一种角膜中期保存液，其是以１０００ｍｌ的保存液中含有：ＤＭＥＭ培养基０．５－１．５ｇ，羟丙基甲基纤维素１－１０ｇ，２－巯基乙醇０．１－１０ｍｌ，右旋糖苷（分子量４００００）１０－２０ｇ，非必需氨基酸１－３ｍｌ，Ｈｅｐｅｓ缓冲液１０－３２ｍｍｏｌ，地塞米松０．０１－０．０５ｍｍｏｌ，庆大霉素５０－７０ｍｇ；该保存液的ｐＨ值为７．２－８．０，渗透压为３５０－４００ｍｍｏｌ／ＬＨ↓［２］Ｏ。本发明专利技术不仅具有好的角膜保存质量，同时还具有优良的性价比的优点，是一种广泛适用于国内外眼库使用的角膜中期保存液。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种角膜中期保存液。
技术介绍
现有角膜的活性保存方法，根据保存时间的不同，可分为短期保存、中期保存和长期保存。短期保存是将全眼球消毒杀茵处理后，在湿房4°C 条件下保存，此方法的优点是方法简便，有效可行，尤其适合于基层医院 开展角膜移植。缺点是保存时间较短， 一般都在48小时内有效，有时因不 能及时找到患者，材料已过期而弃用。长期保存是将角膜片经特殊处理后 在-196°C的液氮中冷冻保存。冷冻保存的最大优点是为临床随时提供优质 活性角膜，但是这种方法需特殊设备，技术难度高。中期保存一般采用角 膜片组织保存液4。C保存，这一方法不仅可以提供较高质量的角膜，而且 使角膜移植手术在时间安排方面得以改善。目前，最常用的几种角膜中期 保存液是K-S0K, CSM， Dexsol和Optisol。这些保存液基本功能相似，但 组成的成份及浓度不同。它们存在一个共同的问题是它们都进口产品， 其价格昂贵。近年来，为了向社会提供物美价廉的角膜中期保护液，我国 学者在这方面作了不少研究，如中国专利文献CN1162389、 CN1262866和 CN16 31138所公开的角膜保存液均较好地解决了这个问题。
技术实现思路
本专利技术的目的是克服上述问题，向社会提供一种新的物美价廉的角膜 中期保护液。本专利技术的技术方案是提供一种角膜中期保存液，其是以1000ml的保 存液中含有DMEM培养基O. 5-1. 5g,羟丙基甲基纤维素1-10g, 2-巯基乙醇0. l-10ml，右旋糖苷(分子量40000 )10-20g，非必需氨基酸l-3ml ， Hepes緩冲液10-32mmol，地塞米松0. 01-0. 05mmol,庆大霉素50-70mg;该保存液的pH值为7. 2-8. 0,渗透压为350—400mmol/LH20。所述庆大霉素50-70mg可用50-70mg链霉素代替。所述庆大霉素50-70mg可用20-40mg链霉素和庆大霉素20-40mg代替。本专利技术由DMEM培养基，羟丙基曱基纤维素，2-巯基乙醇，右旋糖苷，非必需氨基酸等成份加蒸镏水配制而成。它不同于其它角膜中期保存液，其中羟丙基曱基纤维素可以保护角膜不受外力的伤害，而且羟丙基曱基纤维素本身是一种惰性物质，可以降低细胞代谢速度，对细胞无毒害作用，可以提高胶体渗透压；2-巯基乙醇对细胞生长有很重要的作用，它相当于胎牛血清，有直接刺激细胞的增殖作用，2-巯基乙醇的活性部分能使保存液中氧化的谷胱甘肽成为还原型谷胱甘肽，从而诱导细胞增殖。本专利技术由于采用了价格比较低廉的羟丙基曱基纤维素和2-巯基乙醇，使得本专利技术不仅具有好的角膜保存质量，同时还具有优良的性价比的优点，是一种广泛适用于国内外眼库使用的角膜中期保存液。 附图说明图1是本专利技术角膜中期保存液保存5d的人角膜内皮细胞台盼蓝-萏 素红染色 xl00。图2是Optisol-GS液保存5d的人角膜内皮细胞台盼蓝-萏素红染 色 xioo。图3是本专利技术角膜中期保存液保存8d的人角膜内皮细胞台盼蓝-茜 素红染色 xl00。图4是0ptiso1-GS液保存8d的人角膜内皮细胞台盼蓝-茜素红染色 x 100。图5是本专利技术角膜中期保存液保存14d的人角膜内皮细胞台盼蓝-茜素红染色 xioo。图6是Optisol-GS液保存14d的人角膜内皮细胞台盼蓝-茜素红染 色 xioo。图7是本专利技术角膜中期保存液保存8d的人角膜组织切片。图8是本专利技术角膜中期保存液保存14d的人角膜组织切片。图9-图IO是本专利技术角膜中期保存液保存10 d的人角膜内皮细胞中央及周边扫描电镜^见察 x 1000。