sgRNA组合物、检测新型冠状病毒SARS-CoV-2的试剂盒以及检测方法技术

本申请提供了一种sgRNA组合物，用于检测新型冠状病毒SARS

【技术实现步骤摘要】
sgRNA组合物、检测新型冠状病毒SARS
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CoV
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2的试剂盒以及检测方法


[0001]本申请涉及医学生物领域，特别涉及sgRNA组合物、检测新型冠状病毒SARS
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CoV
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2的试剂盒以及检测方法。

技术介绍

[0002]因此，对新型冠状病毒SARS
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CoV
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2的筛查显得尤为重要。目前可以通过反转录聚合酶链反应(RT
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PCR)进行病毒核酸检测，该检测方法灵敏性高、特异性强，能够发现感染早期或感染潜伏期的患者；但该方法涉及核酸灭活、反转录和扩增等步骤，需要依赖专业的扩增仪器和实验环境，且检测时间较长，不利于病毒的快速筛查。

技术实现思路

[0003]有鉴于此，本申请提供了sgRNA组合物、检测新型冠状病毒SARS
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CoV
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2的试剂盒以及新型冠状病毒SARS
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CoV
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2的检测方法，采用该sgRNA组合物能够对新型冠状病毒SARS
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CoV
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2进行快速有效的检测，检测限低，检测灵敏性和特异性高，同时无需依赖专业的仪器和检测环境，检测条件更为简单，可以实现新型冠状病毒SARS
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CoV
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2的快速检测。
[0004]第一方面，本申请提供了一种sgRNA组合物，用于检测新型冠状病毒SARS
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CoV
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2，包括第一sgRNA、第二sgRNA和第三sgRNA，所述第一sgRNA的序列包括SEQ ID NO:1所示的核苷酸序列，所述第二sgRNA的序列包括SEQ ID NO:2所示的核苷酸序列，所述第三sgRNA的序列包括SEQ ID NO:3所示的核苷酸序列。
[0005]第二方面，本申请提供了第一方面所述的sgRNA组合物在检测新型冠状病毒SARS
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CoV
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2的试剂盒中的应用。
[0006]第三方面，本申请提供了一种检测新型冠状病毒SARS
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CoV
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2的试剂盒，包括第一方面所述的sgRNA组合物。
[0007]可选的，所述试剂盒还包括Cas13a蛋白和报告基因。
[0008]可选的，所述试剂盒还包括稀释缓冲液和RNA酶抑制剂中的至少一种。
[0009]进一步的，所述稀释缓冲液的pH值为6.5
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6.9。
[0010]进一步的，所述稀释缓冲液包括18mM
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21mM的4
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羟乙基哌嗪乙磺酸钠盐、45mM
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58mM的氯化钾、4.5mM
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6.3mM的氯化镁和4.5％v/v
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5.5％v/v的丙三醇。
[0011]可选的，所述试剂盒检测新型冠状病毒SARS
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CoV
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2的最低检测限为150copies/mL。
[0012]第四方面，本申请提供了一种新型冠状病毒SARS
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CoV
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2的检测方法，包括：采用第一方面所述的sgRNA组合物或第二方面所述的检测新型冠状病毒SARS
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CoV
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2的试剂盒对待测样本进行检测。
[0013]可选的，将第一sgRNA、第二sgRNA、第三sgRNA与Cas13a蛋白混合并孵育，形成RNP复合物；所述待测样本与所述RNP复合物、报告基因混合形成反应体系，反应后获得荧光信
号值并分析结果。
[0014]进一步的，所述第一sgRNA、第二sgRNA、第三sgRNA与Cas13a蛋白混合时，所述Cas13a蛋白、所述第一sgRNA、所述第二sgRNA和所述第三sgRNA的摩尔比为(3
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4):1:1:1。
[0015]进一步的，所述孵育包括在35℃
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42℃处理10min
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15min。
