一种利用尼泊司他汀发酵液提取尼泊司他汀的方法技术

本发明专利技术涉及一种利用尼泊司他汀发酵液提取尼泊司他汀的方法，其工艺步骤包括分别采用了预处理、萃取、水洗、层析、减压浓缩、过滤和干燥等。本发明专利技术采用复合助滤剂和复合吸附剂代替常规的材料，提取过程中只使用了单一的有机溶剂。同目前国内常规工艺相比，具有提取周期短、提取收率高，产品质量稳定、生产成本低等特点，有利于增强产品的国外市场竞争力。有利于增强产品的国外市场竞争力。

【技术实现步骤摘要】
一种利用尼泊司他汀发酵液提取尼泊司他汀的方法


[0001]本专利技术属于医药
，特别是涉及一种利用尼泊司他汀发酵液提取尼泊司他汀的方法。

技术介绍

[0002]尼泊司他汀是毒三素链霉菌的代谢产物，能选择性抑制胃肠道中胰脂肪酶的活性，减少脂肪的分解和吸收，其四氢衍生物奥利司他已经被成功的开发为减肥药，是目前唯一作为非中枢神经系统作用而上市的治疗肥胖症的药物。
[0003]目前，国内相关文献公开了尼泊司他汀提取纯化工艺，具体内容如下：
[0004]工艺一：
[0005]尼泊司他汀发酵液酸化经喷雾干燥获得干菌丝体；丙酮浸提，板框过滤收集滤液，加水稀释丙酮稀释液；用正庚烷萃取，萃取液减压浓缩，至无馏分析出，制得正庚烷浓缩液；加入乙腈，冷却后，分层收集乙腈相，并对其减压浓缩，制得乙腈浓缩液；用己烷稀释乙腈浓缩液，然后，上硅胶柱进行吸附；吸附完毕后，用己烷洗脱，收集洗脱液；对洗脱液进行减压浓缩，至无馏分析出；二次结晶，收集晶体，减压浓缩，制得高纯度尼泊司他汀。
[0006]工艺二：
[0007]尼泊司他汀湿菌体用去离子水清洗后，30
‑
80％甲醇水浸提，控制pH值在5.5
‑
7.5之间，采用超声仪进行微生物细胞破碎，得到含有尼泊司他汀的混合物；将混合物振荡提取，得到含有尼泊司他汀的提取液；将提取液离心，收集上清液，将上清液减压浓缩，得到尼泊司他汀粗提品；将尼泊司他汀粗提品溶解于有机溶剂中进行重结晶，收集晶体，减压浓缩，得到尼泊司他汀纯品。
[0008]工艺三：
[0009]含有利普司他汀的发酵液中加入乙酸乙酯，萃取分相后，上清液浓缩至干，得黄褐色利普司他汀粗品；将所得的黄褐色利普司他汀粗品用有机溶媒进行溶解，过滤除去不溶性杂质，将滤液减压浓缩至原体积的1/4～1/6，得浓缩液；将硅胶填料装入层析柱，用庚烷平衡好后，将浓缩液上到硅胶柱，上样量为柱体积的10％～20％，用庚烷和乙酸乙酯的混合溶媒作为流动相进行洗杂和洗脱，流速控制在0.5～1.5倍柱体积/小时，收集利普司他汀洗脱液，将洗脱液减压浓缩至干，得浅黄色油状利普司他汀粗品；所得的浅黄色油状利普司他汀粗品用有机溶媒溶解，降温法结晶，过滤后得利普司他汀白色晶体。
[0010]以上工艺存在的问题：
[0011]1、国内公开的尼泊司他汀提取工艺步骤多，提取纯化周期长，以单罐100M3发酵液进行比较，单批次提取周期超过了200h，具体内容如下所示：
[0012]尼泊司他汀关键提取工艺单批次周期时间汇总
[0013][0014]2、尼泊司他汀提取工艺中采用了萃取、柱层析或大孔树脂吸附工艺，首先是有机溶媒用量较多，其次是溶媒种类达到了2种或2种以上。虽然提取工艺结束后对其进行了回收处理，但部分溶媒还是造成了一定比例的浪费，提高了环保处理的成本。
[0015]3、国内文献公开了尼泊司他汀的提取技术水平。尼泊司他汀成品含量在80
‑
90％，收率在70
‑
80％。目前，国内生产的尼泊司他汀50％以上用于出口，国外对其质量提取了新的要求，其内容是尼泊司他汀成品含量在90
‑
95％，但现有的生产工艺生产的尼泊司他汀达不到国外的质量要求。

