一种改造体抗菌肽RI-18及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一种改造体抗菌肽RI

【技术实现步骤摘要】
一种改造体抗菌肽RI
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18及其应用


[0001]本专利技术涉及一种改造体抗菌肽RI
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18及其应用，属于抗菌肽


技术介绍

[0002]近年来由于广谱抗生素、抗菌药物的大量使用或滥用，使得各种耐药性细菌大量涌现，每年，全球有近100万人死于无法用普通抗生素治疗的细菌感染。同时，由于细菌的耐药基因可横向传播，进一步加速了“超级细菌”的诞生。此外，也由于新型抗生素研发能力不足，人类有可能面临无有效抗生素使用的后抗生素时代的到来。2017年2月27日，世界卫生组织(WHO)发布迫切需要新型抗生素的细菌清单用于指导和促进新型抗生素的研究与开发。这份清单列出的12种耐药细菌中有9种属于革兰氏阴性细菌，3种属于革兰氏阳性细菌。其中，碳青霉烯类耐药鲍曼不动杆菌和绿脓杆菌是所列革兰氏阴性菌中耐药性最为严重的两类菌。在所列的3种革兰氏阳性菌中，甲氧西林耐药及万古霉素耐药的金黄色葡萄球菌在全球范围内的耐药情况最为严重。
[0003]抗菌肽是一类具有抗菌活性的多肽类小分子，因其具有强大且广谱的抗菌活性受到全世界的关注，可用于新型抗菌候选药物分子的开发。抗菌肽在昆虫、植物及动物中分布广泛，一些抗菌肽在动物自身的免疫防御系统中发挥重要的作用，如抗菌、抗氧化及免疫抑制等。抗菌肽一般具有阳离子性及两亲性等特点，使其能够特异与带有负电荷的细菌细胞膜结合，发挥抗菌功能。抗菌肽与传统抗生素作用方式不同，相对传统抗生素，抗菌肽以抗菌谱广、杀菌能力强、杀菌速度快、不易产生耐药性等特点被用于新型替抗产品的开发。以抗菌肽为新型抗菌候选药物分子进行开发不仅可以对感染性疾病的治疗提供帮助，更可以对全球耐药性细菌的扩散及“超级细菌”的治疗提供有效的解决办法。