图11 -图12是Optisol-GS液保存10 d的人角膜内皮细胞中央及周边扫描电镇7见察 xi000。图13是本专利技术角膜中期保存液保存14 d的人角膜内皮细胞扫描电镜观察 x 1000。图14是Optisol-GS液保存14 d的人角膜内皮细胞扫描电镜观察 x 1000。图15是本专利技术角膜中期保存液保存14 d的人角膜内皮细胞透射电镜 观察 x 5200。图16是Optisol-GS液保存14 d的人角膜内皮细胞透射电镜观察x 5200。具体实施例方式本专利技术中所采用的DMEM培养基(液体)是由美国GIBCO公司生产的， 其含有1000mg/L葡萄糖，584mg/L-谷氨酰胺，110mg/L丙酮酸，3700mg/L碳 酸氢钠，pH值为L 2-7. 4,它是一种非常适合于许多哺乳动物细胞培养的 培养基。显然，上述DMEM培养基也可以用具有相同或相近组份的DMEM培 养基干粉，通过计算其组份的重量后，直接用干粉DMEM培养基代替液体的 DMEM培养基。本专利技术中的羟丙基曱基纤维素(Hydroxypropyi methyleeilulose， HPMC)是由美国D0W公司生产的。本专利技术中的2-巯基乙醇、右旋糖苷和HEPES緩冲液均由美国Sigma公 司生产。本专利技术中的非必需氨基酸是由美国HyClone公司生产的非必需氨基酸 溶液(10mM, IOO倍)，其含有七种非必需氨基酸，每种各10mM(可溶于MEM培养基)。2-8。C保存。庆大霉素、链霉素，地塞米松、氢化可的松均为国产。 表1为本专利技术角膜中期保存液的配方<table>table see original document page 6</column></row><table>分别将表l中的各角膜中期保存液及0pUsol-GS液，各用8只人角膜， 分别用5天、8天和14天进行保存试验，在深圳市眼科医院进行穿透性角 膜移植，结果发现本专利技术的1-12实施例中的在保存8天以内的各项技术指 示与Optisol-GS液相当，完全可以取代进口的Optisol-GS液。在保存第14天时，其中的第4、 5、 6和12号实施例的数据还略好于0ptisol-GS液。 经试验，将表1中的庆大霉素或链霉素50-7Omg用20-40mg链霉素和 庆大霉素20-40mg代替，可以起到同样的抗菌效果。将表1中的第6号角膜中期保存液保存的一只人角膜与Optisol-GS液 保存的一只人角膜进行切片比较的结果如下。1、保存角膜内皮细胞活性率见表2。经统计学处理，在两种保存液中保 存不同时间内皮细胞活性率比较，差异无显著性(P>0.05)(见图1-6)。表2两种保存液中保存不同时间人角膜内皮细胞活性率比较<table>table see original document page 7</column></row><table>2、角膜厚度测量结果见表3。在本专利技术角膜中期保存液中保存14d的植片平均角膜中央厚度 为649. 2 um，在Optisol-GS液中保存14d的植片平均角膜中央厚度为 655. 1卩m。两组比较差异无显著性(p>0. 05 )。表3两种保存液中保存不同时间人角膜厚度变化(um， 3f士s )<table>table see original document page 7</column></row><table>3、组织学观察:保存5本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种角膜中期保存液，其特征在于：其是１０００ｍｌ的保存液中含有：ＤＭＥＭ培养基０．５－１．５ｇ，羟丙基甲基纤维素１－１０ｇ，２－巯基乙醇０．１－１０ｍｌ，右旋糖苷（分子量４００００）１０－２０ｇ，非必需氨基酸１－３ｍｌ，Ｈｅｐｅｓ缓冲液１０－３２ｍｍｏｌ，地塞米松０．０１－０．０５ｍｍｏｌ，庆大霉素５０－７０ｍｇ；该保存液的ｐＨ值为７．２－８．０，渗透压为３５０－４００ｍｍｏｌ／ＬＨ↓［２］Ｏ。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：姚晓明，吴亮，林宝涛，肖爱明，周艳丽，谢柏林，袁凤波，于莉，阿衣努尔吐尔地，
申请(专利权)人：姚晓明，
类型：发明
国别省市：94[中国|深圳]
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