血清去除激素的方法技术

本发明专利技术公开了一种血清去除激素的方法，包括如下步骤：提供血清；向血清中加入蛋白解离剂，混匀后得到第一混合液；向第一混合液中加入吸附剂，充分反应后，去除吸附剂，得到第二混合液；向第二混合液中加入包被有激素抗体的磁珠，充分反应后，去除包被有抗体的磁珠，得到第三混合液，其中，激素抗体与第二混合液中残留的激素特异性结合；对第三混合液进行过滤除杂，得到所需要的去除了激素的血清。本发明专利技术的血清去除激素的方法通过吸附剂对小分子激素进行吸附去除，再通过包被有激素抗体的磁珠，特异性且高效地去除残留的小分子激素。本发明专利技术的血清去除激素的方法，用作去除血清中T3、T4时，能够将血清中的T3、T4处理的较为干净。T4处理的较为干净。

【技术实现步骤摘要】
血清去除激素的方法


[0001]本专利技术涉及医疗诊断试剂领域，尤其是涉及一种血清去除激素的方法。

技术介绍

[0002]三碘甲状腺原氨酸(3,5,3
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三碘甲状腺原氨酸，T3)是由甲状腺合成和分泌(占大约20％)或由甲状腺素在5
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位脱碘转化而来(占大约80％)的一种激素，分子量为651Da，是目前已知生物活性最强的甲状腺激素，其生物活性为甲状腺素(T4)的3～5倍。在血液循环中，99.7％的T3与结合蛋白结合，发挥生理活性的是游离的T3(FT3)。甲状腺素(T4)，即3,5,3
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,5
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四碘甲腺原氨酸，分子量约为776.93道尔顿，是甲状腺腺体分泌的主要激素，以游离形式释放进入血循环中，绝大多数(99％以上)与血浆中的蛋白质结合，称为结合态，还有极微量的T4未与血浆中的蛋白质结合，称为游离态。
[0003]临床上T3、FT3、T4与FT4的联合检测，是临床诊断甲状腺功能障碍的重要指标，可用于区分复杂的甲状腺疾病。然而，目前T3、FT3、T4以及FT4项目的诊断试剂盒主要国外厂商垄断，主要原因在于国内厂商生产的试剂盒在灵敏度及准确性上与国外厂商有一定差距。
[0004]在制备T3、FT3、T4以及FT4项目的诊断试剂盒时，出于稳定性及基质效应的考虑，配置的校准品及质控品一般选择去激素血清作为基质原料。但是，传统的去除血清中T3、T4的工艺较为复杂，且T3、T4分子量小于1000，传统的去除方法难以去除干净。

