一种特异性结合盐酸文拉法辛小分子的核酸适配体及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一种特异性结合盐酸文拉法辛小分子的核酸适配体及其应用，包括SEQ IDNo.1所示的核苷酸序列；或者，与SEQ ID No.1核苷酸序列具有高同源性并且能够特异性结合盐酸文拉法辛小分子的核苷酸序列；或者由SEQ ID No.1所示的核苷酸序列衍生的能够特异性结合盐酸文拉法辛小分子的核苷酸序列。本发明专利技术提供了一种具有高度特异性、化学性质稳定、易于保存和标记的能够结合盐酸文拉法辛小分子的核酸适配体及其衍生物，还相应提供所述核酸适配体的筛选方法与应用。配体的筛选方法与应用。配体的筛选方法与应用。

【技术实现步骤摘要】
一种特异性结合盐酸文拉法辛小分子的核酸适配体及其应用


[0001]本专利技术属于分子生物学
，涉及核酸适配体，尤其涉及一种特异性结合盐酸文拉法辛小分子的核酸适配体及其应用。

技术介绍

[0002]盐酸文拉法辛化学名为1
‑
[2
‑
(二甲胺基)
‑1‑
(4
‑
甲氧基苯基)乙基]环已醇盐酸盐，是一种通过抑制5
‑
羟色胺和去甲肾上腺素的再摄取而达到抗抑郁作用的抗重度抑郁药。
[0003]文拉法辛作为新型的抗抑郁药，在临床上能有效治疗抑郁症和焦虑症谱系疾病，以及慢性疼痛等，已广泛用于抑郁症、焦虑症、强迫症、儿童多动症、酒依赖、躯体形式障碍、精神分裂症、成人恐慌症后抑郁、性功能障碍等的治疗。该药治疗抑郁症安全、有效，患者依从性好，这有利于抑郁症患者的长期维持性治疗。虽然少数患者可出现失眠，但加用小剂量镇静催眠药后，一般能得到明显改善。该药与其他抗抑郁药物相比具有明显优势，尤其对较严重的抑郁症以及焦虑症状有更好的疗效，并且起效较快，已成为治疗抑郁症的一线药物。
[0004]文拉法辛口服后主要从胃肠道吸收，且吸收迅速而良好。单剂量口服可被吸收92％，口服生物利用度为40％～45％，提示文拉法辛口服之后有明显的首过效应。在体内主要通过肝脏细胞色素P450酶代谢，原药及其代谢物O
‑
去甲基文拉法辛主要经肾脏排泄，约92％由尿液中排出，1.9％由粪便排出。文拉法辛和O
‑
去甲基
‑<br/>文拉法辛的表观清除半衰期分别为5
±
2和11
±
2h，表观分布容积分别为7.5
±
3.7和5.7
±
1.8L/kg。多次给药3d内可达稳态血药浓度。进食不影响药物的吸收。文拉法辛及O
‑
去甲基文拉法辛与血浆蛋白的结合率很小，分别为27％和30％。在肌酐清除率＜30mL/min的肾病病人中，使用此品时应注意调整剂量，对中度肾功能不全者，剂量应减少50％；轻、中度肾功能不全者，剂量应减少25％。对肝功能损害者也必须减少剂量或者进行个体化剂量给药。
[0005]因此，针对不同的人群，需要合理用药，体内药物浓度检测成了重要的一环，目前主要检测手段是HPLC法，样品需要比较复杂的处理，且比较耗费时间，成本较高。
[0006]核酸适配体(aptamer)是指通过指数富集的配基系统进化技术(SELEX)筛选分离得到的DNA或者RNA分子，它可以与其他靶标如蛋白质、金属离子、小分子、多肽甚至整个细胞进行高亲和力和特异性的结合，因此在生化分析，环境监测，基础医学，新药合成等方面展示广阔的前景。核酸适配体与抗体相比分子量小，稳定性更好，易改造修饰，无免疫原性，制作周期短，可以通过人工合成等优势，免去了动物免疫、饲养、蛋白提取和纯化等一系列流程。
[0007]主要缺陷在于：盐酸文拉法辛作为一种抗抑郁药物，其血药浓度和用法用量对于病人来说都是极其重要的，准确测量不同病人在不同用药时间内的血药浓度可以帮助病人准确和合理用药，大大提高药物的作用并降低副作用。目前临床上检测盐酸文拉法辛含量主要是HPLC法等。操作比较复杂，不适于高通量检测，成本也比较高，前处理相对麻烦。

