一种mRNA多价流感疫苗及其制备方法技术

本发明专利技术提供一种mRNA多价流感疫苗及其制备方法，所述疫苗包括重组蛋白H1N1的mRNA、重组蛋白H3N2的mRNA、重组蛋白H5N1的mRNA、重组蛋白H6N1的mRNA、重组蛋白H7N9的mRNA、重组蛋白H9N2的mRNA、重组蛋白H11N2的mRNA、重组蛋白B

【技术实现步骤摘要】
一种mRNA多价流感疫苗及其制备方法


[0001]本专利技术涉及一种mRNA多价流感疫苗及其制备方法，属于医用配制品


技术介绍

[0002]流感是由正粘病毒科的RNA病毒引起的传染病，可以感染鸟类和哺乳动物。流感通常通过咳嗽或打喷嚏产生的气溶胶以及直接接触含有病毒的体液或被污染的表面传播。甲型流感病毒和B型流感病毒容易引起季节性流行。
[0003]目前的流感病毒疫苗主要诱导针对血凝素（病毒的主要表面糖蛋白）的免疫显性和可变头部结构域的免疫应答，但对抗原漂移或转移病毒的保护能力有限，需要开发有效的、具有广泛保护作用的疫苗。研究发现血凝素茎结构域含有中和的B细胞表位，这些表位在甲型流感病毒亚型之间都是保守的，因此它可以引发免疫细胞应答来防御外来流感攻击。
[0004]近年来，随着免疫学技术的不断深入和基因工程技术的迅速发展，DNA重组疫苗、合成肽疫苗、mRNA疫苗等新型疫苗不断涌现。其中mRNA疫苗作为一种核酸疫苗，能够表达任何蛋白质，可以从基因水平上治疗几乎所有基于蛋白质的疾病。相较于其他传统疫苗和DNA疫苗技术，mRNA疫苗的合成不仅生产工艺简单，且价格低廉。同时这种人为设计的核酸并不会诱发人体的免疫反应，不进入细胞核，无整合到基因组的风险，相对更安全。
[0005]目前市面上的流感疫苗主要为三价流感疫苗或四价流感疫苗，为减毒活疫苗或灭活疫苗，通过在胚胎鸡蛋中繁殖病毒生产，其生产时间长，由于流行病毒的抗原快速进化，其疗效有限；抗原可变性介导病毒逃离宿主免疫反应，需要每年更新疫苗。r/>[0006]现有技术中还未有mRNA的流感疫苗被报道。