技术实现思路

[0016]本专利技术的目的在于克服上述现有技术中的缺陷，提供一种提取工艺步骤简单、有效提高尼泊司他汀提取收率，成品质量符合出口质量要求的一种利用尼泊司他汀发酵液提取尼泊司他汀的方法。
[0017]为实现上述目的所采取的技术方案为：
[0018](1)预处理
[0019]将尼泊司他汀发酵液加入盐酸，调节pH至2
‑
3，搅拌20
‑
40min，并静置30
‑
50min。
[0020]发酵液中加入复合助滤剂，继续搅拌20
‑
40min，板框过滤后得到湿菌渣。
[0021](2)萃取
[0022]菌渣投入萃取釜中，加入乙酸异丙酯，进行萃取，萃取结束，收集溶液并进行分离，得到含有尼泊司他汀的有机溶液。
[0023](3)水洗
[0024]步骤(2)中的尼泊司他汀的有机溶液投入水洗罐中，加入用纯化水配置的饱和氯化钠溶液，水洗1次并分离。
[0025](4)柱层析
[0026]步骤(3)中水洗后的尼泊司他汀有机溶液投入含有吸附剂的层析柱中进行层析，得到浅黄色有机溶液；
[0027](5)减压浓缩、过滤和干燥
[0028]在步骤(4)中的黄色有机溶液中加入用纯化水配置的饱和氯化钠溶液，经减压浓缩、过滤和干燥后得到纯品尼泊司他汀。
[0029]其中，步骤(1)中所述盐酸浓度是20％
‑
30％；
[0030]其中，步骤(1)中所述复合助滤剂制备方法为：首先珍珠岩、炉渣和海泡石分别经200 目筛筛分，按照比例2:2:1的比例进行混合，搅拌均匀；其次加入10
‑
20％的玻璃水溶液，加入比例是0.2
‑
0.4L/kg，搅拌80
‑
100min。搅拌过程中，每隔20min加入水，加入比例是 60
‑
100ml/kg，搅拌结束，粉碎并过200目筛筛分，于70
‑
80℃干燥，至水分含量低于2％以下停止干燥；最后，将干燥后的混合物进行高温热处理。在250
‑
300℃的条件下，高温煅烧 6
‑
10min。煅烧结束，再次进行粉碎和过200目筛筛分处理，得到复合助滤剂。
[0031]其中，所述复合助滤剂用量是：L发酵液∶W复合助滤剂＝1m3∶4
‑
6kg。
[0032]其中，步骤(2)中所述萃取是指将菌渣和乙酸异丙酯投入萃取釜中，温度控制在30
‑
35℃，萃取时间控制在200
‑
240min。
[0033]其中，所述菌渣和乙酸异丙酯投入比例为：W菌渣∶V乙酸异丙酯＝1kg∶2
‑
4L
[0034]其中，步骤(3)中所述纯化水配置的饱和氯化钠溶液使用量：V乙酸异丙酯∶V纯化水配置的饱和氯化钠溶液＝1L∶2
‑
4L，水洗时间1
‑
2h。
[0035]其中，步骤(4)中所述柱层析是指：层析柱柱高与直径的比例是5:1
‑
10:1；将吸附剂装入层析柱，用乙酸异丙酯平衡，水洗后的尼泊司他汀有机溶液投入层析柱，上样量为柱体积的25％～30％，乙酸异丙酯洗脱，流速控制在0.4～0.8倍柱体积/h，收集浅黄色区域的液体。
[0036]其中，步骤(4)中，所述吸附剂是指：分别将氧化铝粉、碳化硅粉、硅酸钠粉和氧化钙粉于70
‑
80℃干燥，水分含量低于1％后过200目筛进行筛分，按照5∶3∶1∶1的比例混合均匀。混合过程中分3次加入水，其本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种利用尼泊司他汀发酵液提取尼泊司他汀的方法，其特征在于其工艺步骤为：(1)预处理将尼泊司他汀发酵液加入盐酸，调节pH至2
‑
3，搅拌20
‑
40min，并静置30
‑
50min；发酵液中加入复合助滤剂，继续搅拌20
‑
40min，板框过滤后得到湿菌渣；(2)萃取菌渣投入萃取釜中，加入乙酸异丙酯，进行萃取，萃取结束，收集溶液并进行分离，得到含有尼泊司他汀的有机溶液；(3)水洗尼泊司他汀的有机溶液投入水洗罐中，加入用纯化水配置的饱和氯化钠溶液，水洗1次并分离；(4)柱层析步骤(3)中水洗后的尼泊司他汀有机溶液投入含有吸附剂的层析柱中进行层析，得到浅黄色有机溶液；(5)减压浓缩、过滤和干燥在步骤(4)中的黄色有机溶液中加入用纯化水配置的饱和氯化钠溶液，经减压浓缩、过滤和干燥后得到纯品尼泊司他汀。2.按照权利要求1所述的利用尼泊司他汀发酵液提取尼泊司他汀的方法，其特征在于步骤(1)中所述盐酸浓度为20％
‑
30％。3.按照权利要求1所述的利用尼泊司他汀发酵液提取尼泊司他汀的方法，其特征在于步骤(1)中所述复合助滤剂制备方法为：首先珍珠岩、炉渣和海泡石分别经200目筛筛分，按照比例2:2:1的比例进行混合，搅拌均匀；其次加入10
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20％的玻璃水溶液，加入比例是0.2
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0.4L/kg，搅拌80
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100min；搅拌过程中，每隔20min加入水，加入比例是60
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100ml/kg，搅拌结束，粉碎并过200目筛筛分，于70
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80℃干燥，至水分含量低于2％以下停止干燥；最后，将干燥后的混合物进行高温热处理，在250
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300℃的条件下，高温煅烧6
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10min；煅烧结束，再次进行粉碎和过200目筛筛分处理，得到复合助滤剂。4.按照权利要求3所述的利用尼泊司他汀发酵液提取尼泊司他汀的方法，其特征在于所述复合助滤剂用量为：L发酵液∶W复合助滤剂＝1m3∶4
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6kg。5.按照权利要求1所述的利用尼泊司他汀发酵液提取尼泊司他汀的方法，其特征在于步骤(2)中所述萃取是指将菌渣和乙酸异丙酯投入萃取釜中，温度控制在30
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35℃，萃取时间控制在200
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240min。6.按照...

【专利技术属性】
技术研发人员：任勇，李小萍，杜珊珊，
申请(专利权)人：宁夏泰胜生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：