萤火虫萤光素酶突变体、蛋白质、核酸、重组载体、重组菌、试剂组合物及制备方法技术

本申请涉及生物技术领域，具体公开了萤火虫萤光素酶突变体、蛋白质、核酸、重组载体、重组菌、试剂组合物及制备方法。本申请通过对萤火虫萤光素酶基因进行了随机突变，并进行发光强度及半衰期的筛选，最终成功筛选得到一种高活性、高稳定性的萤火虫萤光素酶突变体，进一步优化了通过ATP检测手段检测活细胞的方法和试剂盒。试剂盒。试剂盒。

【技术实现步骤摘要】
萤火虫萤光素酶突变体、蛋白质、核酸、重组载体、重组菌、试剂组合物及制备方法


[0001]本申请涉及生物
，更具体地说，它涉及一种萤火虫萤光素酶突变体、蛋白质、核酸、重组载体、重组菌、试剂组合物及制备方法。

技术介绍

[0002]萤火虫萤光素酶是一种能够在三磷酸腺苷（ATP）、二价金属离子如镁离子和氧气存在的情况下催化萤火虫萤光素底物并使其产生生物发光的蛋白酶。因其独特的生物发光特征以及非放射性优势，广泛应用于原核和真核细胞，转基因植物和动物，以及无细胞检测系统。
[0003]ATP是生物体内最直接的能量来源，检测和量化细胞内ATP水平是评估细胞健康状况的首选方法。萤光素酶
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萤光素检测系统广泛应用于药物研发领域及环境中微生物污染ATP检测。随着生物技术的飞速发展以及高通量药物筛选技术的成熟，需要更高效的细胞活力分析系统。

技术实现思路

[0004]为了提高活性、稳定性、精确性，本申请提供了萤火虫萤光素酶突变体、蛋白质、核酸、重组载体、重组菌、试剂组合物及制备方法。
[0005]第一方面，本本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种萤火虫萤光素酶突变体，其特征在于：SEQ ID NO: 1所示氨基酸序列的萤火虫萤光素酶第193位和/或第367位氨基酸进行了突变，第193位由丝氨酸Ser S突变为异亮氨酸Ile I 或第367位由亮氨酸Leu L突变为异亮氨酸Ile I，氨基酸序列分别如SEQ ID NO: 2或SEQ ID NO: 3所示。2.一种蛋白质，其特征在于：为如下（a1）
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（a3）中任一种：（a1）在以下位点或位点组合发生突变的酶，所述位点为权利要求1中SEQ ID NO: 1所示氨基酸序列的第193位和第367位；（a2）将（a1）酶的氨基酸序列经过第193位和/或第367位氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加氨基酸残基而形成的，且具有（a1）酶的功能/活性的由（a1）衍生的酶；（a3）将（a1）或（a2）突变的氨基酸序列的N端或/和C端连接标签序列或酶切位点序列形成的多肽及融合蛋白质。3.一种核酸分子，其特征在于：包括如下（b1）或（b2）中的核酸分子：（b1）核苷酸序列是编码权利要求2蛋白质所示DNA分子；（b2）与（b1）所述的核苷酸序列具有至少95％的同一性且编码...

【专利技术属性】
技术研发人员：赵振，柴忠心，陆潭，赵权，
申请(专利权)人：南京中澳转化医学研究院有限公司，
类型：发明
国别省市：