一种盐酸多西环素中有关物质检测方法技术

本发明专利技术涉及化学药物分析技术领域，且公开了一种盐酸多西环素中有关物质检测方法，采用高效液相色谱法对盐酸多西环素有关物质进行分析，色谱条件包括：色谱柱为Wondasil

【技术实现步骤摘要】
一种盐酸多西环素中有关物质检测方法


[0001]本专利技术涉及化学药物分析
，更具体的公开了一种盐酸多西环素中有关物质检测方法。

技术介绍

[0002]多西环素，英文名doxycycline，又名强力霉素、脱氧土霉素等，是一种半合成四环素类抗生素。多西环素的主要合成方式是以土霉素为原料，经氯代、脱水制得11α
‑
氯
‑6‑
次甲基土霉素对甲苯磺酸盐，然后经加氢法制得脱氧土霉素对甲苯磺酸盐，最后经成盐、精制纯化后得盐酸多西环素，在其半合成过程中，手性杂质、反应副产物杂质、副反应杂质、降解杂质、催化剂配体残留等杂质会严重影响多西环素的质量，尤其是差向异构体手性杂质以及多西环素结构类似的杂质，液相分析一般较难达到较好的分离度。与天然四环素类药物土霉素、四环素相比，多西环素具有较多的特点，比如：多西环素具有抗菌活性强、组织穿透力强、体内分布广、生物利用度高、消除半衰期长等。除了对革兰氏阳性菌和阴性菌有作用外，还可以起到抑制立克次体、肺炎支原体、砂眼支原体、阿米巴原虫等作用，特别是慢性支气管炎病人呼吸道中常见的致病菌对盐酸多西环素都比较敏感。多西环素还经常大量用于养殖业，其作为饲料添加剂能起到促生长、预防和治疗疾病的作用。
[0003]药物的合成制备过程中，杂质的产生难以避免，中国药典以及外国药典标准均对多西环素原料药杂质限度进行控制。中国药典ChP2020标准中美他环素与β
‑
多西环素峰面积均不得大于2.0％，其他单个杂质峰面积不得大于1.0％，各杂质峰面积之和不得大于4.0％。
[0004]结合合成路线中的相关起始原料、中间体残留和手性杂质、反应副产物杂质、副反应杂质、降解杂质、催化剂配体残留等，进行有关物质检测方法的重现时，发现已有的分析方法有些杂质之间不能够得到有效分离，或是方法并未对系统适用性、专属性、检测限、耐用性等进行全面验证。因此，有必要进行检测分析方法的再开发，为盐酸多西环素原料药的质量可控提供一个经方法学验证的分析检测方法。

