富含姜黄素的体外培育牛黄及其生产方法技术

本发明专利技术涉及富含姜黄素的体外培育牛黄及其生产方法，包括以下步骤：搅拌条件下，向新鲜动物胆汁中加入四氢姜黄素、姜黄素、蛋白酶和肝细胞提取物，经过消化反应得到反应液A；向反应液A中加入氢氧化钙，加热反应后出现沉淀物，冷却静置，除去上清液，得到胆黄沉淀液；胆黄沉淀液包括猪胆黄沉淀液和牛胆黄沉淀液；将猪胆黄沉淀液依次进行第一酸化、过滤、干燥和粉碎，得到胶连粉；向牛胆黄沉淀液中加入胆红素和胶连粉，混合均匀后进行第二酸化，搅拌反应至出现团状凝块，分离团状凝块并干燥，得到富含姜黄素的体外培育牛黄。本发明专利技术所得牛黄的性状、胆酸含量以及胆红素含量符合《中国药典》的相关标准，制备方法简单。制备方法简单。

【技术实现步骤摘要】
富含姜黄素的体外培育牛黄及其生产方法


[0001]本专利技术涉及体外培育牛黄领域，具体涉及富含姜黄素的体外培育牛黄及其生产方法。

技术介绍

[0002]牛黄是一种名贵的中药材，在已有的数千种中成药配伍中，约有600多种需要用到牛黄，其中不乏像“安宫牛黄丸”之类极其名贵的中成药，这导致牛黄成为珍贵的稀缺中药材之一，目前，天然牛黄的市场价格已经高达75万元/公斤，仍供不应求。
[0003]为了缓解这种局面，国内早已有人开展了牛黄体外生产方法方面的研究，主要包括体外发酵法生产体外培育牛黄的方法，以及以胆红素和胆酸为主要成分的人工配制牛黄的方法，综合这些方法，主要存在以下缺陷：1、人工配制牛黄可能会缺乏来自胆汁的未知成分，配制出的人工牛黄无法全面发挥天然牛黄的药理作用，2、生产过程需要反复多次大剂量添加化学还原剂(亚硫酸氢钠或者硼氢化钠)，这些残留于牛黄产品中会产生一定危害，也影响了技术的应用。3、体外发酵法生产牛黄体外培养时间过长，通常需要发酵两到三天，且培养过程中很容易出现有害杂菌滋生的现象，这将极大降低产品生产的成功率，且对生产人员身体健康产生影响。

