一株罗伊氏乳杆菌及其微生态制剂的制备和应用制造技术

本发明专利技术公开了一株罗伊氏乳杆菌及其微生态制剂的制备和应用。所述罗伊氏乳杆菌(Lactobacillus reuteri)，株名SAMMRS

【技术实现步骤摘要】
一株罗伊氏乳杆菌及其微生态制剂的制备和应用


[0001]本专利技术属于应用微生物
，尤其涉及一株罗伊氏乳杆菌及其微生态制剂的制备和应用。

技术介绍

[0002]我国是世界第一大水产养殖国，养殖产量约占世界水产养殖总产量的70％。但随着我国水产养殖规模的逐步扩大及集约化程度的不断提高，养殖过程饵料残留、排泄物累积等造成水产养殖水质不断恶化，水产养殖行业病害加剧，水产动物的主要病原体包括细菌、病毒和寄生虫等，其中，细菌性疾病引起的水产动物疾病损失占58％，是导致水产养殖经济损失的最严重因素。水产养殖中细菌性疾病常见病原菌主要有气单胞菌属、弧菌属、希瓦氏菌等，常常造成水产养殖动物相关病害的大规模暴发，给蓬勃发展的水产养殖业带来巨大损失，极大地限制了我国水产养殖健康可持续发展。
[0003]为有效防治鱼虾易患疾病、促进机体快速增长，养殖户普遍存在滥用抗生素的现象，诱导了大量抗性菌株及抗性基因的产生，对食品安全和公众健康构成极大威胁。针对抗生素抗性问题，目前主要有免疫防治、中草药养殖和微生态养殖三种应对策略。相比于另外两种，所述微生态养殖的适用性更强，微生态制剂黏附和定殖在动物肠道内补充乳酸菌等肠道优势菌群，通过生物夺氧和自身代谢产生的有机酸及细菌素等生物活性成分，可有效抑制病原菌的生理活性，有利于提高机体对疾病的防御能力，增强肠道微生态系统的抵抗力和稳定性。但目前商品化的乳酸菌细菌素仅限于pediocin PA
‑
1和Nisin等少数几种，原因在于许多乳酸菌细菌素pH范围窄、热不稳定、抑菌谱窄或产量相对较低，而抗菌类的乳酸菌在水产养殖中应用来抗菌防病的更少，如专利技术专利CN 113604387 A，仅因其具有耐盐性，就提到其可用于水产养殖防治病原菌中，但其来源于猪粪，而且也没有系统的水产病原菌的抑菌性能及相关试验，故无法得知其是否真正适用于水产养殖病原菌的防治。
[0004]由此可见，目前用于水产养殖的乳酸菌，大多并不是源于水宿主动物，其用于水产养殖中的益生作用并不稳定，而罗伊氏乳杆菌在水产中的应用更是少之又少，因此，分离筛选具有高效广谱抑水产病原菌能力的罗伊氏乳杆菌并将其应用于水产养殖中，同时进一步优化菌株高密度培养方法，提高有效活菌数，规范其在水产领域的使用方法，对于水产养殖业逐步实现少抗到无抗养殖具有重要实际意义。

