本发明专利技术提供一种植物提取物与玉米源多肽制备的护肝组合物，其中所述的多肽是将玉米渣用碱性蛋白酶和无花果蛋白酶进行酶解，酶解产物进行离心、脱色后干燥制备的；所述的碱性蛋白酶和无花果蛋白酶的酶活比为2:1；所述的酶解产物的分子量为500
【技术实现步骤摘要】
ID NO:1)；
[0010]本专利技术还提供所制备的多肽的一种用途，是作为饲料添加剂的应用；
[0011]本专利技术还提供所制备的多肽的一种用途，是在制备用于保护鱼类肝脏的制品中的应用。
[0012]本专利技术再一个方面还提供一种用于保护鱼类肝脏的组合物，所述的组合物中包含有所述的多肽；
[0013]更进一步的，所述的组合物中还包含有植物提取物；所述的植物提取物，是罗布麻、甘草和乌梅的水提取物。
[0014]本专利技术所提供的多肽具有保护鱼类肝脏的功效，而与植物提取物联合使用，能在更少用量的情况下达到高浓度的功效。
附图说明
[0015]图1：玉米多肽不同分离组分处理后斑马鱼幼鱼肝脏形态及肝区荧光变化图，其中Ctl为对照组，MC为造模组；
[0016]图2：玉米多肽HPLC图谱；
[0017]图3：玉米护肝肽HPLC图谱；
[0018]图4：玉米多肽T1处理后斑马鱼幼鱼肝脏形态及肝区荧光变化图，其中Ctl为对照组，MC为造模组；
[0019]图5：不同浓度T1处理后斑马鱼幼鱼肝脏形态及肝区荧光变化图，其中Ctl为对照组，MC为造模组；
[0020]图6：不同浓度Y1处理后斑马鱼幼鱼肝脏形态及肝区荧光变化图，其中Ctl为对照组，MC为造模组；
[0021]图7：不同浓度Y2处理后斑马鱼幼鱼肝脏形态及肝区荧光变化图，其中Ctl为对照组，MC为造模组；
[0022]图8：不同处理组斑马鱼肝脏相对荧光面积，其中*p＜0.05、**p＜0.01、***p＜0.001、****p＜0.0001、Ctl为对照组、MC为造模组。
具体实施方式
[0023]本专利技术提供了一种利用玉米渣制备的玉米护肝肽，其中玉米渣是来源于玉米制取淀粉后得到的副产物；所述的玉米护肝肽是由玉米渣中的蛋白质酶解而来的具有护肝功能的多肽。
[0024]本专利技术实施例中所用到的碱性蛋白酶和无花果蛋白酶为食品安全国家标准食品添加剂使用标准(GB2760
‑
2014)中规定的酶。
[0025]转基因品系斑马鱼Tg(L
‑
FABP：EGFP)品系由山东省科学院生物研究所斑马鱼药物筛选平台提供；硫代乙酰胺(TAA)购自Sigma
‑
Alrdich，苯基硫脲(PTU)购自ALDRICH，甲基纤维素(MC)和其他试剂以及培养板等为国产。SZX16型荧光显微镜及DP2
‑
BSW图像采集系统(日本Olympus公司)；X51型倒置显微镜(日本Olympus公司)；Forma 3111型水套式CO2培养箱(美国Forma公司)；斑马鱼养殖饲养设备(北京爱生科技公司)
[0026]实施例中斑马鱼雌雄成鱼分别饲养在电导率为500～550μS/cm斑马鱼饲养液中
(通氧，水温28.5℃，pH7.5
±
0.5)，光照周期为14h光照/10h黑暗，每天定时喂以人工颗粒状饵料和刚孵出的卤虫无节幼体(Artemia nauplii)。
[0027]排卵前，挑选2周内未排过卵的正常斑马鱼成鱼，按雌雄比1:1比例置于交配缸内，雌鱼和雄鱼以隔板隔开，饲养过夜。次日清晨移去隔板，让斑马鱼交配产卵。3小时候后收集健康受精卵(将成团卵块吹散)，加入E3培养液(5mM NaCl、0.17mM KCl、0.33mM CaCl2和0.33mM MgSO4)，置于28.5℃培养箱中培养，10小时后挑选死卵。每天更换培养液一次。
[0028]硫代乙酰胺(TAA)母液的配制，根据当次实验用量，先用斑马鱼饲养水将TAA配制成120mmol/L母液，分装后置于冰箱冷冻室存放。临用前稀释至规定终浓度6mmol/L。
[0029]下面结合实施例和附图对本专利技术进行详细的描述。
[0030]实施例1：玉米护肝肽的制备
