一种抗雌三醇的单克隆抗体、检测试剂及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一种抗雌三醇的单克隆抗体、检测试剂及其应用，所述单克隆抗体含有名称为V

【技术实现步骤摘要】
一种抗雌三醇的单克隆抗体、检测试剂及其应用


[0001]本专利技术涉及快速生物检测
，具体涉及一种抗雌三醇的单克隆抗体、检测试剂及其应用。

技术介绍

[0002]雌三醇（estriol，E3）是雌二醇和雌酮的代谢产物，非妊娠期其值很低，主要由肝脏合成；妊娠期主要由胎儿胎盘合成，合成后通过母体血循环，在肝脏代谢，和硫酸或葡萄糖醛酸结合形成结合型E3，从尿排出。环境中主要通过生物富集作用进入食物链，进而造成食品的污染，而后通过食物链间接进入人体，干扰机体内分泌功能，引起内分泌失调，对生态环境以及人类健康安全的潜在危害性不可忽视。
[0003]目前，测定雌三醇残留的方法主要包括气相色谱
‑
质谱联用法（Gas chromatography
‑
mass spectrometry，GC
‑
MS）、高效液相色谱法（High performance liquid chromatography，HPLC）、酶联免疫吸附试验（ELISA）、胶体金免疫层析试纸法等。其中GC
‑
MS和HPLC灵敏度高、选择性好等优点，但所需仪器设备昂贵，检测活动受到一定限制。ELISA是测定雌三醇较常用的方法之一，特异性强、灵敏度高、分析速度快，可以一次测定多个样品，在实际的检测活动中使用较为普遍。胶体金和荧光免疫免疫层析法除特异性强以外，灵敏度较高，还具有成本低、操作简便、检测场景宽泛等特点，也是实际应用较多的检测方法。但由于同类分子的相似性，雌三醇的ELISA和胶体金免疫检测方法容易对结构相似的化学物质产生一定的交叉反应，影响实验的准确度。