技术实现思路

[0004]为应对当前越来越严重的耐药性细菌的传播和引起的感染等问题，本专利技术提供了一种具有广谱抗菌活性、无细胞毒性和溶血作用，靶向破坏细菌细胞膜的新型抗菌肽，其在降低抗菌药物耐药性方面具有应用价值。
[0005]本专利技术的第一个目的是提供一种改造体抗菌肽，经SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列改造得到。
[0006]进一步地，改造体抗菌肽的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。
[0007]进一步地，所述改造体抗菌肽的碳端经酰胺化修饰。
[0008]本专利技术的第二个目的是提供SEQ ID NO.1所示的抗菌肽或上述改造体抗菌肽在制备抗细菌感染药物中的应用。
[0009]进一步地，所述抗细菌感染药物用于抑制革兰氏阳性细菌或革兰氏阴性细菌。
[0010]进一步地，所述的革兰氏阳性细菌包括金黄色葡萄球菌。
[0011]进一步地，所述的革兰氏阴性细菌包括大肠杆菌、鲍曼不动杆菌或绿脓杆菌。
[0012]进一步地，所述抗细菌感染药物中还包括抗生素。
[0013]本专利技术的第三个目的是提供SEQ ID NO.2所示的改造体抗菌肽在制备耐药细菌感染治疗药物中的应用。
[0014]进一步地，所述耐药细菌包括革兰氏阳性细菌或革兰氏阴性细菌。
[0015]进一步地，所述的革兰氏阳性细菌包括金黄色葡萄球菌。
[0016]进一步地，所述的革兰氏阴性细菌包括大肠杆菌、鲍曼不动杆菌或绿脓杆菌。
[0017]本专利技术的第四个目的是提供SEQ ID NO.1所示的抗菌肽或上述改造体抗菌肽在制备抗生物膜药物中的应用。
[0018]进一步地，所述抗生物膜药物用于清除生物膜或抑制生物膜的形成。
[0019]本专利技术的有益效果：
[0020]本专利技术以壁虎来源的抗菌肽为基础进行改造，得到包含18个氨基酸的改造体抗菌肽RI
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18，分子量为2167.83道尔顿，等电点为12.06，为直链多肽，所有氨基酸均为L型。体外抑菌实验表明，RI
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18具有广谱抗菌活性，对鲍曼不动杆菌、绿脓杆菌、大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的标准菌株和临床来源耐药菌株均表现较好的抗菌作用，最小抑菌浓度(MIC)值为1.17
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18.75μg/mL。抗菌机理实验表明RI
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18可靶向破坏细菌的细胞膜。同时，该多肽无细胞毒性和溶血作用。
附图说明
[0021]图1是抗菌肽RA
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48和RI
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18的helical wheel模型。
[0022]图2是抗菌肽RI
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18在0
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8mM浓度SDS时的圆二色谱图。
[0023]图3是抗菌肽RI
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18对人角质化细胞HaCaT(A)和人胚肾细胞HEK293T(B)的细胞毒性实验结果。
[0024]图4是抗菌肽RI
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18对人红细胞的溶血作用实验结果。其中，PC指Triton X
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100(10％)对照，NC为生理盐水对照。
[0025]图5是抗菌肽RI
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18对鲍曼不动杆菌0357和金黄色葡萄球菌ATCC6538细胞膜破膜的影响。
具体实施方式
[0026]下面结合附图和具体实施例对本专利技术作进一步说明，以使本领域的技术人员可以更好地理解本专利技术并能予以实施，但所举实施例不作为对本专利技术的限定。
[0027]实施例1：RI
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18序列及其制备
[0028]获取壁虎(Gekko japonicus)基因组中预测的cathelicidin相关多肽为母本，该母本肽的氨基酸序列见SEQ ID NO.1，具体为：RRGIKKFIKKVKKVKKAIKEGIKKGIKKLLSGGGSNIAHGPGGRRHIA，命名为RA
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48。
[0029]通过分子改造方法，截取母本肽中的关键氨基酸片段，获得改造体，命名为RI
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18，该片段可以形成双亲性α螺旋结构，其氨基酸序列为RRGIKKFIKKVKKVKKAI(SEQ ID NO.2)。包含18个氨基酸，碳端酰胺化，分子量为2167.83道尔顿，等电点为12.06，为直链多肽，所有氨基酸均为L型。
[0030]RA
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48和RI
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18的helical wheel模型通过网站：https://heliquest.ipmc.cnrs.fr构建，如图1所示，该图显示RI
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18呈现更为典型的双亲性结构。
[0031]以下实施例中用到的抗菌肽RA
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48和RI
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18，委托吉尔生化(上海)有限公司，通过固相合成方式进行合成，其C端做了酰胺化修饰，并通过HPLC反相柱层析脱盐纯化。
[0032]实施例2：抗菌肽RA
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48和RI
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18对鲍曼不动杆菌、绿脓杆菌、大肠杆菌和金黄色葡萄球菌标准菌株及临床来源耐药菌株的最小抑菌浓度(MIC)测试
[0033]将测试菌本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种改造体抗菌肽，其特征在于，经SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列改造得到。2.根据权利要求1所述的改造体抗菌肽，其特征在于：所述改造体抗菌肽的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。3.根据权利要求1所述的改造体抗菌肽，其特征在于：所述改造体抗菌肽的碳端经酰胺化修饰。4.SEQ ID NO.1所示的抗菌肽或权利要求1
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3任一项所述的改造体抗菌肽在制备抗细菌感染药物中的应用。5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于：所述抗细菌感染药物中还包括抗生素。6.S...

【专利技术属性】
技术研发人员：张治业，吴忠香，蔡英，张天宇，王柳楠，
申请(专利权)人：中国医学科学院医学生物学研究所，
类型：发明
国别省市：