粗壮女贞中四种苯丙素苷类成分含量的测定方法技术

本发明专利技术提供了一种粗壮女贞中四种苯丙素苷类成分含量的一测多评测定方法，包括如下步骤：取毛蕊花糖苷对照品，制备对照品溶液；取粗壮女贞样品，与质量分数为65％～75％的甲醇混合，超声提取，然后过滤，取滤液，制备供试品溶液；将所述对照品溶液与所述供试品溶液分别进行超高效液相色谱测定；其中，超高效液相色谱测定的条件包括：流动相A为甲醇，流动相B为体积分数为0.15％～0.25％的磷酸水溶液。积分数为0.15％～0.25％的磷酸水溶液。积分数为0.15％～0.25％的磷酸水溶液。

【技术实现步骤摘要】
粗壮女贞中四种苯丙素苷类成分含量的测定方法


[0001]本专利技术涉及药物分析检测领域，特别是涉及一种粗壮女贞中四种苯丙素苷类成分含量的测定方法。

技术介绍

[0002]粗壮女贞为木樨科女贞属植物粗壮女贞(Ligustrum robustum subsp.chinense P.S.Green)的成熟叶，在中国四川、贵州和云南等西南地区被广泛用作苦丁茶，是一种传统的药食同源民族药。研究表明苯丙素苷类成分是粗壮女贞的主要药效活性物质。现代药理学证明，粗壮女贞的苯丙素苷类成分具有降酶保肝、抗甲型H1N1流感、抑制甘油三酯合成和促进胆固醇分解代谢、抗氧化应激、抗肿瘤和抗炎等生理活性作用，是一种具有良好开发潜力的药材。2020年版《中国药典》未收录粗壮女贞品种，且现行的四川省和贵州省中药材标准的质量控制项仅限于显微和薄层鉴别，缺乏能够体现药材内在品质的含量测定指标。
[0003]近年来，由于中草药有效成分多样性以及复杂性，以往单一成分含量测定不足以说明其药材质量，亦缺乏专属性。多指标含量同时测定已经成为中草药质量控制的共识，但实施的过程中也会存在对照品消耗量大、检测步骤繁琐和成本高等缺点。一测多评法(quantitative analysis of multi
‑
components by single marker，QAMS)是依据中药多个有效成分之间存在的内在函数关系，遴选出药效明确、廉价且稳定易得的成分作为内参物，建立一种测定单个有效成分便可以实现同时定量多个有效成分的快速测定方法，可以最大程度地提高分析效率和节省研究成本。目前关于粗壮女贞含量测定的相关研究较少，并且尚未出现可以通过一测多评法测定粗壮女贞苯丙素苷类成分含量的报道。