技术实现思路

[0004]为解决上述问题，本专利技术提供一种抗雌三醇的单克隆抗体、检测试剂及其应用，具体包括如下技术方案：第一方面，本专利技术提供一种抗雌三醇的单克隆抗体，所述单克隆抗体含有名称为V
H
的重链可变区和名称为V
L
的轻链可变区，所述V
H
和V
L
均由互补决定区和框架区组成；所述互补决定区由CDR1、CDR2和CDR3组成；所述单克隆抗体的V
H
的CDR1的氨基酸序列如SEQ ID No. 1中第85
‑
89位所示；所述单克隆抗体的V
H
的CDR2的氨基酸序列如SEQ ID No. 1中第104
‑
120位所示；所述单克隆抗体的V
H
的CDR3的氨基酸序列如SEQ ID No. 1中第153
‑
164位所示；所述单克隆抗体的V
L
的CDR1的氨基酸序列如SEQ ID No. 2中第30
‑
42位所示；所述单克隆抗体的V
L
的CDR2的氨基酸序列如SEQ ID No. 2中第58
‑
64位所示；所述单克隆抗体的V
L
的CDR3的氨基酸序列如SEQ ID No. 2中第99
‑
107位所示。
[0005]第二方面，所述单克隆抗体的V
H
的氨基酸序列如序列表中SEQ ID No. 1所示；所述单克隆抗体的V
L
的氨基酸序列如序列表中SEQ ID No. 2所示。
[0006]第三方面，编码所述单克隆抗体的V
H
的核苷酸序列如序列表中SEQ ID No. 3所示；
编码所述单克隆抗体的V
L
的核苷酸序列如序列表中SEQ ID No. 4所示。
[0007]第四方面，所述单克隆抗体为鼠源单克隆抗体，所述单克隆抗体的重链为IgG1型，轻链为λ型。
[0008]第五方面，本专利技术提供一种抗雌三醇的单克隆抗体在制备检测雌三醇的试纸条或试剂盒中的应用。
[0009]优选地，所述试纸条为胶体金检测试纸条，或荧光微球检测试纸条，或乳胶微球检测试纸条；优选地，所述试剂盒为间接竞争ELISA检测试剂盒。
[0010]本专利技术实施例具有如下优点：试验证明，本专利技术提供的单克隆抗体在制备用于检测雌三醇的试剂盒中，对雌三醇激素其他结构类似物均无明显交叉反应，具有良好的特异性和更高的灵敏度。
附图说明
[0011]为了更清楚地说明本专利技术的实施方式或现有技术中的技术方案，下面将对实施方式或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍。显而易见地，下面描述中的附图仅仅是示例性的，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据提供的附图引伸获得其它的实施附图。
[0012]本说明书所绘示的结构、比例、大小等，均仅用以配合说明书所揭示的内容，以供熟悉此技术的人士了解与阅读，并非用以限定本专利技术可实施的限定条件，故不具技术上的实质意义，任何结构的修饰、比例关系的改变或大小的调整，在不影响本专利技术所能产生的功效及所能达成的目的下，均应仍落在本专利技术所揭示的
技术实现思路
能涵盖的范围内。
[0013]图1为本专利技术实施例提供的采用间接竞争ELISA方法检测抗雌三醇单克隆抗体灵敏度的RIDA SOFT四参数法IC
50
曲线图；图2为本专利技术实施例提供的抗雌三醇的单克隆抗体重链可变区核苷酸序列同源性分析图；图3为本专利技术实施例提供的抗雌三醇的单克隆抗体轻链可变区核苷酸序列同源性分析图；图4为本专利技术实施例提供的抗雌三醇的单克隆抗体重链可变区氨基酸序列同源性分析图；图5为本专利技术实施例提供的抗雌三醇的单克隆抗体轻链可变区氨基酸序列同源性分析图；图6为本专利技术实施例提供的检测雌三醇试纸条的结构示意图；图7为图6所示结构的俯视图；图8为本专利技术实施例提供的微孔试剂的结构示意图。
[0014]图中：1
‑
吸水纸；2
‑
硝酸纤维素膜；3
‑
样品垫；4
‑
质控线；5
‑
检测线；6
‑
底板；7
‑
试纸条；8
‑
雌三醇单克隆抗体
‑
胶体金标记物；9
‑
微孔塞；10
‑
微孔试剂。
具体实施方式
[0015]以下由特定的具体实施例说明本专利技术的实施方式，熟悉此技术的人士可由本说明
书所揭露的内容轻易地了解本专利技术的其他优点及功效，显然，所描述的实施例是本专利技术一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本专利技术保护的范围。
实施例1、雌三醇人工抗原的合成
[0016]本实施例提供一种雌三醇人工抗原的合成路线，具体步骤为：取4.8 mmol/L（1.4 g）雌三醇于100 ml圆底烧瓶中，加入20 ml无水二甲基亚砜（DMSO），室温条件下搅拌，使得原料溶解，再加入12.5 mmol/L（0.7 g）的KOH。取9.6 mmol/L（1.3 g）溴乙酸，室温本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种抗雌三醇的单克隆抗体，所述单克隆抗体含有名称为V
H
的重链可变区和名称为V
L
的轻链可变区，所述V
H
和V
L
均由互补决定区和框架区组成；所述互补决定区由CDR1、CDR2和CDR3组成；所述单克隆抗体的V
H
的CDR1的氨基酸序列如SEQ ID No. 1中第85
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89位所示；所述单克隆抗体的V
H
的CDR2的氨基酸序列如SEQ ID No. 1中第104
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120位所示；所述单克隆抗体的V
H
的CDR3的氨基酸序列如SEQ ID No. 1中第153
‑
164位所示；所述单克隆抗体的V
L
的CDR1的氨基酸序列如SEQ ID No. 2中第30
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42位所示；所述单克隆抗体的V
L
的CDR2的氨基酸序列如SEQ ID No. 2中第58

【专利技术属性】
技术研发人员：巩玉洁，马溶江，马燕，杨晓霞，赵荣茂，栾欣雨，李川敏，陈娟，张琼林，赵方圆，袁婷婷，
申请(专利权)人：北京纳百生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：