一种CD52+巨噬细胞作为骨关节炎治疗靶点的应用制造技术

本发明专利技术公开了CD52+巨噬细胞作为治疗靶点在筛选或制备治疗骨关节炎的药物中的应用。本发明专利技术通过单细胞转录组测序显示，在骨关节炎情况下，炎症性CD52+巨噬细胞数量显著增加，并且特异性高表达CD52，在体内水平，通过关节腔注射CD52特异性抗体可以减轻OA滑膜组织的炎症并有效延缓OA的进程，证实CD52+巨噬细胞可以作为骨关节炎的治疗靶点。因此，CD52+巨噬细胞能够作为骨关节炎的一个潜在的有前途的治疗靶点，靶向CD52+巨噬细胞的药物对骨关节炎的治疗具有积极的作用。本发明专利技术有助于推动相关靶向巨噬细胞药物的制备，提高相关抗炎药物的疗效，并为新药物研发提供线索。并为新药物研发提供线索。并为新药物研发提供线索。

【技术实现步骤摘要】
一种CD52+巨噬细胞作为骨关节炎治疗靶点的应用


[0001]本专利技术涉及生物医药领域，尤其涉及一种CD52+巨噬细胞作为骨关节炎治疗靶点的应用。

技术介绍

[0002]膝骨关节炎（Osteoarthritis，OA）是导致下肢功能障碍的主要骨科疾病之一，不仅严重影响患者的生活质量，也极大地增加医疗成本，给家庭和社会带来沉重的经济负担。随着我国老龄化社会的到来，OA的发病人数呈增加趋势，然而目前仍然没有针对OA的特效药物，当病情进展到晚期时，只能接受手术治疗。患者一般在出现膝关节周围不适，包括关节周围红、肿、热、痛，才前往门诊就诊，而上述症状是OA滑膜组织炎症的典型表现，滑膜组织中炎性物质的释放使局部的血管扩张，皮温升高，释放痛性物质造成局部疼痛、发红，并且滑膜液的释放大于吸收，导致关节的肿胀。
[0003]滑膜主要由内膜（衬里）和内膜下（衬里下）层组成。衬里层包含巨噬细胞和滑膜成纤维细胞；衬里下层由几层滑膜细胞组成，覆盖在疏松的结缔组织上，富含成纤维细胞、胶原蛋白和其他细胞外基质蛋白。滑膜的一个主要功能是分泌滑液至关节间隙，润滑关节促进关节运动；但是在病理情况下，如滑膜炎，滑膜分泌的促炎因子及软骨基质降解相关的金属基质蛋白酶（MMPs）同样会随滑液运动到关节内各个组成部分，包括关节软骨。滑膜炎与OA的进展密切相关，从机制上分析，关节软骨的降解产物释放到关节腔后可被巨噬细胞摄取成为激活状态，分泌促炎因子，包括IL
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1β，TNFα，IL
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6 以及软骨细胞外基质降解相关的蛋白酶MMPs（MMP1/3/9/13），ADAMTS4/5，破坏关节软骨，促使更多的关节软骨降解产物释放到关节腔中，进一步刺激巨噬细胞，形成恶性循环。因此，靶向OA早期滑膜巨噬细胞，是延缓OA进展的有效途径。