技术实现思路

[0005]为了克服现有技术中存在的问题，本专利技术提供了一株罗伊氏乳杆菌及其菌剂的制备和应用。本专利技术从水产动物源，特别是鱼、虾肠道中筛选得到的罗伊氏乳杆菌，该菌株对水产致病菌有广谱拮抗作用，能够抑制弧菌、腐败菌、单胞菌、大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、沙门氏菌等。本专利技术提供的罗伊式乳杆菌制剂在水产养殖疾病防治中的应用，抑菌效率高、见效快、无副作用，能够替代抗生素用于水产养殖业。
[0006]本专利技术提供了一株罗伊氏乳杆菌，该菌株的分类学命名为：罗伊氏乳杆菌
(Lactobacillus reuteri)，株名SAMMRS
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1G；该菌株的16S RNA序列已提交GenBank数据库，登录号为OM149729，并于2022年9月29日保藏至中国典型培养物保藏中心，保藏地址：湖北省武汉市武昌区八一路珞珈山武汉大学，保藏编号为CCTCC NO:M 20221519。
[0007]本专利技术还提供了所述罗伊氏乳杆菌SAMMRS
‑
1G在动物养殖中防治病原菌的应用。
[0008]本专利技术还提供了所述罗伊氏乳杆菌SAMMRS
‑
1G在水产养殖中防治病原菌的应用。
[0009]一些实施例中，所述病原菌为大肠杆菌、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、单胞菌、腐败菌或弧菌。
[0010]具体地，所述单胞菌为嗜水气单胞或假交替单胞菌；所述腐败菌为腐败希瓦氏菌；所述弧菌为哈维弧菌、溶藻弧菌、副溶血弧菌、霍乱弧菌或创伤弧菌。
[0011]本专利技术还提供了一种微生态制剂，含有所述的罗伊氏乳杆菌SAMMRS
‑
1G或其发酵液为活性成分。
[0012]本专利技术还提供了一种罗伊式乳杆菌SAMMRS
‑
1G微生态制剂的制备方法，包括步骤如下：
[0013]S1、菌种活化：罗伊式乳杆菌SAMMRS
‑
1G菌种接种于MRS斜面培养基上培养，严格进行无菌操作，32～39℃下培养18～30h；
[0014]S2、一级种子培养：取步骤S1的罗伊式乳杆菌SAMMRS
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1G斜面，接种于一级种子液体培养基中，于32～39℃，静置培养12～18h，得一级种子液；
[0015]S3、二级种子培养：将步骤S2所得的一级种子液按3～5％体积比接入二级种子培养基，于32～39℃，静置培养8～12h，得二级种子液；
[0016]S4、液体发酵培养：按照发酵罐体积60～80％配制发酵培养基，通入蒸汽，物料121℃灭菌处理；冷却至32～39℃将步骤S3所得二级种子液按1～3％体积比接入发酵培养基，于32～39℃，pH4.0～5.5的条件下，氮气保压0.05Mpa，转速100r/min，厌氧发酵6～14h，得罗伊式乳杆菌SAMMRS
‑
1G微生态制剂。
[0017]上述所得罗伊式乳杆菌SAMMRS
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1G微生态制剂的有效活菌数可达1.0～1.5
×
10
10
CFU/mL。
[0018]本专利技术的有益效果为：
[0019]1、本专利技术提供的罗伊式乳杆菌SAMMRS
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1G，来源于水产动物，通过筛选证实其具有良好的抑制水产病原菌生长能力，并且耐酸耐胆盐性能和粘附性能好，具有良好的益生菌性能。
[0020]2、目前关于罗伊式乳杆菌在水产养殖上的研究甚少，本专利技术提供的罗伊式乳杆菌SAMMRS
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1G具有抑制水产致病菌、提高生长性能和饲料利用率、调节肠道菌群并恢复肠道屏障、改善养殖生态环境和水产品的感官品质、延长货架期的功效。具体体现在：
[0021](1)抑制能力强，抑菌活性不受温度影响，不会被宿主动物体内蛋白酶、脂肪酶和淀粉酶破坏，具有更强的稳定性；
[0022](2)对宿主的黏膜黏液以及肠黏膜上皮细胞均表现较强的黏附能力，产生的短链脂肪酸能够促进杯状细胞数量和黏蛋白1、2表达的增加，快速恢复肠道屏障从而调节肠道菌群、恢复肠道屏障；
[0023](3)代谢的益生元和各种酶类物质可以提高肠道绒毛高度，促进宿主对营养物质的消化和吸收，提高生长性能和饲料利用率；
[0024](4)可有效降低养殖水质中亚硝酸盐、氨氮、硫化氢等浓度，抑制水体中有害微生物繁殖和生长，净化水质，改善养殖生态环境；
[0025](5)能有效控制腐败菌和有机胺类产生，有效减少储存期间产品中的假单胞菌属以及产硫化氢的细菌，改善水产品的感官品质、延长货架期。
[0026]3、本专利技术提供的罗伊式乳杆菌SAMMRS...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.罗伊氏乳杆菌(Lactobacillus reuteri)SAMMRS
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1G，其保藏编号为CCTCC NO:M 20221519。2.权利要求1所述的罗伊氏乳杆菌SAMMRS
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1G在动物养殖中防治病原菌的应用。3.权利要求1所述的罗伊氏乳杆菌SAMMRS
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1G在水产养殖中防治病原菌的应用。4.根据权利要求2或3所述的应用，其特征在于，所述病原菌为大肠杆菌、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、单胞菌、腐败菌或弧菌。5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，所述单胞菌为嗜水气单胞或假交替单胞菌；所述腐败菌为腐败希瓦氏菌；所述弧菌为哈维弧菌、溶藻弧菌、副溶血弧菌、霍乱弧菌或创伤弧菌。6.一种微生态制剂，其特征在于，含有权利要求1所述的罗伊氏乳杆菌SAMMRS
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1G或其发酵液为活性成分。7.一种罗伊式乳杆菌SAMMRS
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1G微生态制剂的制备方法，其特征在于，包括步骤如下：S1、菌种活化：罗伊式乳杆菌SAMMRS
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1G菌种接种于MRS斜面培养基上培养，严格进行无菌操作，32～39℃下培养18～30h；S2、一级种子培养：取步骤S1的罗伊式乳杆菌SAMMRS
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1G斜面，接种于一级种子液体培养基中，于32～39℃，静置培养12～18h，得一级种子液；S3、二级种子培养：将步骤S2所得的一级种子液按3～5％体积比接入二级种子培养基，于32～39℃，静置培养8～12h，得二级种子液；S4、液体发酵培养：按照发酵罐体积60～80％配制发酵培养基，通入蒸汽，物料121℃灭菌处理；冷却至32～39℃将步骤S3所得二级种子液按1～3％体积比接入发酵培养基，于32～39℃，pH4.0～5.5的条件下，氮气保压0.05Mpa，转速10...

【专利技术属性】
技术研发人员：江国托，顾艳丽，王效禹，曹艳子，刘艳，林洋，单春乔，秦淑杰，
申请(专利权)人：江苏三仪生物工程有限公司，
类型：发明
国别省市：