一种诱导黄花风铃木离体下胚轴获得再生完整植株的方法技术

本发明专利技术公开了一种诱导黄花风铃木离体下胚轴获得再生完整植株的方法。包括以下步骤：(1)无菌材料的获取：采集成熟开裂干燥的果荚，剪去种翅，消毒清洗后、接种于MS培养基培养得到组培苗；(2)下胚轴再生培养：选取组培苗下胚轴，置于下胚轴再生培养基诱导产生再生芽；(4)再生芽继代培养：将再生芽置于继代培养基中培养，继代培养得到再生植株；(5)再生苗生根培养：将再生植株接种于生根培养基进行生根培养；(6)生根苗移栽。本发明专利技术通过大量实验去摸索和明确再生参数，建立了黄花风铃木高效再生体系及获取移栽的成活植株，且移栽成活率高，不仅黄花风铃木优质资源保存、扩繁及其遗传转化研究奠定了基础，而且利于该再生体系的应用和推广。推广。推广。

【技术实现步骤摘要】
一种诱导黄花风铃木离体下胚轴获得再生完整植株的方法


[0001]本专利技术属于植物培育
，具体涉及一种诱导黄花风铃木离体下胚轴获得再生完整植株的方法。

技术介绍

[0002]建立黄花风铃木离体下胚轴离体高效再生体系是开展黄花风铃木种质资源保护和基因工程研究的有效途径，也是进行快速繁殖的有效途径。国内黄花风铃再生研究起步晚，目前黄花风铃木再生体系仍未见报道。随着黄花风铃木全基因组测序的完成，黄花风铃木育种也必将进入分子育种时代，黄花风铃木遗传转化体系的构建显得尤为重要，而高效的再生体系是遗传转化体系构建的前提。
[0003]通过下胚轴再生得到的再生苗的移栽成活率是影响下胚轴再生体系应用和推广的关键因素。目前研究多集中在黄花风铃木的快速繁殖上，对黄花风铃木的再生体系建立有待进一步研究。

