编码寨卡病毒抗原肽的mRNA、基于其的mRNA疫苗及其制备方法技术

本发明专利技术提供了一种编码寨卡病毒抗原肽的mRNA、编码寨卡病毒抗原肽的mRNA构建体、生产该mRNA的重组表达质粒以及基于该mRNA的针对寨卡病毒的mRNA疫苗及其制备方法；本发明专利技术的针对寨卡病毒的mRNA疫苗不仅能够避免FL表位抗体的诱导产生，从而可显著降低或者消除ADE效应，还能够产生高于其他疫苗载体平台的、高水平的中和抗体，从而可有效地预防或治疗寨卡病毒感染性疾病，具有较好的临床应用价值和前景。景。

【技术实现步骤摘要】
编码寨卡病毒抗原肽的mRNA、基于其的mRNA疫苗及其制备方法


[0001]本专利技术涉及生物医药
，具体涉及编码寨卡病毒抗原肽的mRNA、基于其的mRNA疫苗及其制备方法。

技术介绍

[0002]寨卡热(Zika fever)是由寨卡病毒(Zika virus，ZIKV)引起的经蚊媒传播的一种病毒性疾病。1947年在乌干达的恒河猴血清中发现了ZIKV，1952年乌干达及坦桑尼亚出现人感染寨卡病毒的病例。孕妇怀孕期间感染ZIKV会影响胎盘功能，导致小头畸形、流产等。成人感染寨卡病毒会引发格林
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巴利综合征。2015
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2016年，巴西发生寨卡热大流行，相继造成44
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150万人感染ZIKV，WHO已将该病毒感染列为国际紧急卫生事件。
[0003]ZIKV是一种虫媒病毒，属于黄病毒科(Flaviviridae)黄病毒属(Flavivirus)，为单股正链RNA病毒。ZIKV基因组约10.7kb,编码3423个氨基酸。黄病毒属病毒可诱导免疫交叉反应，具有相似的免疫原表位。这种交叉反应有些是有益的，会引起交叉保护。然而，有些抗体交叉反应可通过非中和或者亚中和抗体介导感染增强效应(即，ADE效应)，从而加重疾病。引起ADE反应的抗体主要是由病毒的囊膜蛋白(Envelope，E)蛋白的融合肽(fusion loop，FL)在病毒感染过程中，诱导免疫细胞产生的针对FL的抗体。ZIKV和登革病毒(DENV)具有相似的遗传组成和抗原特性，ZIKV感染后产生的抗体会引发对DENV的ADE效应，给疫苗开发带来了严峻的挑战。
[0004]目前处于I/II期临床试验的候选ZIKV疫苗包括灭活病毒疫苗、病毒载体疫苗，亚单位蛋白疫苗、核酸DNA
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RNA疫苗，以及基于蚊子唾液抗体的疫苗，但迄今尚无开发消除ZIKV的ADE表位的疫苗进入临床实验研究开发的报道。
[0005]前期我们开发了消除ZIKV的FL表位的腺病毒载体疫苗，其能够有效预防ZIKV感染，同时没有产生对DENV的ADE反应。在COVID
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19大流行情况下，多平台疫苗途径得到快速发展。数据显示，牛津大学/阿斯利康腺病毒载体疫苗ChAdOx1
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S对COVID
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19保护效率为70％，BioNTech的mRNA疫苗(BNT162b2)和Moderna的mRNA疫苗(mRNA
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1273)对COVID
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19保护效率为94％左右。mRNA疫苗是一种新型疫苗平台，仅需要病毒基因序列信息就能开发应用，是对抗大流行病和其他传染病的一种重要新工具。mRNA疫苗的作用机理是将病毒mRNA片段插入人体细胞中，通过重编程产生病原体抗原，然后激发针对病原体的适应性免疫反应；mRNA分子通常被固定在脂质纳米颗粒等药物输送载体中，以保护脆弱的mRNA分子，并帮助其被人体细胞吸收。与传统蛋白疫苗相比，RNA疫苗的优势在于生产速度快、成本低，可诱导细胞免疫以及体液免疫，但需要冷链配送和低温储存。因此，本领域急需开发一种使用mRNA技术路线的、能够消除对DENV的ADE反应的新型寨卡病毒疫苗。
[0006]公开于该
技术介绍
部分的信息仅仅旨在增加对本专利技术的总体背景的理解，而不应当被视为承认或以任何形式暗示该信息构成已为本领域一般技术人员所公知的现有技术。