技术实现思路

[0005]基于此，有必要提供一种可以解决上述问题的血清去除激素的方法。
[0006]一种血清去除激素的方法，包括如下步骤：
[0007]提供血清；
[0008]向所述血清中加入蛋白解离剂，混匀后得到第一混合液；
[0009]向所述第一混合液中加入吸附剂，充分反应后，去除所述吸附剂，得到第二混合液；
[0010]向所述第二混合液中加入包被有激素抗体的磁珠，充分反应后，去除所述包被有抗体的磁珠，得到第三混合液，其中，所述激素抗体与所述第二混合液中残留的激素特异性结合；
[0011]对所述第三混合液进行过滤除杂，得到所需要的去除了所述激素的血清。
[0012]在一个实施例中，所述包被有激素抗体的磁珠中，所述激素抗体的包被量为20μg/mg～50μg/mg；
[0013]向所述第二混合液中加入包被有激素抗体的磁珠的操作中，所述磁珠与所述第二混合液的比例0.01mg/mL～0.5mg/mL。
[0014]在一个实施例中，所述磁珠为甲苯磺酰基磁珠、羧基磁珠和氨基磁珠的一种，所述磁珠的粒径为0.1μm～8μm。
[0015]在一个实施例中，向所述第二混合液中加入包被有激素抗体的磁珠，充分反应后，去除所述包被有抗体的磁珠，得到第三混合液的操作为：
[0016]向所述第二混合液中加入包被有激素抗体的磁珠，接着将整个体系震荡1h～6h，再进行磁分离将所述包被有激素抗体的磁珠去除，得到第三混合液。
[0017]在一个实施例中，所述激素抗体选自T3抗体和T4抗体中的至少一种，所述包被有激素抗体的磁珠为包被有T3抗体的磁珠和包被有T4抗体的磁珠中的至少一种。
[0018]在一个实施例中，向所述血清中加入蛋白解离剂的操作中，所述第一混合液中，所述蛋白解离剂的浓度为0.01wt％～1wt％，所述蛋白解离剂选自8
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苯氨基
‑1‑
萘磺酸铵盐和水杨酸钠中的一种或两种。
[0019]在一个实施例中，所述提供血清的操作为：取纯血清，12000g～20000g离心10min～60min后，保留上清液，所述上清液即为所述血清，所述纯血清为人血清、马血清、小牛血清或胎牛血清。
[0020]在一个实施例中，还包括在所述提供血清的操作之后，在向所述血清中加入蛋白解离剂的操作之前，进行如下操作：向所述血清中加入防腐剂，所述防腐剂与所述血清的重量比为0.05％～0.2％。
[0021]在一个实施例中，向所述第一混合液中加入吸附剂，充分反应后，去除所述吸附剂，得到第二混合液的操作为：向所述第一混合液中加入吸附剂，搅拌12h～24h后，12000g～20000g离心10min～60min，去除沉淀，得到第二混合液，其中，所述吸附剂为孔径为3A～10A的沸石，所述沸石与所述第一混合液的重量比为5％～20％。
[0022]在一个实施例中，对所述第三混合液进行过滤除杂的操作为：将所述第三混合液依次经过0.8μm滤膜、0.45μm滤膜和0.22μm的滤膜过滤，去除杂质和细菌。
[0023]本专利技术的血清去除激素的方法通过吸附剂对小分子激素进行吸附去除，再通过包被有激素抗体的磁珠，特异性且高效地去除残留的小分子激素。
[0024]本专利技术的血清去除激素的方法，用作去除血清中T3、T4时，能够将血清中的T3、T4处理的较为干净，结合测试例，本专利技术的血清去除激素的方法得到的去除了激素的血清中，T3、T4的浓度低于试剂国外厂家罗氏设定的灵敏度指标(检出限)，符合要求。
[0025]此外，由于T3、T4在血清中以与结合蛋白结合的形式存在，结合物分子量较大，不易被吸附清除。本专利技术的血清去除激素的方法中增加了加入蛋白解离剂处理的步骤，使用蛋白解离剂处理后，T3、T4转为游离态，从而可与FT3、FT4一起被清除。
[0026]需要指出的是，由于抗原抗体的结合是可逆的，在一定条件下处理洗脱抗原后，包被有激素抗体的磁珠可以重复利用。
[0027]优选的，吸附剂为孔径为3A～10A的沸石，能有效吸附小分子激素。沸石具有晶体的结构和特征，表面为固体骨架，内部的孔穴可起到吸附分子的作用。孔穴之间有孔道相互连接，分子由孔道经过。由于孔穴的洁净性质，分子筛的孔径分布非常均一。分子筛依据其晶体内部孔穴的大小对分子进行选择性吸附，也就是吸附一定大小的分子而排斥较大物质的分子。沸石中的笼或通道的尺寸很小，使得其中的引力场很强。因此，沸石对小分子激素的吸附能力远超过其他类型的吸附剂。
具体实施方式
[0028]下面将对本专利技术实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本专利技术一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本专利技术保护的范围。
[0029]本专利技术公开了一实施方式的血清去除激素的方法，包括如下步骤：
[0030]S10、提供血清。
[0031]提供血清的操作为：取纯血清，12000g～20000g离心10min～60min后，保留上清液，上清液即为血清，纯血清为人血清、马血清、小牛血清或胎牛血清。
[0032]S20、向血清中加入蛋白解离剂，混匀后得到第一混合液。
[0033]优选的，第一混合液中，蛋白解离剂的浓度为0.01wt本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种血清去除激素的方法，其特征在于，包括如下步骤：提供血清；向所述血清中加入蛋白解离剂，混匀后得到第一混合液；向所述第一混合液中加入吸附剂，充分反应后，去除所述吸附剂，得到第二混合液；向所述第二混合液中加入包被有激素抗体的磁珠，充分反应后，去除所述包被有抗体的磁珠，得到第三混合液，其中，所述激素抗体与所述第二混合液中残留的激素特异性结合；对所述第三混合液进行过滤除杂，得到所需要的去除了所述激素的血清。2.根据权利要求1所述的血清去除激素的方法，其特征在于，所述包被有激素抗体的磁珠中，所述激素抗体的包被量为20μg/mg～50μg/mg；向所述第二混合液中加入包被有激素抗体的磁珠的操作中，所述磁珠与所述第二混合液的比例0.01mg/mL～0.5mg/mL。3.根据权利要求2所述的血清去除激素的方法，其特征在于，所述磁珠为甲苯磺酰基磁珠、羧基磁珠和氨基磁珠的一种，所述磁珠的粒径为0.1μm～8μm。4.根据权利要求3所述的血清去除激素的方法，其特征在于，向所述第二混合液中加入包被有激素抗体的磁珠，充分反应后，去除所述包被有抗体的磁珠，得到第三混合液的操作为：向所述第二混合液中加入包被有激素抗体的磁珠，接着将整个体系震荡1h～6h，再进行磁分离将所述包被有激素抗体的磁珠去除，得到第三混合液。5.根据权利要求3所述的血清去除激素的方法，其特征在于，所述激素抗体选自T3抗体和T4抗体中的至少一种，所述包被有激素抗体的磁珠为包被有T3抗体的磁珠和包被有T4抗体的磁珠中的至少一种。6.根据权...

【专利技术属性】
技术研发人员：赵博文，颜栋，王兴红，
申请(专利权)人：深圳市科曼医疗设备有限公司，
类型：发明
国别省市：