[0016]进一步的，所述反应体系中所述RNP复合物的浓度为80nM
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110nM。
[0017]进一步的，所述反应体系中所述报告基因的浓度为300nM
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400nM。
[0018]进一步的，所述反应包括在30℃
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60℃处理10min
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15min。
[0019]本申请提供的sgRNA组合物能够对新型冠状病毒SARS
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CoV
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2进行快速有效的检测，检测限低，检测灵敏性和特异性高，同时无需依赖专业的仪器和检测环境，但可以达到RT
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PCR同等检测水平，检测条件、检测时间更加方便，可以实现新型冠状病毒SARS
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CoV
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2的特异性快速检测，有利于疾病治疗以及控制。
附图说明
[0020]图1为样本4的第一组的荧光信号图。
[0021]图2为不同样本的第一组在荧光下的示意图。
[0022]图3为样本4的第一组的荧光信号图。
具体实施方式
[0023]以下所述是本申请示例性的实施方式，应当指出，对于本
的普通技术人员来说，在不脱离本申请原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也视为本申请的保护范围。
[0024]相关技术中，为了对新型冠状病毒SARS
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CoV
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2的准确检测，则需要通过PCR等途径进行检测，而这需要专业的设备和仪器，并且耗时较长，如RT
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PCR需要价格昂贵的仪器、专业的技术人员以及反应时间耗时久且需要不同反应温度和反应时长的反应过程；而采用其他检测方法，如试纸检测等，虽然极大降低了检测时间，但也随之降低了检测的准确性，造成假阴性等，不利于感染的准确判断以及控制。
[0025]本申请提供了一种sgRNA组合物，用于检测新型冠状病毒SARS
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CoV
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2，包括第一sgRNA、第二sgRNA和第三sgRNA，第一sgRNA的序列包括SEQ ID NO:1所示的核苷酸序列(GACCACCCCAAAAAUGAAGGGGACUAAAACAGGGUCCACCAAACGUAAUGCGG)，第二sgRNA的序列包括SEQ ID NO:2所示的核苷酸序列(GACCACCCCAAAAAUGAAGGGGACUAAAACUUUGGUGUAUUCAAGGCUCCCU)，第三sgRNA的序列包括SEQ ID NO:3所示的核苷酸序列(GACCACCCCAAAAAUGAAGGGGACUAAAACAAGCGCAGUAAGGAUGGCUAGU)。其中，sgRNA(single guide RNA)是CRISPR敲除系本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种sgRNA组合物，用于检测新型冠状病毒SARS
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CoV
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2，其特征在于，包括第一sgRNA、第二sgRNA和第三sgRNA，所述第一sgRNA的序列包括SEQ ID NO:1所示的核苷酸序列，所述第二sgRNA的序列包括SEQ ID NO:2所示的核苷酸序列，所述第三sgRNA的序列包括SEQ ID NO:3所示的核苷酸序列。2.权利要求1所述的sgRNA组合物在检测新型冠状病毒SARS
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CoV
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2的试剂盒中的应用。3.一种检测新型冠状病毒SARS
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CoV
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2的试剂盒，其特征在于，包括权利要求1所述的sgRNA组合物。4.如权利要求3所述的检测新型冠状病毒SARS
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CoV
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2的试剂盒，其特征在于，还包括Cas13a蛋白和报告基因。5.如权利要求3或4所述的检测新型冠状病毒SARS
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CoV
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2的试剂盒，其特征在于，还包括稀释缓冲液和RNA酶抑制剂中的至少一种；所述稀释缓冲液的pH值为6.5
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6.9；所述稀释缓冲液包括18mM
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21mM的4
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羟乙基哌嗪乙磺酸钠盐、45mM
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58mM的氯化钾、4.5mM
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6.3mM的氯化镁和4.5％v/v
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5.5％v/v的丙三醇。6.如权利要求3
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5任一项所述的检测新型冠状病毒SARS

【专利技术属性】
技术研发人员：董倩，吴方贵，刘尚杰，覃金洲，
申请(专利权)人：深圳市厚生生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：