甘薯sporamin蛋白的特征肽段在鉴别甘薯产品真实性方面的应用制造技术

本发明专利技术涉及甘薯sporamin蛋白的特征肽段在鉴别甘薯产品真实性方面的应用，属于食品检测领域，所述属于食品检测领域，所述特征肽段的序列为：RPLGHDVQM。所述应用方法为检测样品中是否含有所述的特征肽段；若含有所述特征肽段，则判定所述样品中含有甘薯；若不含有所述特征肽段，则判定所述样品中不含有甘薯。本发明专利技术提供的甘薯sporamin蛋白含量的检测方法特异性强，能够从木薯、玉米、甘薯、马铃薯、芋头蛋白的中区分出甘薯sporamin蛋白。白的中区分出甘薯sporamin蛋白。白的中区分出甘薯sporamin蛋白。

【技术实现步骤摘要】
甘薯sporamin蛋白的特征肽段在鉴别甘薯产品真实性方面的应用


[0001]本专利技术属于食品检测领域，具体地涉及甘薯sporamin蛋白的特征肽段在鉴别甘薯产品真实性方面的应用。

技术介绍

[0002]Sporamin是甘薯(Ipomoeabatatas Lam.)块根中一组特殊的蛋白质，1985年由Maeshima等发现，它主要存在于甘薯块根中，占块根可溶性蛋白质的60％～80％，而其它器官中则几乎没有。它是一类贮藏蛋白，在植株发育中为萌发的幼苗提供N源，同时又具某些酶的活性。
[0003]甘薯淀粉及其制品以其耐煮、口感好等优良品质而被人们所认可，因此甘薯生产加工企业和个体工商户也都取得了良好的经济效益。但是由于市场上玉米淀粉、木薯淀粉和甘薯淀粉价格差异较大，一些个体和生产商受经济利益的驱使，在甘薯产品中掺假，使得甘薯产品的品质下降，甚至用玉米制品或者木薯制品来替代甘薯产品进行销售。

