【技术实现步骤摘要】
一种测定杆状病毒滴度的方法
[0001]本专利技术属于生物检测分析
,尤其涉及一种测定杆状病毒滴度的方法。
技术介绍
[0002]杆状病毒
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昆虫细胞表达系统(Baculovirus expression vector system,BEVS)是基于杆状病毒及其宿主细胞建立的高效表达外源基因的真核表达体系,其中应用最广泛的是以苜蓿银纹夜蛾核型多角体病毒(Autographa californica multiple nucleopolyhedrovirus,AcMNPV)为原始模型进行基因工程改造而得到的杆状病毒重组表达载体。BEVS具有安全稳定、蛋白表达量高、表达产物具有翻译后修饰等特点,在重组蛋白生产、基因治疗AAV载体开发方面拥有广阔的应用前景。
[0003]在开发BEVS相关方法时,病毒扩增和重组蛋白表达环节均需要设置杆状病毒与昆虫细胞的感染比例,即感染复数(multiplicity of infection,MOI),因此建立一个能够快速、准确测定杆状病毒滴度的方法显得尤为必要。目前 ...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.一种测定杆状病毒滴度的方法,其特征在于,采用鼠源IgG2a类型的特异性识别包膜蛋白gp64的单克隆抗体,包括如下步骤:步骤1,细胞铺板:将细胞铺于细胞培养板中;步骤2,接种杆状病毒:将待检测的杆状病毒样品接种至步骤1的细胞培养板中;步骤3,病毒感染;步骤4,流式细胞术检测:收集被感染细胞,清洗细胞,加入荧光标记抗体,上机检测。2.根据权利要求1所述的一种测定杆状病毒滴度的方法,其特征在于,所述鼠源IgG2a类型的特异性识别包膜蛋白gp64的单克隆抗体包括:重链可变区CDR1,其序列如SEQ ID NO.3所示;重链可变区CDR2,其序列如SEQ ID NO.4所示;重链可变区CDR3,其序列如SEQ ID NO.5所示;轻链可变区CDR1,其序列如SEQ ID NO.8所示;轻链可变区CDR2,其序列如SEQ ID NO.9所示;轻链可变区CDR3,其序列如SEQ ID NO.10所示。3.根据权利要求2所述的一种测定杆状病毒滴度的方法,其特征在于,所述鼠源IgG2a类型的特异性识别包膜蛋白gp64的单克隆抗体包括:重链可变区,其序列如SEQ ID NO.2所示;轻链可变区,其序列如SEQ ID NO.7所示。4.根据权利要求3所述的一种测定杆状病毒滴度的方法,其特征在于,所述鼠源IgG2a类型的特异性识别包膜蛋白gp64的单克隆抗体包括:重链,其序列如SEQ ID NO.1所示;轻链,其序列如SEQ ID NO.6所示。5.根据权利要求2所述的一种测定杆状病毒滴度的方法,其特征在于,包括如下步骤:步骤1,细胞铺板:将处于对数生长期的昆虫细胞铺于细胞培养板中;步骤2,接种杆状病毒:将待检测的杆状病毒样品进行连续稀释,分别接种至步骤1的细胞培养板中;步骤3,病毒感染:将接种杆状病毒的...
【专利技术属性】
技术研发人员:任鋆,侯胜南,徐圣,刘嘉利,
申请(专利权)人:南通药明康德医药科技有限公司,
类型:发明
国别省市:
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