抗雌二醇抗体、检测雌二醇的试剂和试剂盒制造技术

本发明专利技术公开了一种抗雌二醇抗体、检测雌二醇的试剂和试剂盒，涉及抗体技术领域。本发明专利技术公开的抗雌二醇抗体包括重链互补决定区和轻链互补决定区。该抗体为雌二醇的检测提供了重要的原料来源。要的原料来源。

【技术实现步骤摘要】
抗雌二醇抗体、检测雌二醇的试剂和试剂盒


[0001]本专利技术涉及抗体
，具体而言，涉及一种抗雌二醇抗体、检测雌二醇的试剂和试剂盒。

技术介绍

[0002]雌二醇(Estradiol，E2)是一种A环为苯环的18碳类固醇激素，分子量272.4Da，为人体雌激素(Estrogen)的主要组成部分。血中70％的E2与性激素结合球蛋白(SHBG)结合，25％的E2与血浆白蛋白结合，其余为游离型。E2主要由卵巢滤泡、黄体及妊娠时胎盘产生，极少量由睾丸合成或为睾酮的代谢物，并成为男性雌激素的主要来源。E2的合成呈周期性变化，能够促进女性生殖器官的形成及发育，第二性征的出现及维持，并与孕激素协同形成月经周期。此外，还具有广泛的代谢调剂作用。
[0003]正常妊娠时，E2轻度升高，胎盘娩出后急剧下降。异常妊娠时，E2大都升高，如双胎或多胎妊娠以及糖尿病孕妇；若E2降低，则可能为妊娠高血压综合征重症、胎儿宫内死亡或葡萄胎等情况，宜结合其它检查予以确定。此外，引起E2升高的病理性原因还可能为卵巢癌(如卵巢颗粒层细胞瘤、卵巢胚瘤、卵巢脂肪样细胞瘤等)、心脏病(如心肌梗塞、心绞痛、冠状动脉狭窄)以及其他疾病(系统性红斑狼疮、肝硬化、男性肥胖症等)。引起E2降低的病理性因素较多，如卵巢发育低下、原发性卵巢衰竭、垂体性闭经或不孕、柯兴氏综合征、阿狄森氏病、恶性肿瘤、较大范围的感染、肾功能不全、脑及垂体的局灶性病变等。由此可见，E2对于临床疾病的诊断具有广泛的意义，是重要的评价指标之一。
[0004]目前，E2的检测方法主要有化学发光竞争法，其是基于抗体和抗原的特异性反应，同时利用发光物质(如吖啶酯、异鲁米诺等)对被检测信号进行放大和显示的一种免疫学检测方法。类似的免疫学检测方法还有酶联法、免疫比浊法、放射免疫法、荧光免疫层析法等，上述免疫学检测方法都需要针对E2的抗体。因此，本领域对于有效结合E2并对其进行检测的抗体存在着强烈需求。
[0005]有鉴于此，特提出本专利技术。