技术实现思路

[0004]本专利技术的目的在于克服上述技术不足，提供一种富含姜黄素的体外培育牛黄及其生产方法，解决现有技术中体外生产牛黄需要反复多次大剂量添加化学还原剂或发酵时间过长易产生有害杂菌的技术问题。
[0005]为达到上述技术目的，本专利技术提供的技术方案是：
[0006]第一方面，本专利技术提供一种富含姜黄素的体外培育牛黄的生产方法，包括以下步骤：搅拌条件下，向新鲜动物胆汁中加入四氢姜黄素、姜黄素、蛋白酶和肝细胞提取物，经过消化反应得到反应液A；向反应液A中加入氢氧化钙，加热反应后出现沉淀物，冷却静置，除去上清液，得到胆黄沉淀液；胆黄沉淀液包括猪胆黄沉淀液和牛胆黄沉淀液；将猪胆黄沉淀液依次进行第一酸化、过滤、干燥和粉碎，得到胶连粉；向牛胆黄沉淀液中加入胆红素和胶连粉，其中牛胆黄沉淀液、胆红素和胶连粉的比例为100mL：(2～3)g：(1～2)g；混合均匀后进行第二酸化，搅拌反应至出现团状凝块，分离团状凝块并干燥，得到富含姜黄素的体外培育牛黄。
[0007]第二方面，本专利技术提供一种上述生产方法制得的富含姜黄素的体外培育牛黄。
[0008]与现有技术相比，本专利技术的有益效果包括：
[0009]本专利技术通过制备胶连粉，再在牛胆黄沉淀液中加入胆红素和胶连粉，制得所需的体外培育牛黄，所得牛黄的性状、胆酸含量以及胆红素含量符合《中国药典》的相关标准；本专利技术制备方法简单，避免了发酵法需要长时间发酵以及易产生有害杂菌的缺点；培育过程中加入四氢姜黄素和姜黄素，在加工过程以及以后的应用过程中较好的保护牛黄的主效成
分胆红素，同时与胆红素配合使药理功能加成，具有良好长效的清热降温作用、抗免疫应激和抗氧化应激作用。
具体实施方式
[0010]为了使本专利技术的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合实施例，对本专利技术进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本专利技术，并不用于限定本专利技术。
[0011]第一方面，本专利技术提供一种富含姜黄素的体外培育牛黄的生产方法，包括如下步骤：
[0012]1)牛黄成石胶连粉的制备：
[0013]①
猪胆汁提取胆黄：
[0014]A试剂称取与准备：按各原料重量(g)：胆汁总体积(mL)计，称取0.01～1％的蛋白酶、0.005～0.05％的四氢姜黄素、0.01～0.08％的姜黄素和0.2～0.6％的氢氧化钙。
[0015]其中，胆汁密度接近于1，因此胆汁总重量和总体积相等；为了避免赘述，后文以百分比表示各原料相对胆汁的添加量，以蛋白酶为例，即100mL胆汁加入0.01～1g的蛋白酶。
[0016]优选地，蛋白酶用量为胆汁总体积的0.05～0.5％，最优选为0.1％，在保证消化反应快速进行的同时节约成本。
[0017]优选地，蛋白酶采用碱性蛋白酶、胰蛋白酶或菠萝蛋白酶。
[0018]在一些具体实施例中，蛋白酶采用胰蛋白酶时，需要加入胆汁总体积0.001％～0.05％的EDTA(乙二胺四乙酸)，优选为0.01％～0.03％；EDTA与胆汁中的钙等金属离子络合，避免影响胰蛋白酶的活性。
[0019]在一些具体实施例中，胰蛋白酶活性单位为1：250。
[0020]在一些具体实施例中，由于蛋白酶的添加量较少，如果放大到工业生产中，直接添加难以混合均匀，可以将蛋白酶与EDTA按上述用量，添加50倍～100倍重量的水配成浓缩液，再将浓缩液加入到胆汁中，利于混合均匀。
[0021]优选地，四氢姜黄素用量为胆汁总体积的0.01～0.03％；姜黄素用量为胆汁总体积的0.02～0.04％；进一步优选地，四氢姜黄素用量为胆汁总体积的0.02％；姜黄素用量为胆汁总体积的0.03％。
[0022]优选地，氢氧化钙用量为胆汁总体积的0.2～0.5％；进一步优选为0.3％。
[0023]B肝细胞提取物的制备：取新鲜的动物肝脏，在匀浆机上打碎匀浆，用纱布过滤，滤液反复彻底冻融3次以上，最后一次冻融解冻后，向冻融物中加入生理盐水混合均匀，以4000转/分钟的转速离心10分钟，收集上清液，此即为肝细胞提取物。
[0024]优选地，动物肝脏包括猪或牛的肝脏；进一步优选为新生牛的肝脏或胎牛的肝脏。
[0025]优选地，加入的生理盐水体积是冻融物的体积的2～5倍，进一步优选为2～4倍。
[0026]C猪胆汁蛋白消化与添加姜黄素等原料：将装有猪胆汁的反应容器放入水浴中，搅拌条件下依次加入四氢姜黄素、姜黄素和蛋白酶；再加入肝细胞提取物，进行消化反应2小时以上。
[0027]优选地，肝细胞提取物用量是胆汁总质量的2％～3％。
[0028]优选地，水浴温度和消化反应温度均为30～40℃，进一步优选为35～37℃；消化反
应时间优选为1～5h，进一步优选为2
‑
3小时。
[0029]D猪胆黄生成与提取：搅拌条件下向上述反应体系中加入称量好的氢氧化钙，将反应体系加热至90℃以上，维持20分钟以上。此时反应体系中出现黄色沉淀物，停止搅拌，从水浴中取出反应容器，静置24小时以上，虹吸去上清，留下下层黄色部分(尽量除清黄色部分上面的液体)，下层黄色部分即为猪胆黄沉淀液。
[0030]优选地，加热反应温度在90～100℃，反应时间在10～30min。
[0031]②
猪胆黄酸化
[0032]在快速搅拌中向上述制取的猪胆黄沉淀液中逐滴加入盐酸溶液，直至其PH下降到2以下(优选pH值为1～2)，此时，猪胆黄沉淀液中出现极其粘稠的凝块；同时析出清亮液体。
[0033]③
氯仿抽提：倒掉清亮液体，向剩下的粘稠物加入原胆汁体积5～15％的氯仿，用2根玻璃棒不停撕扯凝块，使其尽可能充分接触氯仿；
[0034]过滤：3分钟后用纱布(或不被氯仿本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种富含姜黄素的体外培育牛黄的生产方法，其特征在于，包括以下步骤：搅拌条件下，向新鲜动物胆汁中加入四氢姜黄素、姜黄素、蛋白酶和肝细胞提取物，经过消化反应得到反应液A；向反应液A中加入氢氧化钙，加热反应后出现沉淀物，冷却静置，除去上清液，得到胆黄沉淀液；所述胆黄沉淀液包括猪胆黄沉淀液和牛胆黄沉淀液；将所述猪胆黄沉淀液依次进行第一酸化、过滤、干燥和粉碎，得到胶连粉；向所述牛胆黄沉淀液中加入胆红素和胶连粉，其中牛胆黄沉淀液、胆红素和胶连粉的比例为100mL：(2～4)g：(1～5)g；混合均匀后进行第二酸化，搅拌反应至出现团状凝块，分离团状凝块并干燥，得到富含姜黄素的体外培育牛黄。2.根据权利要求1所述的富含姜黄素的体外培育牛黄的生产方法，其特征在于，肝细胞提取物的制备步骤具体包括：取动物新鲜肝脏进行匀浆、过滤、反复冻融，在最后一次冻融解冻后，经过离心分离获取上清液，得到肝细胞提取物。3.根据权利要求1所述的富含姜黄素的体外培育牛黄的生产方法，其特征在于，蛋白酶采用碱性蛋白酶、胰蛋白酶或菠萝蛋白酶；且蛋白酶采用胰蛋白酶时，需同时加入乙二胺四乙酸，且新鲜动物胆汁与乙二胺四乙酸的比例为100mL：(0.001～0.05)g。4.根据权利要求1所述...

【专利技术属性】
技术研发人员：黄贤孙，高其双，
申请(专利权)人：百草堂湖北制药有限公司，
类型：发明
国别省市：