耗竭，提升CD4
+
T细胞和CD8
+
T细胞的比例，以及提升中央记忆性T细胞群比例。
[0014]遗传改造T细胞（例如，CAR
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T细胞或者TCR
‑
T细胞）在回输生物体之前的体外培养阶段，如果在培养过程中加入一定量的可利霉素，可以减缓遗传改造T细胞的耗竭进程。具体体现在遗传改造T细胞的增殖速度减缓、细胞因子分泌增加、免疫抑制性受体的表达水平受到抑制、体内以及体外肿瘤杀伤效果提升、细胞回输之后的存活率提升等。除此之外，体外培养阶段的可利霉素处理，还可以提升CD4
+
T细胞和CD8
+
T细胞的比例，使其更接近于体内正常生理水平，降低了由于制备遗传改造T细胞的过程所带来的不同亚型细胞比例失调的负面影响。并且，体外培养阶段的可利霉素处理还可以提升中央记忆性T细胞群比例，进一步提高遗传改造T细胞的治疗效果。其中，遗传改造T细胞为现有技术的成熟技术，已经广泛应用于临床治疗，在此不再进行赘述。
[0015]本技术方案还提供了一种可利霉素在制备遗传改造T细胞的耗竭抑制剂的应用。
[0016]进一步，所述可利霉素为遗传改造T细胞的增殖抑制剂、遗传改造T细胞的细胞因子分泌促进剂、遗传改造T细胞的免疫抑制性受体的抑制剂、遗传改造T细胞的肿瘤杀伤效果促进剂。
[0017]本技术方案还提供了一种可利霉素在制备体外T细胞增殖活化抑制剂中的应用。
[0018]可利霉素不但用于制备医药用途的制剂的中间过程，还可以用于基础研究中，作为一种工具试剂，避免T细胞耗竭、减缓T细胞增殖活化，进而研究相关的作用机制以及疾病的发生发展进程。
[0019]本技术方案的原理如下：在CAR
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T/TCR
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T细胞治疗的实践操作中，需要取生物体体内的T细胞（例如，来源于人体外周血，分离收集所有的CD3
+
T淋巴细胞，即全T淋巴细胞）。然后，对T细胞进行体外培养和遗传改造，获得CAR
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T/TCR
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T细胞。获得的CAR
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T/TCR
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T细胞再经过体外培养，形成状态相对稳定的细胞，再回输到生物体中，实现抗肿瘤作用（血液瘤、实体瘤等）。T细胞在体外刺激活化、病毒介导的CAR和TCR修饰及扩增过程中，持续受到胞内活化信号的刺激，其耗竭过程比未经修饰的T细胞快，CAR
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T/TCR
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T细胞相对于普通T细胞的CD4
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.可利霉素在制备遗传改造T细胞制剂中的应用。2.可利霉素在制备遗传改造T细胞制剂中的应用，其特征在于，所述遗传改造T细胞为CAR
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T细胞或者TCR
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T细胞。3.根据权利要求2所述的可利霉素在制备遗传改造T细胞制剂中的应用，其特征在于：可利霉素添加于遗传改造T细胞的体外培养体系中。4.根据权利要求3所述的可利霉素在制备遗传改造T细胞制剂中的应用，其特征在于：可利霉素在体外培养体系中的工作浓度为1.25μM
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5μM。5.根据权利要求4所述的可利霉素在制备遗传改造T细胞制剂中的应用，其特征在于：体外培养体系为含有可利霉素、IL
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7、IL
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15、青链霉素双抗、FBS的淋巴细胞培养基。6.可利霉素在制备遗传改造T细胞...

【专利技术属性】
技术研发人员：胡以国，孙媛媛，王嘉欣，
申请(专利权)人：成都以邦医药科技有限公司，
类型：发明
国别省市：