技术实现思路

[0004]针对现有技术中的问题，本专利技术的目的在于提供一种诱导黄花风铃木离体下胚轴获得再生完整植株的方法，以获得该品种材料的资源保存。
[0005]为了实现上述目的，本专利技术的技术方案具体如下：
[0006]一种诱导黄花风铃木离体下胚轴获得再生完整植株的方法，包括以下步骤：
[0007](1)无菌材料的获取：采集成熟开裂干燥的果荚，剪去种翅，消毒清洗后、接种于MS培养基培养得到组培苗；
[0008](2)下胚轴再生培养：选取组培苗下胚轴，置于下胚轴再生培养基诱导产生再生芽，；
[0009](4)再生芽继代培养：将再生芽置于继代培养基中培养，继代培养得到再生植株；
[0010](5)再生苗生根培养：将再生植株接种于生根培养基进行生根培养；
[0011](6)生根苗移栽。
[0012]所述的下胚轴再生培养基中含有IBA、6
‑
BA、TDZ、蔗糖、植物凝胶。
[0013]所述的生根培养基中含有IBA、NAA、蔗糖、琼脂。
[0014]所述的下胚轴再生培养基是MS+IBA0.5 mg/L、TDZ 0.2mg/L、6
‑
BA5mg/L+20g/L蔗糖+2.5g/L植物凝胶；
[0015]所述的继代培养基是MS+蔗糖(30g/L)+琼脂粉(6.0g/L)；
[0016]所述的生根培养基是MS+IBA 3mg/L+NAA 0.01mg/L+蔗糖20g/L+琼脂6g/L；
[0017]优选地，步骤(1)所述无菌材料的获取的方式为：先暗培养3～7d再光照培养；总的培养的时间为20～30d。需要说明的是，虽然无菌材料的获取、组培苗继代培养、再生芽继代培养都用到MS培养基，但并不要求MS培养基中所含的蔗糖的量完全一致。
[0018]优选地，所述的下胚轴再生培养的条件是光照12h、黑暗12h的光周期下培养。
[0019]优选地，所述的继代培养的条件是在光照16h、黑暗8h的光周期下培养。
[0020]优选地，所述的生根培养的条件是光照12h、黑暗12h。
[0021]优选地，所述的生根苗移栽是取生根苗，放置生长室炼苗7d后，洗净根部琼脂和愈伤组织，移栽装入营养土的育苗盆，培养基质为普通营养土：珍珠岩＝3：1v/v，土粒不成团、不滴水、较松散为宜，最终获得无性繁殖优质种苗。
[0022]优选地，所述黄花风铃木为Handroanthus chrysanthus(Jacq.)S.O.Grose。
[0023]本专利技术的有益效果为：本专利技术通过大量实验去摸索和明确再生参数，建立了黄花风铃木高效再生体系及获取移栽的成活植株，且移栽成活率高，不仅黄花风铃木优质资源保存、扩繁及其遗传转化研究奠定了基础，而且利于该再生体系的应用和推广。
附图说明
[0024]图1为实施例1中黄花风铃木再生体系建立流程图，其中A为组培苗生长状态图，再生所需的下胚轴状态(优选圈中下胚轴)，B为下胚轴产生的再生芽，C为再生芽80d生长状况，D为生根苗30d生长情况，E为生根苗移栽5d后生长状况；
[0025]图2为不同再生培养基诱导产生的再生芽图，依次对应实施例1、实施例2、实施例3和对比例4；
[0026]图3为不同生根培养基下再生苗生长状况；
[0027]图4为不同生根培养基移栽前植株生长状况图。
具体实施方式
[0028]下面将结合本专利技术中的实施例，对本专利技术的技术方案进行清楚、完整地描述。应当理解的是，此处所描述的具体实施方式仅用于说明和解释本专利技术，并不用于限制本专利技术。
[0029]本专利技术实施例所用的MS培养基基盐、蔗糖、琼脂粉、植物凝胶购自于鼎国生物公司(广州)，6
‑
BA购自于鼎国生物公司(广州)、IBA、NAA购自于Genview公司、TDZ购自于Sigma公司，NaOH、HCl购自于大茂化学试剂厂，活性炭A.C.购自于福晨化学公司。
[0030]实施例1
[0031]本实施例中黄花风铃木Handroanthus chrysanthus(Jacq.)S.O.Grose离体下胚轴再生过程如图1所示，具体参数如下：
[0032](1)外植体无菌材料的获取
[0033]2022年4月，采集自华南农业大学附属幼儿园停车场，实验室内剪去种翅，用1升加有3泵洗洁精的自来水浸泡15min，之后流水冲洗30min。将其置于超净工作台中，用体积分数75％的酒精浸泡50s，无菌水冲洗种子3次，质量分数0.1％氯化汞浸泡消毒10min，无菌水冲洗3次。接种于备用的MS培养基上，暗培养7d后光照培养20d，及时清理被污染植株，观察其生长状况，最终获取无菌离体植株即组培苗。
[0034](2)下胚轴再生
[0035]选取步骤(1)选取生长健壮20～30d组培苗的下胚轴(图1A)，以5mm左右为一个外植体，每种处理接种6瓶，每瓶接种5个外植体，瓶中含有下胚轴再生培养基。培养条件为光照培养，光照强度为2500lx，周期为光照12h、黑暗12h，诱导再生芽(图1B)，培养至80d，获得再生芽(图1C)。
[0036]所述的下胚轴再生培养基为：MS+IBA0.5 mg/L、TDZ 0.2mg/L、6
‑
BA5mg/L+20g/L蔗糖+2.5g/L植物凝胶Phytagel，其配制方法是将IBA0.5 mg、TDZ 0.2mg、6
‑
BA5mg、蔗糖20g和植物凝胶2.5g加入1L液体MS培养基中，灭菌备用。
[0037](3)再生芽的继代培养
[0038]将步骤(2)获得的再生芽连同底部外植体及愈伤组织统一移入继代培养基中继代1次，其中继代培养基的组成为：MS+蔗糖(30g/L)+琼脂粉(6.0g/L)，其配制方法是将蔗糖30g和琼脂粉6g加入1L液体MS培养基中，用1M NaOH溶液调至pH5.8～6.0，121℃，灭菌20min，在光照16h、黑暗8h的光周期下培养。
[0039](4)再生苗生根培养
[0040]去除步骤(3)获本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种诱导黄花风铃木离体下胚轴获得再生完整植株的方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)无菌材料的获取：采集成熟开裂干燥的果荚，剪去种翅，消毒清洗后、接种于MS培养基培养得到组培苗；(2)下胚轴再生培养：选取组培苗下胚轴，置于下胚轴再生培养基诱导产生再生芽，；(4)再生芽继代培养：将再生芽置于继代培养基中培养，继代培养得到再生植株；(5)再生苗生根培养：将再生植株接种于生根培养基进行生根培养；(6)生根苗移栽。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的下胚轴再生培养基中含有IBA、6
‑
BA、TDZ、蔗糖、植物凝胶。3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的生根培养基中含有IBA、NAA、蔗糖、琼脂。4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的下胚轴再生培养基是MS+IBA 0.5mg/L、TDZ 0.2mg/L、6
‑
BA5 mg/L+20g/L蔗糖+2.5g/L植物凝胶...

【专利技术属性】
技术研发人员：彭昌操，方惠婷，张俊杰，赵小兰，
申请(专利权)人：华南农业大学中山创新中心，
类型：发明
国别省市：