花生叶片DNA微量快速提取方法技术

本发明专利技术提供一种花生叶片基因组ＤＮＡ提取方法，该方法包括如下步骤：（１）在无菌花生叶片中滴入０．４～０．６ｍＬ液氮后将叶片捣碎，并加入０．２～０．３ｍＬ提取液；（２）加入适量浓度为２０％的ＳＤＳ（Ｗ／Ｖ）后轻缓摇动离心管，此步骤的目的是使细胞破裂释放ＤＮＡ。将所得产物进行温育；（３）加入适量的经４℃预冷处理的ＫＡｃ缓冲液，混合均匀后进行第一次离心分离；（４）将所得上清液加入－２０℃预冷２ｈｒ－３ｈｒ的异丙醇，混合均匀后在冰冻条件下放置１５～２５分钟；（５）将上一步骤所得上清液进行第二次离心分离以沉淀核酸，其中所述第二次离心分离的条件与第一次相同；离心后用预冷５小时以上的乙醇漂洗沉淀，漂洗后干燥沉淀，随后用适量ＴＥ溶液干燥沉淀。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及农业
，尤其涉及一种花生叶片DNA微量快速提 取方法。
技术介绍
花生是世界最重要的油料作物之一，在我国花生生产发展迅速，总产量 已经位居世界首位。花生种质基础有限，抗病资源缺乏，同时花生生产也一 直受多种病虫害的危害，导致产量和品质下降。进行花生遗传改良，培育新 的抗虫抗病品种具有重要意义。系统育种，杂交育种，诱变育种都不能有目 的创新，而基因工程技术育种可以任意选择生产上的当家品种进行外源基因 的导入，达到目的性状基因的转移，可目标明确的达到种质改良的目的。建立高效植抹再生体系技术是植物基因工程的关键环节之一。花生组织 培养，国外从40年代开始研究，我国从70年代开始，已在花生营养和生殖 器官建立了多种成熟的再生体系，为花生分子育种和品种改良提供了可靠的 技术基础。遗传转化技术通过将特定的外源基因引入到受体细胞，并使其定 向稳定地转化从而超越物种的限制，实现基因的交流，产生具有特定性状的 转基因植物，是对传统的植物育种方法的补充，也是进一步实现作物产量提 高、抗性增强和品质改善的最大希望所在。花生基因转化的基本技术环节是 分离目的基因，构建重组载体，导入外植本文档来自技高网...

【技术保护点】
本专利技术提供一种快速、高效、简便的花生叶片基因组ＤＮＡ提取方法，该方法包括如下步骤：　（１）将无菌花生叶片置于离心管中，滴入０．４～０．６ｍＬ液氮后将叶片捣碎，加入０．２～０．３ｍＬ提取液并混合均匀；　（２）加入适量浓度为２０％的 ＳＤＳ（Ｗ／Ｖ）后轻缓摇动离心管，将所得产物进行温育；　（３）加入适量的经预冷处理的醋酸钾缓冲液，混合均匀后进行第一次离心分离；　（４）将所得上清液加入预冷的异丙醇，混合均匀后在冰冻条件下放置１５～２５分钟；　（５）将上一 步骤所得上清液进行第二次离心分离以沉淀核酸，其中所述第二次离心分离的条件与第一次相同；...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：单世华，万书波，李春娟，张廷婷，闫彩霞，
申请(专利权)人：山东省花生研究所，
类型：发明
国别省市：95[中国|青岛]