一种P450酶突变体、编码基因及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一种P450酶突变体、编码基因及其在制备皮质醇中的应用，属于生物工程技术领域。所述P450酶突变体是氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示的智人来源CYP11B1通过氨基酸突变所得，氨基酸突变的位点为S146V、H331D、L440F中的至少一个。本发明专利技术提供的P450酶突变体相对野生型CYP11B1在大肠杆菌中具有更高的可溶性表达水平，构建的重组表达菌株的催化水平更高，可以以11

【技术实现步骤摘要】
一种P450酶突变体、编码基因及其应用


[0001]本专利技术涉及生物工程
，具体涉及一种针对智人来源CYP11B1改造的P450酶突变体、编码基因及其在制备皮质醇中的应用。

技术介绍

[0002]皮质醇(Cortisol)是从肾上腺皮质中提取出的对糖类代谢具有最强作用的肾上腺皮质激素，属于糖皮质激素的一种，在应激生理适应、能量动员和免疫反应的调节中起着至关重要的作用。除用作抗炎药物和免疫抑制剂，皮质醇也被用作合成其他糖皮质激素的中间体，如泼尼松、泼尼松龙等。
[0003]皮质醇是通过肾上腺皮质线粒体中的11β
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羟化酶的作用，由11
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脱氧皮质醇生成。皮质醇的全化学合成涉及约40个步骤且收率低(Woodward R,Sondheimer F,Taub D,et al.The total synthesis of steroids[J].Journal of the American Chemical Society,1952,74(17):4223
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4251.)。在目前的工本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种P450酶突变体，其特征在于，所述P450酶突变体是氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示的智人来源CYP11B1通过氨基酸突变所得的突变体，其中，所述氨基酸突变的位点为第146位、第331位、第440位中的至少一个，且第146位的丝氨酸突变为缬氨酸，第331位的组氨酸突变为天冬氨酸，第440的亮氨酸突变为苯丙氨酸。2.如权利要求1所述的P450酶突变体，其特征在于，所述P450酶突变体的氨基酸序列如SEQ ID NO.2～SEQ ID NO.8中任一所示。3.一种用于编码如权利要求1或2所述的P450酶突变体的编码基因。4.一种重组表达载体，其特征在于，所述重组表达载体包括如权利要求3所述的编码基因。5.如权利要求4所述的重组表达载体，其特征在于，所述重组表达载体还包括皮质铁氧还蛋白还原酶编码基因与皮质铁氧还蛋白编码基因，所述皮质铁氧还蛋白还原酶编码基因的上游插入有核苷酸序列如SEQ ID NO.14所示的RBS序列，所述皮质铁氧还蛋白编码基因的上游插入有核苷酸序列如SEQ ID NO.15所示的RBS序列。6.一种用于生产如权利要求1或2所述的P450酶突变体的基因工程菌，其特征在于，所述基因工程菌包含如权利要求4或5所述的重组表达载体。7.如权利要求6所述的基因工程菌，其特征在于，所述基因工程菌还包含表达分子伴侣GroEL/ES的pGro7质粒。8.如权利要求1或...

【专利技术属性】
技术研发人员：于洪巍，叶丽丹，张岩峰，
申请(专利权)人：浙江大学，
类型：发明
国别省市：