技术实现思路

[0004]本专利技术的目的是提出一种CD52+巨噬细胞作为骨关节炎治疗靶点的应用，以解决现有技术中的早中期膝骨关节炎缺乏特异性抗炎药物的问题。
[0005]本专利技术的目的将通过以下技术方案得以实现：本专利技术一方面提供了CD52+巨噬细胞作为治疗靶点在筛选或制备治疗骨关节炎的药物中的应用。
[0006]本专利技术另一方面提供了CD52+巨噬细胞的抑制剂在制备治疗骨关节炎的药物中的应用。
[0007]进一步的，所述CD52+巨噬细胞的抑制剂为沉默或敲除所述CD52+巨噬细胞的试剂。
[0008]进一步的，所述CD52+巨噬细胞的抑制剂为抗体anti
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CD52，siCD52#1或siCD52#2中的任意一种。
[0009]进一步的，所述药物包括其药学上可接受的载体。
[0010]本专利技术的突出效果为：本专利技术通过单细胞转录组测序显示，在骨关节炎情况下，炎症性CD52+巨噬细胞数量显著增加，并且特异性高表达CD52（CD52为细胞表面蛋白，主要表达于免疫细胞表面，如淋巴细胞，T细胞，B细胞以及单核细胞，与机体的免疫反应、炎症反应、骨科疾病等相关），在体内水平，通过关节腔注射CD52特异性抗体可以减轻OA滑膜组织的炎症并有效延缓OA的进程，证实CD52+巨噬细胞可以作为骨关节炎的治疗靶点。因此，CD52+巨噬细胞能够作为骨关节炎的一个潜在的有前途的治疗靶点，靶向CD52+巨噬细胞的药物对骨关节炎的治疗具有积极的作用。本专利技术有助于推动相关靶向巨噬细胞药物的制备，提高相关抗炎药物的疗效，并为新药物研发提供线索。
[0011]以下便结合实施例，对本专利技术的具体实施方式作进一步的详述，以使本专利技术技术方案更易于理解、掌握。
附图说明
[0012]图1A为本专利技术实施例1中小鼠正常及OA滑膜组织单细胞测序的合并分析UMAP图；图1B为本专利技术实施例1中各群巨噬细胞的标志基因表达的UMAP图；图1C为本专利技术实施例1中正常及OA组细胞的重叠分析UMAP图；图1D为本专利技术实施例1中测序结构分开分析UMAP图；图1E为本专利技术实施例1中CD52在各群细胞中表达的UMAP图；图1F为本专利技术实施例1中CD52在各群细胞中表达的violin plot图；图2为本专利技术实施例1中CD52在对照及OA小鼠滑膜组织中的免疫荧光染色图；图3为本专利技术实施例1中CD52在正常及OA患者滑膜组织中的免疫荧光染色图；图4为本专利技术实施例1中流式分析图；图5为本专利技术实施例2中CD52+巨噬细胞表达炎症相关基因的UMAP分析图；图6为本专利技术实施例2中CD52+巨噬细胞相关的生物活性GO分析点图；图7为本专利技术实施例2中流式分析图；图8本专利技术实施例2中iNOS与CD52免疫荧光共染图；图9本专利技术实施例3中CD52的表达结果图；图10本专利技术实施例3中Il1的表达结果图；图11本专利技术实施例3中Il6的表达结果图；图12本专利技术实施例3中Il8的表达结果图；图13本专利技术实施例3中iNOS免疫荧光图；图14为本专利技术实施例3中膝关节HE染色，Synovitis score分值越高，滑膜组织炎症越严重；图15为本专利技术实施例3中软骨组织番红O/快绿染色，Mankin score分值越高，软骨损伤越严重。
实施方式
[0013]为使本专利技术的目的、技术方案及效果更加清楚、明确，以下参照实施例对本专利技术作进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅用以解释本专利技术，并不用于限本专利技术。
[0014]本专利技术上下文中所使用的试剂，均通过市售获得。本专利技术所使用的实验方法均为本领域的常规方法和技术。本专利技术所有动物实验及相关工作都得到了暨南大学实验动物伦理委员会的批准。
[0015]实施例1：单细胞转录组测序显示，OA滑膜组织中CD52+巨噬细胞数量大量增加通过内侧半月板失稳手术（Destabilization of the Medial Meniscus，DMM）手术构建小鼠创伤性骨关节炎模型。选取3个月大的雄性C57BL/6小鼠，在其右膝进行DMM手术，isoflurane麻醉小鼠，称重，皮下注射5 mg/kg 的Meloxicam，剃除右膝关节附近的毛发，对右膝关节进行消毒。在手术台上铺一条无菌垫，将小鼠固定在无菌垫上，充分暴露右膝关节，固定好右膝关节，在手术时避免晃动。找到髌韧带上方区域，髌韧带为一白色结构，可透过小鼠皮肤观察到，约在膝关节正上方，使用无菌剪刀在髌韧带上方打开一条约5 mm长切口，钝性分离皮肤与皮下组织，用眼科剪沿着髌韧带内侧缘打开膝关节，钝性分离髌下脂肪组织，如出血，可用棉签压迫止血。找到内侧半月板横韧带，利用显微外科专用剪刀完全剪断内侧半月板横韧带，可观察到游离的半月板断端。用7
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0的缝合线缝合关节囊，缝一针即可，利用4
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0的缝合线缝合皮肤，消毒手术切口，待小鼠苏醒后将小鼠送回动物中心，并进行术后观察。
[0016]收集正常以及DMM术后小鼠整个膝关节，保留股四头肌，将股四头肌从股骨近端翻起直至完全暴露膝关节腔，用无菌的镊子取下滑膜组织并放入无菌PBS 中清洗，之后用0.25%含EDTA 的胰酶(Invitrogen) 消本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1. CD52+巨噬细胞作为治疗靶点在筛选或制备治疗骨关节炎的药物中的应用。2. CD52+巨噬细胞的抑制剂在制备治疗骨关节炎的药物中的应用。3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于：所述CD52+巨噬细胞的抑制剂为沉默或敲除所述CD52+巨噬细胞的试剂。4.根...

【专利技术属性】
技术研发人员：桂涛，彭睿，魏玉龙，余波，
申请(专利权)人：暨南大学附属第一医院广州华侨医院，
类型：发明
国别省市：