一种活性肥水剂的生产方法及在贝藻体系中的应用技术

本发明专利技术属于生物技术领域，具体涉及一种活性肥水剂的生产方法及在贝藻体系中的应用。步骤为:本发明专利技术以血粉搭配羽毛粉、玉米蛋白粉作为发酵原料，再以藻类生长为指标，筛选有机碳源中的乙酸作为主要碳源，并将产乙酸较高的布氏乳杆菌、弯曲乳杆菌、植物乳杆菌、双歧杆菌和产朊假丝酵母菌、枯草芽孢杆菌作为发酵菌种，再将一种酸性条件下具有高活性的角蛋白酶基因kerQ7克隆到食品级粟酒裂殖酵母中，菌酶协同进行好氧及厌氧发酵，所得的肥水剂中乙酸、小肽、氨基酸、矿物质螯合率含量高，能够显著促进牟氏角毛藻和血蚶的生长，并能改善养殖池水质，取得了显著的技术效果。取得了显著的技术效果。取得了显著的技术效果。

【技术实现步骤摘要】
一种活性肥水剂的生产方法及在贝藻体系中的应用


[0001]本专利技术属于生物
，具体涉及一种活性肥水剂的生产方法及在贝藻体系中的应用。

技术介绍

[0002]近年来由于微藻的光自养成本高昂、阴雨天和冬天等弱光条件下微藻缺乏碳源导致产量低下，进而血蚶等贝类缺乏牟氏角毛藻等天然活饵料，难以实现高密度培养。研究发现，当牟氏角毛藻在一些羧酸类做有机碳源的进行兼养培养时，能极大提高生物产量和比生长速率，减少细菌的滋生。并且这些有机酸还可以维持水池的酸碱度，减少氨氮过高带来的氨毒害。但将有机酸作为碳源应用于牟氏角毛藻培育的研究极少。
[0003]矿物质在一定浓度下也能极大提高微藻的生物量，协同有机碳源共同刺激微藻的新陈代谢。矿物质主要分为三种形态，以硫酸铁、硫酸铜为代表的无机盐矿物质，以乳酸亚铁、柠檬酸铁为代表的有机酸矿物质络合物，以甘氨酸亚铁、酪蛋白肽
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锌螯合物为代表的氨基酸、肽类矿物质螯合物。矿物质螯合物的生物活性大于前两者，并且鳌合剂和矿物元素结合，能够防止矿物质在植物培养过程中进行沉淀，并减少矿物质对细胞生长代谢产本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种活性肥水剂的生产方法，其特征在于，制备步骤如下：(1)将血粉、羽毛粉、玉米蛋白粉、次粉和麸皮混合，搅拌均匀，制成固体培养基；(2)选择乳酸菌、酵母菌、芽孢菌接种到相应的培养基进行活化培养并得到相应的乳酸菌、酵母菌、芽孢菌发酵种子液；所述的乳酸菌为布氏乳杆菌、弯曲乳杆菌、植物乳杆菌、双歧杆菌，酵母菌为产朊假丝酵母菌，芽孢菌为枯草芽孢杆菌；(3)将来源于Bacillus tequilensis strain Q7的角蛋白酶基因序列根据粟酒裂殖酵母菌密码子偏好性进行优化，得到编码角蛋白酶的基因，核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示；以该基因为模板进行PCR扩增，于穿梭质粒载体pREP连接后转化到大肠杆菌感受态细胞中，抽提获得重组穿梭质粒后，利用醋酸锂转化法导入到缺陷型粟酒裂殖酵母感受态细胞中，得到重组角蛋白酶酵母工程菌，即S.pombe
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pREP
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kerQ7；培养所述的重组角蛋白酶酵母工程菌收集菌液，所述菌液中包含重组酵母工程菌胞外分泌的角蛋白酶；将菌液通过离心固液分离后收集上清液，即为粗酶液；(4)将步骤(2)的乳酸菌、酵母菌、芽孢菌发酵种子液和步骤(3)的S.pombe
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pREP
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kerQ7培养后的菌液或粗酶液接种到步骤(1)的固体培养基中，然后再加入矿物质、亚硫酸钠、水搅拌均匀，发酵结束后获得活性肥水剂；其中矿物质为硫酸亚铁、硫酸铜、硫酸锰、硫酸锌和碳酸钙。2.根据权利要求1所述的一种活性肥水剂的生产方法，其特征在于，步骤(1)所述的用量为血粉3
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10％、羽毛粉3
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10％、玉米蛋白粉3
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10％、次粉35
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45％，麸皮35
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45％。3.根据权利要求1所述的一种活性肥水剂的生产方法，其特征在于，步骤(3)所述培养重组角蛋白酶酵母工程菌温度为30
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37℃，转速为180
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220rpm，时间为24～48h；所述离心的条件为5000
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8000rpm，5
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10min。4.根据权利要求1所述的一种活性肥水剂的生产方法，其特征在于，步骤(4)所述...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈华友，李柯仪，夏雨桐，王振，陈华撑，
申请(专利权)人：陈华友，
类型：发明
国别省市：