技术实现思路

[0008]为了克服现有技术的不足，本专利技术的目的是一种特异性结合盐酸文拉法辛小分子的核酸适配体及其应用，本专利技术筛选获得高亲和力，高特异性的盐酸文拉法辛核酸适配体，可为盐酸文拉法辛的检测提供一种新的策略，取代传统方法，降低成本，提高盐酸文拉法辛检测结果的准确性和可靠性，利用多种检测平台检测，对病人精准用药具有很大的意义。
[0009]为了实现上述目的，本专利技术采用以下技术方案：
[0010]本专利技术提供了一种特异性结合盐酸文拉法辛小分子的核酸适配体，包括SEQ ID No.1所示的核苷酸序列；或者，与SEQ ID No.1核苷酸序列具有高同源性并且能够特异性结合盐酸文拉法辛小分子的核苷酸序列；或者由SEQ ID No.1所示的核苷酸序列衍生的能够特异性结合盐酸文拉法辛小分子的核苷酸序列；SEQ ID No.1：CTGGCACTTCACGCATAGAGCCACGCGCACGCGTCCGGCCTCTGGATGTTCCGTTCCTATGCGTGCTACCGTGAAG。
[0011]作为本专利技术的一种优选方案，所述具有高同源性是指与SEQ ID No.1所示的核苷酸序列至少60％、至少70％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％或至少99％的同源性。
[0012]作为本专利技术的一种优选方案，所述核酸适配体包含与所述核苷酸序列互补的核苷酸序列并且保持亲和力。
[0013]作为本专利技术的一种优选方案，所述核酸适配体的核苷酸序列包含碱基修饰并且保持亲和力。
[0014]作为本专利技术的一种优选方案，所述碱基修饰为硫代修饰、磷酸化修饰、甲基化修饰、氨基化修饰、巯基化修饰、硒取代氧修饰或连接同位素修饰。
[0015]本领域技术人员应该理解，作为对上述技术方案的改进，可对上述核酸适配体的核苷酸序列上的某一位置进行修饰，例如，磷酸化、甲基化、氨基化、巯基化、用硫取代氧、用硒取代氧或连接同位素化等，条件是这样修饰后得到的核酸适配体序列具有合乎需要的性质，例如，可以具有与修饰前的母体核酸适配体序列相等或更高的结合盐酸文拉法辛小分子的亲和力，或虽然亲和力没有明显提升但是具有更高的稳定性。
[0016]作为本专利技术的一种优选方案，所述核酸适配体的核苷酸序列包含标记物并且保持亲和力。
[0017]作为本专利技术的一种优选方案，所述标记物为荧光标记物，放射性标记物、治疗性标记物、生物素标记物、地高辛标记物、纳米发光材料标记物、小肽标记物、siRNA标记物或酶标记物。
[0018]本领域技术人员应该理解，作为对上述技术方案的改进，可在上述核酸适配体的核苷酸序列上连接荧光物质，放射性物质、治疗性物质、生物素、地高辛、纳米发光材料、小肽、siRNA或酶标记等，条件是这样修饰后得到的核酸适配体序列具有合乎需要的性质，例如，可以具有与修饰前的母体核酸适配体序列相等或更高的结合盐酸文拉法辛小分子的亲和力，或虽然亲和力没有明显提升但是具有更高的稳定性。
[0019]本专利技术还提供了上述的特异性结合盐酸文拉法辛小分子的核酸适配体的应用，利用所述特异性结合盐酸文拉法辛小分子的核酸适配体检测盐酸文拉法辛小分子。
[0020]本专利技术还提供了包含上述特异性结合盐酸文拉法辛小分子的核酸适配体的检测试剂盒。
[0021]与现有技术相比，本专利技术具有以下有益效果：
[0022]1)核酸适配体与抗体相比分子量小，稳定性更好，易改造修饰，无免疫原性，制作周期短，可以通过人工合成等优势，免去了动物免疫、饲养、蛋白提取和纯化等一系列流程，因此核酸适配体是一种非常理想的分子探针。针对于盐酸文拉法辛小分子的核酸适配体还没有人公布且没有本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种特异性结合盐酸文拉法辛小分子的核酸适配体，其特征在于，包括SEQ ID No.1所示的核苷酸序列；或者，与SEQ ID No.1核苷酸序列具有高同源性并且能够特异性结合盐酸文拉法辛小分子的核苷酸序列；或者由SEQ ID No.1所示的核苷酸序列衍生的能够特异性结合盐酸文拉法辛小分子的核苷酸序列；SEQ ID No.1：CTGGCACTTCACGCATAGAGCCACGCGCACGCGTCCGGCCTCTGGATGTTCCGTTCCTATGCGTGCTACCGTGAAG。2.根据权利要求1所述的一种特异性结合盐酸文拉法辛小分子的核酸适配体，其特征在于，所述具有高同源性是指与SEQ ID No.1所示的核苷酸序列至少60％、至少70％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％或至少99％的同源性。3.根据权利要求1或2所述的一种特异性结合盐酸文拉法辛小分子的核酸适配体，其特征在于，所述核酸适配体包含与所述核苷酸序列互补的核苷酸序列并且保持亲和力。4.根据权利要求1或2所述的一种特异性结合盐酸文拉法辛小分子的核酸适配体，其...

【专利技术属性】
技术研发人员：高强，牛成镇，吴超超，朱建国，
申请(专利权)人：杭州佰辰医学检验所有限公司，
类型：发明
国别省市：