技术实现思路

[0007]为克服上述现有技术中存在的问题，本专利技术提供了一种编码寨卡病毒抗原肽的mRNA，其mRNA构建体、重组表达质粒，及其在制备用于预防或/或治疗寨卡病毒感染性疾病的疫苗、优选mRNA疫苗中的应用，以及基于前述mRNA或mRNA构建体的针对寨卡病毒的mRNA疫苗及其制备方法。
[0008]具体地，本专利技术提供了以下技术方案：
[0009]第一方面，本专利技术提供了一种编码寨卡病毒抗原肽的mRNA，所述mRNA具有如SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:2所示的mRNA序列，或者，其由如SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:4所示的DNA转录而成。
[0010]换句话说，如SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:2所示的mRNA序列可由如SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:4所示的DNA转录而成。
[0011]第二方面，本专利技术提供了一种编码寨卡病毒抗原肽的mRNA构建体，所述mRNA构建体包含如上述第一方面所述的mRNA，以及选自以下的一种或多种元件：5
’
端UTR区、3
’
端UTR区、5
’
末端帽结构、3
’
末端PolyA尾和信号肽序列。
[0012]在优选的具体实施方案中，所述5
’
端UTR区具有如SEQ ID NO:5所示序列；
[0013]在优选的具体实施方案中，所述3
’
端UTR区具有如SEQ ID NO:6所示序列；
[0014]在优选的具体实施方案中，所述5
’
末端帽结构为m7G(5
’
)ppp；
[0015]在优选的具体实施方案中，所述3
’
末端PolyA尾为80～200个A；
[0016]在优选的具体实施方案中，所述信号肽序列如SEQ ID NO:7所示。
[0017]第三方面，本专利技术提供了一种生产如上述第一方面所述的mRNA的重组表达质粒，所述重组表达质粒包括质粒骨架序列和编码寨卡病毒抗原肽的DNA序列。
[0018]作为优选，所述编码寨卡病毒抗原肽的DNA序列如SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:4所示；
[0019]作为优选，所述质粒骨架序列包括T7启动子序列、5
’
端UTR区、信号肽序列、3
’
端UTR区、5
’
末端帽结构和3
’
末端PolyA尾；
[0020]在优选的具体实施方案中，所述5
’
端UTR区具有如SEQ ID NO:5所示序列；
[0021]在优选的具体实施方案中，所述3
’
端UTR区具有如SEQ ID NO:6所示序列；
[0022]在优选的具体实施方案中，所述5
’
末端帽结构为m7G(5
’
)ppp；
[0023]在优选的具体实施方案中，所述3
’
末端PolyA尾为80～200个A；
[0024]在优选的具体实施方案中，所述信号肽序列如SEQ ID NO:7所示。
[0025]第四方面，本专利技术提供了如上述第一方面所述的mRNA、如上述第二方面所述的mRNA构建体或者如上述第三方面所述的重组表达质粒在制备用于预防和/或治疗寨卡病毒感染性疾病的疫苗、优选mRNA疫苗中的应用。
[0026]第五方面，本专利技术提供了一种针对寨卡病毒的mRNA疫本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种编码寨卡病毒抗原肽的mRNA，其特征在于，所述mRNA具有如SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:2所示的mRNA序列，或者，其由如SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:4所示的DNA转录而成。2.一种编码寨卡病毒抗原肽的mRNA构建体，其特征在于，所述mRNA构建体包含如权利要求1所述的mRNA，以及选自以下的一种或多种元件：5
’
端UTR区、3
’
端UTR区、5
’
末端帽结构、3
’
末端PolyA尾和信号肽编码序列。3.根据权利要求2所述的mRNA构建体，其特征在于，所述5
’
端UTR区具有如SEQ ID NO:5所示序列；和/或，所述3
’
端UTR区具有如SEQ ID NO:6所示序列；和/或，所述5
’
末端帽结构为m7G(5
’
)ppp；和/或，所述3
’
末端PolyA尾为80～200个A；和/或，所述信号肽编码序列如SEQ ID NO:7所示。4.一种生产如权利要求1所述的mRNA的重组表达质粒，其特征在于，所述重组表达质粒包括质粒骨架序列和编码寨卡病毒抗原肽的DNA序列。5.根据权利要求4所述的重组表达质粒，其特征在于，所述编码寨卡病毒抗原肽的DNA序列如SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:4所示；和/或，所述质粒骨架序列包括T7启动子序列、5
’
端UTR区、信号肽序列、3
’
端UTR区、5
’
末端帽结构和3
’
末端PolyA尾；优选地，所述5
’
端UTR区具有如SEQ ID NO:5所示序列；优选地，所述3
’
端UTR区具有如SEQ ID NO:6所示序列；优选地，所述5
’
末端帽结构为m7G(5
’
)ppp；优选地，所述3
’
末端P...

【专利技术属性】
技术研发人员：高福，戴连攀，徐坤，杨晨曦，韩雨旋，
申请(专利权)人：中国科学院微生物研究所，
类型：发明
国别省市：