技术实现思路

[0007]针对现有技术存在的不足，本专利技术提供一种mRNA多价流感疫苗及其制备方法，实现以下专利技术目的：能够广泛地对多种流感毒株产生交叉反应，可以治疗和预防流感病毒，且免疫和治疗效果好。
[0008]为解决上述技术问题，本专利技术采取以下技术方案：一种mRNA多价流感疫苗，所述疫苗包括重组蛋白H1N1的mRNA、重组蛋白H3N2的mRNA、重组蛋白H5N1的mRNA、重组蛋白H6N1的mRNA、重组蛋白H7N9的mRNA、重组蛋白H9N2的mRNA、重组蛋白H11N2的mRNA、重组蛋白B
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Victoria的mRNA、重组蛋白B
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Yamagata的mRNA；所述疫苗中各mRNA的质量浓度均为100μg/mL；所述mRNA由脂质纳米粒包封；所述重组蛋白H1N1的核苷酸序列如序列表SEQ ID NO.3所示；所述重组蛋白H3N2的核苷酸序列如序列表中SEQ ID NO.4所示；所述重组蛋白H5N1的核苷酸序列如序列表SEQ ID NO.5所示；所述重组蛋白H6N1的核苷酸序列如序列表SEQ ID NO.6所示；所述重组蛋白H7N9的核苷酸序列如序列表SEQ ID NO.7所示；所述重组蛋白H9N2的核苷酸序列如序列表SEQ ID NO.8所示；所述重组蛋白H11N2的核苷酸序列如序列表SEQ ID NO.9所示；所述重组蛋白B
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Victoria的核
苷酸序列如序列表SEQ ID NO.10所示；所述重组蛋白B
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Yamagata的核苷酸序列如序列表SEQ ID NO.11所示。
[0009]所述mRNA多价流感疫苗的制备方法，将各重组蛋白的核苷酸序列分别连接到载体上，得到重组载体，然后将重组载体进行线性化酶切，回收目的DNA片段，经体外转录得到各重组蛋白的mRNA，经脂质纳米粒包装后，混合得到mRNA多价流感疫苗。
[0010]与现有技术相比，本专利技术取得以下有益效果：（1）本专利技术对抗原序列进行了优化，制备的mRNA多价流感疫苗能够刺激机体产生较强的免疫原性，和序列优化前制备的mRNA多价流感疫苗相比，抗体滴度明显提高，攻毒实验后小鼠的存活率明显提高，小鼠肺脏病毒滴度明显降低。
[0011]（2）本专利技术制备的mRNA多价流感疫苗对小鼠具有显著的交叉保护作用，可同时抵抗多种流感毒株的侵染。
附图说明
[0012]图1为本专利技术重组蛋白结构的设计图；图2为实施例3体外转录得到的mRNA的电泳图；图3为不同抗原包板检测mRNA多价流感疫苗免疫小鼠血清抗体效价的柱状图；图4为感染A/Beijing/262/1995(H1N1)流感病毒后各组小鼠生存曲线和体重变化图；其中图4A为感染A/Beijing/262/1995（H1N1）流感病毒后各组小鼠生存曲线图；图4B为感染A/Beijing/262/1995（H1N1）流感病毒后各组小鼠体重变化图；图5为感染A/Perth/16/2009（H3N2）流感病毒后各组小鼠生存曲线和体重变化图；其中图5A为感染A/Perth/16/2009（H3N2）流感病毒后各组小鼠生存曲线图；图5B为感染A/Perth/16/2009（H3N2）流感病毒后各组小鼠体重变化图；图6为感染A/Anhui/1/2005（H5N1）流感病毒后各组小鼠生存曲线和体重变化图；其中图6 A为感染A/Anhui/1/2005（H5N1）流感病毒后各组小鼠生存曲线图；图6B为感染A/Anhui/1/2005（H5N1）流感病毒后各组小鼠体重变化图；图7为感染A/quail/Hong Kong/1721
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30/99（H6N1）流感病毒后各组小鼠生存曲线和体重变化图；其中图7 A为感染A/quail/Hong Kong/1721
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30/99（H6N1）流感病毒后各组小鼠生存曲线图；图7B为感染A/quail/Hong Kong/1721
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30/99（H6N1）流感病毒后各组小鼠体重变化图；图8为感染A/Anhui/01/2013（H7N9）流感病毒后各组小鼠生存曲线和体重变化图；其中图8 A为感染A/Anhui/01/2013（H7N9）流感病毒后各组小鼠生存曲线图；图8B为感染A/Anhui/01/2013（H7N9）流感病毒后各组小鼠体重变化图；图9为感染A/Hong Kong/1073/1999（H9N2）流感病毒后各组小鼠生存曲线和体重变化图；图9 A为感染A/Hong Kong/1073/1999（H9N2）流感病毒后各组小鼠生存曲线图；图9B为感染A/Hong Kong/1073/1999（H9N2）流感病毒后各组小鼠体重变化图；图10为感染A/duck/Yangzhou/906/2002（H11N2）流感病毒后各组小鼠生存曲线和
体重变化图；其中图10 A为感染A/duck/Yangzhou/906/2002（H11N2）流感病毒后各组小鼠生存曲线图；图10B为感染A/duck/Yangzhou/906/2002（H11N2）流感病毒后各组小鼠体重变化图；图11为感染B/Florida/78/2015（B/Victoria）流感病毒后各组小鼠生存曲线和体重变化图；其中图11 A为感染B/Florida/78/2015（B/Victoria）流感病毒后各本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种mRNA多价流感疫苗，其特征在于：所述疫苗包括重组蛋白H1N1的mRNA、重组蛋白H3N2的mRNA、重组蛋白H5N1的mRNA、重组蛋白H6N1的mRNA、重组蛋白H7N9的mRNA、重组蛋白H9N2的mRNA、重组蛋白H11N2的mRNA、重组蛋白B
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Victoria的mRNA、重组蛋白B
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Yamagata的mRNA；所述疫苗中各mRNA的质量浓度均为100μg/mL；所述mRNA由脂质纳米粒包封；所述重组蛋白H1N1的核苷酸序列如序列表SEQ ID NO.3所示；所述重组蛋白H3N2的核苷酸序列如序列表中SEQ ID NO.4所示；所述重组蛋白H5N1的核苷酸序列如序列表SEQ ID NO.5所示；所述重组蛋白H6N1的核苷酸序列如序列表S...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘明录，韩庆梅，强邦明，王立新，许淼，金海锋，张传鹏，冯建海，
申请(专利权)人：山东兴瑞生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：