[0031]1.1使用碱性蛋白酶和无花果蛋白酶制备玉米多肽
[0032]将玉米渣用粉碎机粉碎，称取玉米渣100g，加入1000ml蒸馏水，用高速剪切机匀浆30min，匀浆液中加入3.0g碱性蛋白酶和无花果蛋白酶(酶活比为2:1)，55℃酶解4h，酶解结束后煮沸15min，酶解液离心、脱色、浓缩后干燥，得到36.27g玉米多肽，得率为36.27％，多肽纯度为49.28％。
[0033]1.2玉米多肽的分离纯化
[0034]将1.1中制备的玉米多肽配制成100mg/ml溶液，利用膜过滤设备机型分离，分别用500Da，3000Da和10000Da的膜进行分离，收集不同组分，检测其保护肝损伤的作用。
[0035]1.3护肝活性检测
[0036]利用斑马鱼实验，对玉米护肝肽的活性进行检测，发现在500
‑
3000Da部分具有明显的护肝活性，得到的样品命名为玉米护肝多肽，如图1所示。
[0037]1.4HPLC分析
[0038]将玉米多肽利用HPLC分析，分析条件如下：仪器：Agilent 1260型高效液相色谱仪，色谱柱：依利特SimoChrom ODS
‑
BP 5μm(4.6mm
×
250mm)，流动相：甲醇和0.1％TFA水，流速：1ml/min，检测波长：220nm，方法：0min(5％甲醇)，5min(5％甲醇)，40min(95％甲醇)，50min(95％甲醇)。玉米多肽和玉米护肝肽的HPLC图谱分别如图2和图3所示。
[0039]实施例2：玉米护肝肽的序列结构鉴定
[0040]对实施例1制备的玉米护肝肽进行结构鉴定，色谱条件如下所示：仪器类型：LCMS
‑
9030Q
‑
TOF四极杆
‑
飞行时间质谱仪，色谱柱：Inertsil HILIC C18反相色谱柱150mm
×
3.0mm，3μm，岛津，日本)，柱温：30℃，进样体积：1.0μL；流动相：A为0.1％(v/v)甲酸水溶液，流动相B为0.1％(v/v)甲酸乙腈溶液，梯度洗脱程序：0
ꢀ‑
5.0min，5％，5.0
ꢀ‑
10.0min，10％，10.0
ꢀ‑
15.0min，20％，15.0
ꢀ‑
20.0min，40％；流速为0.3mL/min，质谱离子模式：ESI源，采用正离子模式，离子源接口电压：4.0kV，气体流速：10.0L/min，干燥气体流速：10.0L/min，加热气体流速：10.0L/min；加热模块温度：400℃，接口温度：300℃，扫描模式：全扫描模式(m/z 50
‑
2000)。
[0041]得到的质谱信息利用蛋白组学技术进行鉴定，得到的有效多肽序列(表1)。
[0042]表1：玉米护肝肽鉴定数据表
[0043][0044]利用固相多肽合成法，将表1中的多肽序列进行合成，配制成浓度为200μg/mL的多肽溶液，如图4所示，在同时加入造模本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.一种对鱼类肝脏具有保护作用的多肽，其特征在于，所述的多肽是将玉米渣用碱性蛋白酶和无花果蛋白酶进行酶解，酶解产物进行离心、脱色后干燥制备的。2.如权利要求1所述的多肽，其特征在于，所述的碱性蛋白酶和无花果蛋白酶的酶活比为2:1。3.如权利要求1所述的多肽，其特征在于，所述的酶解产物的分子量为500
‑
3000Da。4.如权利要求1所述的多肽，其特征在于，所述的多肽的氨基酸序列为KDYASKNCLQSFMLM。5.权利要求1
‑
5任一项所述的多肽作为饲料添加剂的应用。6....
【专利技术属性】
技术研发人员：王淑娴，叶海斌，李莉，王友红，王晓璐，盖春蕾，许拉，樊英，刁菁，于晓清，刘金龙，庄晓峰，魏鉴腾，
申请(专利权)人：山东贝瑞康生物科技有限公司青岛农业大学青岛海军食品与营养创新研究院青岛特种食品研究院东营青农大盐碱地高效农业技术产业研究院，
类型：发明
国别省市：
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