技术实现思路

[0005]本专利技术主要解决的技术问题是提供一种盐酸多西环素中有关物质检测方法，能够解决杂质E、杂质F与多西环素分离度不满足要求的技术问题。
[0006]为解决上述技术问题，根据本专利技术的一个方面，更具体的说是一种盐酸多西环素中有关物质检测方法，包括以下步骤：
[0007]采用高效液相色谱方法进行杂质分析检测。用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以缓冲盐溶液
‑
乙腈为流动相A，以乙腈为流动相B；流速为每分钟0.8
‑
1.5ml，梯度洗脱；检测波长为280
±
2nm；柱温为35
‑
45℃；进样体积10
‑
30μl。
[0008]更进一步的，色谱条件中所用的色谱柱为C18硅胶柱，更优选为Wondasil
‑
C18，4.6mm
×
250mm，5μm或效能相当的色谱柱。
[0009]更进一步的，流动相A所描述的缓冲盐溶液为0.01mol/L庚烷磺酸钠、0.005mol/L磷酸二氢钾和1％三乙胺溶液，用磷酸调节pH值至8.2)
‑
乙腈(90:10)。
[0010]更进一步的，色谱条件中的流速为每分钟1.0ml。
[0011]更进一步的，色谱条件中的柱温为40℃。
[0012]更进一步的，色谱条件中的梯度洗脱程序见下表：
[0013][0014]更进一步的，色谱条件中的进样体积为20ul。
[0015]本专利技术一种盐酸多西环素中有关物质检测方法的有益效果为：本专利技术提出了一种盐酸多西环素中有关物质的检测方法，采用高效液相色谱方法进行杂质分析检测，用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以缓冲盐溶液
‑
乙腈为流动相A，以乙腈为流动相B；流速为每分钟0.8
‑
1.5ml，梯度洗脱；检测波长为280
±
2nm；柱温为35
‑
45℃；进样体积10
‑
30μl。该方法经过验证，能够检测出药典标准中所有杂质，同时检测多个与特定工艺相关的特定杂质。试验结果表明，该专利技术中提供的检测方法，已知杂质各组分间分离度均＞1.5，已知杂质和空白溶剂均不干扰主成分测定，已知杂质峰之间分离度均＞1.5；保留时间RSD均≤1.0％；峰面积RSD均≤2.0％；理论板数均＞3000，表明本方法系统适用性良好。本方法中盐酸多西环素和各已知杂质的检测限和定量限均可满足本品有关物质检测要求，各杂质的检测限满足分析要求；检测限信噪比≥3，低于供试品溶液主成分浓度的0.01％。定量限信噪比≥10；适用性峰面积RSD≤10％；定量限≤限度浓度的1/3；定量限浓度的准确度应符合药典要求(浓度＜限度浓度：准确度在85～110％范围内；浓度≥限度浓度：准确度在90～108％范围内)；耐用性好。综合试验结果表明，该检测方法完全满足分析要求，且重点在于该分析检测方法能顺利通过方法学验证。
附图说明
[0016]下面结合附图和具体实施方法对本专利技术做进一步详细的说明。
[0017]图1为实施例一标准方法重现液相对比图；
[0018]图2为实施例二专属性定位液相对比图。
具体实施方式
[0019]下文中将参考附图并结合实施例来详细说明本专利技术。需要说明的是，在不冲突的情况下，本申请中的实施例及实施例中的特征可以相互组合。
[0020]实施例一
[0021]参照ChP2020中的盐酸多西环素质量标准中有关物质的色谱条件，综合相关起始原料、中间体残留和手性杂质、反应副产物杂质、副反应杂质、降解杂质、催化剂配体残留等进行方法重现。
[0022]用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以醋酸盐缓冲液[0.25mol/L醋酸铵
‑
0.1mol/L乙二胺四醋酸二钠
‑
三乙胺(100∶10∶1)，用氨水调节pH值至8.8]‑
乙腈(85∶15)为流动相；柱温为35℃；检测波长为280nm；进样体积20μl。
[0023]对照品溶液：取盐酸多西环素工作对照品、杂质C、杂质E和杂质F对照品各约50mg，分别置20ml量瓶中，用水溶解并稀释至刻度，摇匀，即得母液；取杂质D、杂质A、杂质B、杂质H和杂质I对照品各约50mg，分别置20ml量瓶中，用乙腈
‑
水(1:1)溶解并稀释至刻度，摇匀，即得母液；精密量取各对照品母液1.0ml置于同一50ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，即得储备液；精密量取储备液1.0ml置25ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，即得每1ml中约含各对照品2μg的溶液。
[0024]系统适用性溶液：精密称取盐酸多西环素工作对照品50mg，置于25ml容量瓶中，加储备液1.0ml，加水稀释至刻度，摇匀，即得每1ml中约含2.0mg盐酸多西环素和2μg杂质的混合溶液。
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种盐酸多西环素中有关物质检测方法，其特征在于，包括以下步骤：采用高效液相色谱法进行分析，色谱条件包括：色谱柱为十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以缓冲盐溶液(0.01mol/L庚烷磺酸钠、0.005mol/L磷酸二氢钾和1％三乙胺溶液，用磷酸调节pH值至8.0
‑
8.4)
‑
乙腈(89
‑
91vt％:11
‑
9％)为流动相A，以乙腈为流动相B；进行梯度洗脱；检测波长为280
±
2nm。2.根据权利要求1所述的一种盐酸多西环素中有关物质检测方法，其特征在于：所使用的色谱柱为Wondasil
‑
C18，4.6mm
×
250mm，5μm或效能相当的色谱柱。3.根据权利要求1所述的一种盐酸多西环素中有关物质检测方法，其特征在于：梯度程序为0
‑
25min内，流动相A比例为100％，流动相B为零；25
‑
45min内，流动相B由零匀速上升至35％；保持至50min；50
‑<...

【专利技术属性】
技术研发人员：史立建，周仲方，聂丰秋，张伟，高伟兴，李占荣，郑丽丽，王迈，宋晓磊，李桥，吕艳鹏，白桦，李涛，刘晓静，
申请(专利权)人：河北威远药业有限公司，
类型：发明
国别省市：