技术实现思路

[0004]基于此，本专利技术提供了一种粗壮女贞中四种苯丙素苷类成分含量的测定方法，所述测定方法能同时、同步测定粗壮女贞中毛蕊花糖苷、异类叶升麻苷、粗壮女贞苷N和紫茎女贞苷B成分的含量，可以实现一测多评，从而简化操作步骤，节省测定时间，且测定结果准确度高。
[0005]本专利技术通过如下技术方案实现。
[0006]一种粗壮女贞中四种苯丙素苷类成分含量的测定方法，包括如下步骤：
[0007]取毛蕊花糖苷对照品，制备对照品溶液；所述毛蕊花糖苷对照品的浓度为Cs；
[0008]取粗壮女贞样品，与质量分数为65％～75％的甲醇混合，超声提取，然后过滤，取滤液，制备供试品溶液；
[0009]将所述对照品溶液与所述供试品溶液分别进行超高效液相色谱测定，获得所述毛蕊花糖苷对照品的峰面积As和所述毛蕊花糖苷对照品的保留时间ts；
[0010]通过ts、相对保留时间T
异类叶升麻苷/毛蕊花糖苷
、T
粗壮女贞苷N/毛蕊花糖苷
和T
紫茎女贞苷B/毛蕊花糖苷
分别确定异类叶升麻苷的色谱峰、粗壮女贞苷N的色谱峰与紫茎女贞苷B的色谱峰，获得所述异类叶升麻苷的峰面积Ai1、所述粗壮女贞苷N的峰面积Ai2与紫茎女贞苷B的峰面积Ai3；
[0011]通过As、Ai1、Cs与相对校正因子f
异类叶升麻苷/毛蕊花糖苷
确定所述异类叶升麻苷的浓度Ci1，通过As、Ai2、Cs与相对校正因子f
粗壮女贞苷N/毛蕊花糖苷
确定所述粗壮女贞苷N的浓度Ci2，通过As、Ai3、Cs与相对校正因子f
紫茎女贞苷B/毛蕊花糖苷
确定所述紫茎女贞苷B的浓度Ci3；
[0012]其中，超高效液相色谱测定的条件包括：流动相A为甲醇，流动相B为体积分数为0.15％～0.25％的磷酸水溶液。
[0013]在其中一个实施例中，超高效液相色谱测定的条件包括：采用梯度洗脱方式；所述梯度洗脱方式为：0min～10min，流动相A的体积百分数为30％；10min～26min，流动相A的体积百分数从30％变化至36％；26min～33min，流动相A的体积百分数从36％变化至41％；33min～37min，流动相A的体积百分数从41％变化至48％；37min～40min，流动相A的体积百分数从48％变化至52％。
[0014]在其中一个实施例中，超高效液相色谱测定的流速为0.20mL/min～0.30mL/min。
[0015]在其中一个实施例中，超高效液相色谱测定的柱温为25℃～35℃。
[0016]在其中一个实施例中，超高效液相色谱测定的检测波长为326nm
±
10nm。
[0017]在其中一个实施例中，超高效液相色谱测定采用的色谱柱为十八烷基硅烷键合硅胶柱。
[0018]在其中一个实施例中，所述十八烷基硅烷键合硅胶柱的尺寸包括：柱长为150mm，内径为2.1mm，粒径为1.7μm。
[0019]在其中一个实施例中，超高效液相色谱测定的进样体积为0.8μL～1.2μL。
[0020]在其中一个实施例中，f
异类叶升麻苷/毛蕊花糖苷
、f
粗壮女贞苷N/毛蕊花糖苷
和f
紫茎女贞苷B/毛蕊花糖苷
分别为1.025、1.254和0.998；
[0021]T
异类叶升麻苷/毛蕊花糖苷
、T
粗壮女贞苷N/毛蕊花糖苷
和T
紫茎女贞苷B/毛蕊花糖苷
分别为1.489、2.004和2.749。
[0022]在其中一个实施例中，制备对照品溶液包括如下步骤：
[0023]将毛蕊花糖苷对照品与甲醇混合。
[0024]在其中一个实施例中，超声提取的条件包括：功率为400W～450W；时间为15min～45min。
[0025]与现有技术相比较，本专利技术的粗壮女贞中四种苯丙素苷类成分含量的测定方法具有如下有益效果：
[0026]本专利技术所述的粗壮女贞中四种苯丙素苷类成分含量的测定方法采用超高效液相色谱技术进行一测多评，限定提取溶剂与方法，并限定流动相为甲醇与体积分数为0.15％～0.25％的磷酸水溶液，采用毛蕊花糖苷作为内参物对异类叶升麻苷、粗壮女贞苷N和紫茎女贞苷B进行同步测定。该方法能够同时、同步且准确地测定粗壮女贞中毛蕊花糖苷、异类叶升麻苷、粗壮女贞苷N和紫茎女贞苷B的含量，从而准确评价和控制粗壮女贞药材的质量，从而保证其临床用药的安全和有效。同时该测定方法可以达到节约实验耗材、简化操作步骤、节省测定时间的目的。
附图说明
[0027]图1为本专利技术实施例提供的测定方法的专属性考察图；
[0028]图2为本专利技术实施例提供的对照品紫外吸收曲线图；其中，1代表毛蕊花糖苷，2代表异类叶升麻苷，3代表粗壮女贞苷N，4代表紫茎女贞苷B；
[0029]图3为本专利技术实施例提供的S1批次粗壮女贞样品的紫外吸收曲线图；其中，1代表毛蕊花糖苷，2代表异类叶升麻苷，3代表粗壮女贞苷N，4代表紫茎女贞苷B；
[0030]图4为本专利技术实施例提供的测定方法的线性考察图；...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种粗壮女贞中四种苯丙素苷类成分含量的测定方法，其特征在于，包括如下步骤：取毛蕊花糖苷对照品，制备对照品溶液；所述毛蕊花糖苷对照品的浓度为Cs；取粗壮女贞样品，与质量分数为65％～75％的甲醇混合，超声提取，然后过滤，取滤液，制备供试品溶液；将所述对照品溶液与所述供试品溶液分别进行超高效液相色谱测定，获得所述毛蕊花糖苷对照品的峰面积As和所述毛蕊花糖苷对照品的保留时间ts；通过ts、相对保留时间T
异类叶升麻苷/毛蕊花糖苷
、T
粗壮女贞苷N/毛蕊花糖苷
和T
紫茎女贞苷B/毛蕊花糖苷
分别确定异类叶升麻苷的色谱峰、粗壮女贞苷N的色谱峰与紫茎女贞苷B的色谱峰，获得所述异类叶升麻苷的峰面积Ai1、所述粗壮女贞苷N的峰面积Ai2与所述紫茎女贞苷B的峰面积Ai3；通过As、Ai1、Cs与相对校正因子f
异类叶升麻苷/毛蕊花糖苷
确定所述异类叶升麻苷的浓度Ci1，通过As、Ai2、Cs与相对校正因子f
粗壮女贞苷N/毛蕊花糖苷
确定所述粗壮女贞苷N的浓度Ci2，通过As、Ai3、Cs与相对校正因子f
紫茎女贞苷B/毛蕊花糖苷
确定所述紫茎女贞苷B的浓度Ci3；其中，超高效液相色谱测定的条件包括：流动相A为甲醇，流动相B为体积分数为0.15％～0.25％的磷酸水溶液。2.根据权利要求1所述的粗壮女贞中四种苯丙素苷类成分含量的测定方法，其特征在于，超高效液相色谱测定的条件包括：采用梯度洗脱方式；所述梯度洗脱方式为：0min～10min，流动相A的体积百分数为30％；10min～26min，流动相A的体积百分数从30％变化至36％；26min～33min，流动相A的体积百分数从36％变化至41％；33min～37min，流动相A的体积百分数从41％变化至48％；37min～40min，流动相A的体积百分数从48％变化至52％。3.根据权利...

【专利技术属性】
技术研发人员：孙冬梅，范倩，陈芳，罗文汇，马懿飞，凌志洲，贾小舟，刘艳梅，李振雨，陈向东，
申请(专利权)人：广东一方制药有限公司，
类型：发明
国别省市：