技术实现思路

[0004]本专利技术针对上述技术问题提供一种甘薯sporamin蛋白的特征肽段在鉴别甘薯产品真实性方面的应用。所述应用通过对sporamin蛋白特征肽段的检测，可以有效判断样品中是否含有甘薯。
[0005]本专利技术是通过如下技术方案来实现的：
[0006]甘薯sporamin蛋白的特征肽段在鉴别甘薯产品真实性方面的应用，所述特征肽段的序列为：RPLGHDVQM。
[0007]进一步，所述应用方法为检测样品中是否含有所述的特征肽段；若含有所述特征肽段，则判定所述样品中含有甘薯；若不含有所述特征肽段，则判定所述样品中不含有甘薯。
[0008]进一步，所述的应用为用于鉴别甘薯产品中是否达到其所标注甘薯含量。
[0009]作为优选，采用液相色谱串联质谱进行所述检测，所述特征肽段在质谱中所产生的检测信号的母离子具有m/z525.76110的质荷比；子离子包含质荷比为m/z798.36887和m/z1051.52275的子离子，其允许偏差在5ppm以内。
[0010]作为优选，采用同位素内标法对甘薯sporamin蛋白进行定量检测，其中所使用的内标肽段为：RPLGHDVQM*；所述内标肽段在质谱中所产生的检测信号的母离子为m/z530.76523；子离子包含质荷比为m/z808.83658和m/z1060.94784的子离子，其允许偏差在5ppm以内。
[0011]进一步，根据特征肽段/稳定同位素内标肽段峰面积比带入公式求得特征肽段浓度，再根据式1得到特征肽RPLGHDVQM的含量；
[0012]X＝(Ф*c*V)/m 式1；
[0013]其中，X为(ng/g)是甘薯样品中特征肽段RPLGHDVQM的含量，Ф是酶解蛋白体积占总样品体积比例，c(ng/mL)是特征肽段在胰蛋白酶消化物中的浓度，V(mL)是胰蛋白酶消化物的体积，m(g)是甘薯样品的质量。以达到对甘薯样品中特征肽段RPLGHDVQM定量的目的。
[0014]样品中只有在精确m/z值和特征碎片离子方面同时满足以上的特异性，方可肯定所求的该样品中的sporamin蛋白含量可信，根据此含量的高低鉴别样品质量。
[0015]作为优选，所述样品的前处理包括：对待测样品中的蛋白进行提取，采用胰蛋白酶对所述蛋白进行酶解。
[0016]作为优选，采用UHPLC
‑
Q Exactive plus或三重四级杆质谱进行液相色谱串联质谱检测。
[0017]本专利技术与现有技术相比的有益效果：本专利技术利用甘薯sporamin蛋白的特征肽鉴别甘薯产品真实性，根据待测样品中甘薯sporamin蛋白的特征肽的含量，进而获得甘薯的含量，从而进一步推算出样品中甘薯的比例。本专利技术提供的甘薯sporamin蛋白含量的检测方法特异性强，对消费者合理选择甘薯产品提供了方法支撑，保护了消费者权益。
附图说明
[0018]图1为甘薯样品中特征肽段的离子流图；
[0019]图2为甘薯样品特征肽段的质谱图；
[0020]图3为甘薯样品特征肽段的二级碎片质谱图；
[0021]图4为甘薯样品内标(IS)肽段的离子流图；
[0022]图5为甘薯样品内标(IS)肽段的质谱图；
[0023]图6为甘薯样品内标(IS)肽段的二级碎片质谱图。
具体实施方式
[0024]下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。
[0025]下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。
[0026]超高效液相色谱串联四极杆/高分辨静电轨道阱质谱仪(UHPLC
‑
Q Exactive Plus)、高速离心机、微孔滤膜、Sephadex G
‑
75凝胶层析柱、超滤杯、EAE
‑
52离子交换层析柱、NaHSO3、Tris
‑
HCl缓冲溶液、硫酸铵、EDTA、NaCl、碘乙酰胺(Iodoacetamide，IAA)、二硫苏糖醇(DL
‑
Dithiothreitol，DTT)、NH4HCO3、质谱级胰蛋白酶；
[0027]40mMNH4HCO3溶液：称取0.316g NH4HCO3，用超纯水定容100mL，4℃冰箱保存待用。
[0028]100mMDTT溶液：称取DTT0.308 g，用40mMNH4HCO3溶液溶解、混匀并定容至20mL，
‑
20℃冰箱保存待用。
[0029]100mM IAA溶液：称取IAA 0.39g，用40mM的NH4HCO3溶液定溶至20mL，
‑
20℃冰箱保存待用。
[0030]50mmol
·
L
‑1Tris
‑
HCl缓冲溶液：称量6.055g Tris置于1L烧杯中，加入约800mL的去离子水，充分搅拌溶解，加入浓盐酸调节所需要的pH值，将溶液定容至1L。
[0031]实施例1甘薯sporamin蛋白特征肽段的发掘。
[0032]第一步、选取新鲜甘薯进行清洗、称重、切碎，加入含有0.1％NaHSO350mmol
·
L
‑1Tris
‑
HCl缓冲溶液(pH 7.5)中浸泡(1L
·
kg
‑1鲜重)，匀浆，浆液以3500r/min离心15min，取
上清液，冰浴下添加硫酸铵至60％的饱和度，静置，3500r/min离心35min，沉淀回溶，冷冻干燥，得到粗蛋白粉。
[0033]第二步、称取适量的甘薯粗蛋白粉，加入100mL蒸馏水使其溶解，10000r/min离心45min。上清液经微孔滤膜过滤后，过DEAE
‑
52离子交换层析柱净化。用含1mmol
·
L
‑1EDTA和0.2mol
·
L
‑1NaCl的50mmol
·
L
...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.甘薯sporamin蛋白的特征肽段在鉴别甘薯产品真实性方面的应用，其特征在于，所述特征肽段的序列为：RPLGHDVQM。2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述应用方法为检测样品中是否含有所述的特征肽段；若含有所述特征肽段，则判定所述样品中含有甘薯；若不含有所述特征肽段，则判定所述样品中不含有甘薯。3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述的应用为用于鉴别甘薯产品中是否达到其所标注甘薯含量。4.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，采用液相色谱串联质谱进行所述检测，所述特征肽段在质谱中所产生的检测信号的母离子具有m/z525.76110的质荷比；子离子包含质荷比为m/z798.36887和m/z1051.52275的子离子，其允许偏差在5ppm以内。5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，采用UHPLC
‑
QExactiveplus或三重四级杆质谱进行液相色谱串联质谱检...

【专利技术属性】
技术研发人员：李彦伸，毛馨，李启燕，郝倩，傅怡，尤艳莉，
申请(专利权)人：烟台大学，
类型：发明
国别省市：