技术实现思路

[0006]针对现有抗雌二醇抗体来源少的问题，本申请提供一种亲和力和/或活性改善的抗雌二醇抗体，以改善雌二醇的检测，为雌二醇的检测提供重要的原料来源。
[0007]为了实现上述目的，根据本专利技术的一个方面，提供了一种抗雌二醇抗体或其功能性片段，所述抗体或其功能性片段包括如下互补决定区：
[0008]a)氨基酸序列如SEQ ID NO:1至SEQ ID NO:3所示的HCDR1、HCDR2、HCDR3和SEQ ID NO:4至SEQ ID NO:6所示的LCDR1、LCDR2、LCDR3；或
[0009]b)氨基酸序列如SEQ ID NO:36至SEQ ID NO:38所示的HCDR1、HCDR2、HCDR3和SEQ ID NO:39至SEQ ID NO:41所示的LCDR1、LCDR2、LCDR3。
[0010]为了实现上述目的，根据本专利技术的第二个方面，提供了一种抗雌二醇的抗体或其
功能性片段，所述抗体或其功能性片段包含重链可变区和/或轻链可变区，所述重链可变区含有HFR1
‑
HCDR1
‑
HFR2
‑
HCDR2
‑
HFR3
‑
HCDR3
‑
HFR4的序列结构，所述轻链可变区区含有LFR1
‑
LCDR1
‑
LFR2
‑
LCDR2
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LFR3
‑
LCDR3
‑
LFR4的序列结构，所述HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、LCDR3的氨基酸序列为上述的HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、LCDR3的氨基酸序列。
[0011]为了实现上述目的，根据本专利技术的第三个方面，提供了一种抗雌二醇的抗体，包括重链和/或轻链，所述重链包括上述的重链可变区和上述的重链恒定区；所述轻链包括上述的轻链可变区和上述的轻链恒定区。
[0012]为了实现上述目的，根据本专利技术的第四个方面，提供了一种抗体偶联物，所述抗体偶联物包括上述的抗体或其功能性片段。
[0013]为了实现上述目的，根据本专利技术的第五个方面，提供了一种检测雌二醇的试剂或试剂盒，所述试剂或试剂盒包括上述的抗体或其功能性片段或上述的抗体偶联物。
[0014]为了实现上述目的，本专利技术还提供了一种载体、一种细胞及一种制备上述抗体或其功能性片段的方法。
附图说明
[0015]为了更清楚地说明本专利技术实施例的技术方案，下面将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍，应当理解，以下附图仅示出了本专利技术的某些实施例，因此不应被看作是对范围的限定，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他相关的附图。
[0016]图1为Anti
‑
E2 7A4mut1至Anti
‑
E2 7A4mut4的还原性SDS
‑
PAGE的结果。
[0017]图2为Anti
‑
E2 3C50mut1至Anti
‑
E2 3C50mut3的还原性SDS
‑
PAGE的结果。
具体实施方式
[0018]本专利技术提供了一种亲和力和/或活性改善的抗雌二醇抗体或其功能性片段，所述抗体或其功能性片段包括如下互补决定区：
[0019]a)氨基酸序列如SEQ ID NO:1至SEQ ID NO:3所示的HCDR1、HCDR2、HCDR3和SEQ ID NO:4至SEQ ID NO:6所示的LCDR1、LCDR2、LCDR3；或
[0020]b)氨基酸序列如SEQ ID NO:36至SEQ ID NO:38所示的HCDR1、HCDR2、HCDR3和SEQ ID NO:39至SEQ ID NO:41所示的LCDR1、LCDR2、LCDR3。
[0021]在本专利技术中，术语“抗体”在最广义上使用，其可以包括全长单克隆抗体，双特异性或多特异性抗体，以及嵌合抗体，只要它们展示所需的生物学活性。
[0022]在本专利技术中，术语“互补性决定区”、“CDR”或“CDRs”是指免疫球蛋白的重链和轻链的高度可变区，指包含一种或多种或者甚至全部的对抗体或抗原结合片段与其识别的抗原或表位的结合起作用的主要氨基酸残基的区域。在本专利技术具体实施方式中，CDRs是指所述抗体的重链和轻链的高度可变区。
[0023]在本专利技术中，重链互补决定区用HCDR表示，其包括HCDR1、HCDR2和HCDR3；轻链互补决定区用LCDR表示，其包括LCDR1、LCDR2和LCDR3。本领域常用的CDR标示方法包括：Kabat编号方案、IMGT编号方案、Chothia和Lesk编号方案以及1997年Lefranc等人为免疫球蛋白超家族的所有蛋白质序列引入的新的标准化编号系统。Kabat等人本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种抗体或其功能性片段，其特征在于，所述抗体或其功能性片段包括如下互补决定区：a)氨基酸序列如SEQ ID NO:1至SEQ ID NO:3所示的HCDR1、HCDR2、HCDR3和SEQ ID NO:4至SEQ ID NO:6所示的LCDR1、LCDR2、LCDR3；或b)氨基酸序列如SEQ ID NO:36至SEQ ID NO:38所示的HCDR1、HCDR2、HCDR3和SEQ ID NO:39至SEQ ID NO:41所示的LCDR1、LCDR2、LCDR3。