一种免疫佐剂质量差异的检测方法技术

本发明专利技术一种免疫佐剂质量差异的检测方法，包括：基于含目的免疫佐剂质量控制片段的标准质粒的qPCR反应的CT值和C的对数值建立CT与C的对数值的标准曲线；将不同生产批次目的免疫佐剂的qPCR反应的CT值代入标准曲线，获得不同生产批次目的免疫佐剂的C的对数值；将不同生产批次目的免疫佐剂的C的对数值或C进行对比，获得对比结果；根据对比结果获得不同生产批次的目的免疫佐剂的质量差异。本发明专利技术实现利用qPCR技术对目的免疫佐剂的免疫活性基序进行质控，且为不同生产批次的目的免疫佐剂的质量差异提供了检测方法，与以非甲基化的CpG进行质控研究相比，省去了样品的甲基化处理和高效液相上机等复杂操作。液相上机等复杂操作。液相上机等复杂操作。

【技术实现步骤摘要】
一种免疫佐剂质量差异的检测方法


[0001]本专利技术属于佐剂生产
，特别涉及一种免疫佐剂质量差异的检测方法。

技术介绍

[0002]佐剂同抗原一起或预先注入机体内能增强机体对抗原的免疫应答能力或改变免疫应答类型的辅助物质，其质量关乎到人体对疫苗的免疫过程以及抗体的产生。在现有技术中，佐剂生产中佐剂质控指标仅以非甲基化DNA基序的含量和核酸纯度，其中，甲基化质控存在操作步骤繁琐、对操作人员试验技术要求极高、耗时周期长等缺点。其中，BCG－CpG－DNA是从卡介菌破碎菌体中提取的DNA片段，采用的机械破碎具有随机性，难以检测BCG－CpG佐剂生产批次间的差异。
[0003]基于此，本专利技术提供了一种免疫佐剂质量差异的检测方法。

技术实现思路

[0004]针对上述问题，本专利技术提供了一种免疫佐剂质量差异的检测方法。
[0005]本专利技术的目的通过以下技术方案实现：
[0006]一种免疫佐剂质量差异的检测方法，包括：
[0007]基于含目的免疫佐剂质量控制片段的标准质粒的qPCR反应的CT值本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种免疫佐剂质量差异的检测方法，其特征在于，包括：基于含目的免疫佐剂质量控制片段的标准质粒的qPCR反应的CT值和C的对数值建立CT与C的对数值的标准曲线，其中，qPCR反应表示实时荧光定量长链聚合酶链式反应，CT值表示扩增前后目的免疫佐剂的质量控制片段含量的变化值，C表示质量控制片段的拷贝数；将不同生产批次目的免疫佐剂的qPCR反应的CT值代入标准曲线，获得不同生产批次目的免疫佐剂的C的对数值；将不同生产批次目的免疫佐剂的C的对数值或C进行对比，获得对比结果；根据对比结果获得不同生产批次的目的免疫佐剂的质量差异。2.根据权利要求1所述的免疫佐剂质量差异的检测方法，其特征在于，所述基于含目的免疫佐剂质量控制片段的标准质粒的qPCR反应的CT值和C的对数值建立CT与C的对数值的标准曲线，包括：基于目的免疫佐剂的质量控制片段建立标准质粒，并获得1μg/mL标准质粒中含有的质量控制片段的拷贝数C，即获得1μg/mL标准质粒的C的对数值；基于目的免疫佐剂的质量控制片段确定qPCR反应的引物对；以不同浓度同体积的标准质粒溶液为qPCR反应的扩增模板，以引物对组成反应体系，进行qPCR扩增，扩增结束后测量，获得不同浓度同体积的标准质粒溶液的CT值；基于1μg/mL标准质粒的C的对数值计算不同浓度同体积的标准质粒溶液的C的对数值；基于不同浓度同体积的标准质粒溶液的CT值和C的对数值，建立CT与C的对数值的标准曲线。3.根据权利要求2所述的免疫佐剂质量差异的检测方法，其特征在于，所述基于目的免疫佐剂的质量控制片段建立标准质粒，并获得1μg/mL标准质粒中含有的质量控制片段的拷贝数C，即获得1μg/mL标准质粒的C的对数值，包括：根据目的免疫佐剂的免疫活性基序，选取包含免疫活性基序的基因片段作为质量控制片段；根据质量控制片段建立标准质粒，并获得1μg/mL标准质粒的中含有的质量控制片段的拷贝数C，即获得1μg/mL标准质粒的C的对数值。4.根据权利要求1
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3任一项所述的免疫佐剂质量差异的检测方法，其特征在于，所述将不同生产批次目的免疫佐剂的qPCR反应的CT值代入标准曲线，获得不同生产批次目的免疫佐剂的C的对数值，包括：以不同生产批次目的免疫佐剂为qPCR反应的扩增模板，以引物对组成反应体系，进行qPCR扩增，扩增结束后测量，获得不同生产批次目的免疫佐剂的CT值，其中，以不同生产批次目的免疫佐剂为qPCR反应的扩增模板时保证不同生产批次目的免疫佐剂的加入质量相等；分别将不同生产批次的目的免疫佐剂的CT值代入标准曲...

【专利技术属性】
技术研发人员：黄岳，江秋虹，梁发芹，张素勤，朱克骏，赵爱华，王国治，陶立峰，
申请(专利权)人：重庆智飞生物制品股份有限公司北京智飞绿竹生物制药有限公司，
类型：发明
国别省市：