2.根据权利要求1所述的抗体或其功能性片段，其特征在于，所述抗体或其功能性片段还包括如下框架区：c)氨基酸序列如SEQ ID NO:7至SEQ ID NO:10所示的HFR1、HFR2、HFR3、HFR4和SEQ ID NO:11至SEQ ID NO:14所示的LFR1、LFR2、LFR3、LFR4；d)氨基酸序列如SEQ ID NO:42至SEQ ID NO:45所示的HFR1、HFR2、HFR3、HFR4和SEQ ID NO:46至SEQ ID NO:49所示的LFR1、LFR2、LFR3、LFR4；或e)与c)或d)所示氨基酸序列具有至少80％同源性的框架区；可选地，所述e)框架区中的HFR1的氨基酸序列如SEQ ID NO:15或50所示；可选地，所述e)框架区中的LFR1的氨基酸序列如SEQ ID NO:16或51所示；可选地，所述e)框架区中的LFR2的氨基酸序列如SEQ ID NO:17所示；可选地，所述抗体或其功能性片段以KD≤10
‑8M的亲和力结合雌二醇。3.一种抗雌二醇的抗体或其功能性片段，其特征在于，所述抗体或其功能性片段包含重链可变区和/或轻链可变区，所述重链可变区含有HFR1
‑
HCDR1
‑
HFR2
‑
HCDR2
‑
HFR3
‑
HCDR3
‑
HFR4的序列结构，所述轻链可变区区含有LFR1
‑
LCDR1
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LFR2
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LCDR2
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LFR3
‑
LCDR3
‑
LFR4的序列结构，所述HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、LCDR3的氨基酸序列为权利要求1所述的HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、LCDR3的氨基酸序列，所述HFR1、HFR2、HFR3、HFR4、LFR1、LFR2、LFR3、LFR4的氨基酸序列为权利要求2所述的HFR1、HFR2、HFR3、HFR4、LFR1、LFR2、LFR3、LFR4的氨基酸序列；可选地，所述重链可变区氨基酸序列如SEQ ID NO:20至SEQ ID NO:23任一所示或如SEQ ID NO:54至SEQ ID NO:56任一所示；所述轻链可变区氨基酸序列如SEQ ID NO:24至SEQ ID NO:27任一所示或如SEQ ID NO:57至SEQ ID NO:59任一所示；可选地，所述重链可变区氨基酸序列如SEQ ID NO:20所示，且所述轻链可变区氨基酸序列如SEQ ID NO:24所示；或所述重链可变区氨基酸序列如SEQ ID NO:21所示，且所述轻链可变区氨基酸序列如SEQ ID NO:25所示；或所述重链可变区氨基酸序列如SEQ ID NO:22所示，且所述轻链可变区氨基酸序列如SEQ ID NO:26所示；或所述重链可变区氨基酸序列如SEQ ID NO:23所示，且所述轻链可变区氨基酸序列如SEQ ID NO:27所示；或所述重链可变区氨基酸序列如SEQ ID NO:54所示，且所述轻链可变区氨基酸序列如SEQ ID NO:57所示；或所述重链可变区氨基酸序列如SEQ ID NO:55所示，且所述轻链可变区氨基酸序列如SEQ ID NO:58所示；或
所述重链可变区氨基酸序列如SEQ ID NO:56所示，且所述轻链可变区氨基酸序列如SEQ ID NO:59所示。4.根据权利要求1至3任一所述的抗体或其功能性片段，其特征在于，所述抗体或其功能性片段还包含恒定区；可选地，所述恒定区包括重链恒定区和/或轻链恒定区；可选地，所述重链恒定区选自IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA、IgM、IgE或IgD的重链恒定区；所述轻链恒定区选自κ型或λ型轻链恒定区；可选地，所述恒定区的种属来源为牛、马、猪、羊、大鼠、小鼠、狗、猫、兔、驴、鹿、貂、鸡、鸭、鹅或人；可选地，所述恒定区的种属来源为羊；可选地，所述重链恒定区序列如SEQ ID NO:18或SEQ ID NO:52所示或与其具有至少80％同源性，所述轻链恒定区序列如SEQ ID NO:19或SEQ ID NO:53所示或与其具有至少80％同源性。5.根据权利要求1至4任一所述的抗体或其功能性片段，其特征在于，所述功能性片段选自所述抗体的F(ab
’
)2、Fab
’
...

【专利技术属性】
技术研发人员：孟媛，钟冬梅，游辉，曹慧方，
申请(专利权)人：东莞市朋志生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：