AF9在AML诊治中的应用制造技术

本发明专利技术属于生物医药和分子生物学技术领域，具体涉及AF9在AML诊治中的应用。本发明专利技术通过研究发现，在AML患者中AF9和白血病发生和不良预后有关，同时在体内和体外AF9会发生液胶相变。同时证明AF9(3A)突变体失去了识别乙酰化蛋白的能力，也不能形成胶样颗粒，从而无法促进AML细胞的增殖和耐药。最后，AF9和TRiC复合体是正确折叠所必需的，对AF9的液胶相变和AML的促进有重要作用。AF9(59

【技术实现步骤摘要】
AF9在AML诊治中的应用


[0001]本专利技术属于生物医药和分子生物学
，具体涉及AF9在AML诊治中的应用。

技术介绍

[0002]本专利技术
技术介绍
中公开的信息仅仅旨在增加对本专利技术的总体背景的理解，而不必然被视为承认或以任何形式暗示该信息构成已经成为本领域一般技术人员所公知的现有技术。
[0003]急性髓系白血病(AML)是一种快速进展的造血干细胞恶性疾病，以祖细胞分化停滞为特征在成年人中最常见。在过去几十年，尽管有经典的处理方式，作为一种灾难性的诊断，AML存活率几乎没有进步，仍然有历史性的高致死率。应用传统的化疗方案，60岁以下患者5年总生存率有40％，而60岁以上患者甚至不到15％。虽然针对细胞凋亡、DNA修复、线粒体功能、FLT3抑制剂和IDH抑制剂的治疗方法已经在进行临床实验，但是治疗效果仍然未知。所以，当务之急是要探索AML进展的潜在机制从而研究新的治疗靶点。
[0004]众所周知，AF9作为MLL
‑
AF9融合基因可以在老鼠和人体内引发髓系白血病。然而，研究者只发现C端AHD结构域在MLL
‑
AF9白血病中有重要作用，正向调节转录延长在基因融合后停止，但是YEATS结构域无人关注。专利技术人发现，AF9在AML中调节基因表达的病理生理和基础的分子的作用仍旧知之甚少。

技术实现思路

[0005]针对现有技术中的不足，本专利技术的目的在于提供AF9在AML诊治中的应用。本专利技术通过研究发现，AF9通过液
‑/>胶相变促进AML的增殖和耐药。乙酰化功能缺失突变体AF9(3A)只能发生液液相变，也失去了促进AML的能力。被TCP
‑
1环状复合体(TRiC复合体)正确折叠对AF9形成胶样凝聚物是很重要的，但是错误折叠的AF9(3A)只能发生液液相变。最后，制造了一个AF9(59
‑
78)肽通过阻止AF9与TRiC结合来干扰其折叠从而将液胶相变逆转为液液相变，从而抑制AML。基于上述研究成果，从而完成本专利技术。
[0006]具体的，本专利技术的技术方案如下：
[0007]本专利技术的第一个方面，提供检测AF9编码基因及其表达产物的物质在制备用于急性髓系白血病诊断、检测、监测或预后评估的产品中的应用。
[0008]本专利技术通过研究发现，AF9与AML的发病和不良预后有关，具体的，AML患者的AF9表达比健康对照高，表明AF9和白血病发病有关，同时高表达的AML患者的总生存明显缩短，病情更重，且更加耐药。因此，所述预后评估至少包括对AML患者的总生存期、耐药性以及病情严重程度的评估。
[0009]本专利技术的第二个方面，提供抑制AF9编码基因及其表达产物和/或使其活性降低的物质在如下任意一种或多种中的应用：
[0010]a)抑制AF9发生液胶相变或制备抑制AF9发生液胶相变的产品；
[0011]b)促进AF9发生液液相变或制备促进AF9发生液液相变的产品；
[0012]c)抑制AML细胞增殖或制备抑制AML细胞增殖的产品；
[0013]d)抑制AML耐药或制备抑制AML耐药的产品；
[0014]e)制备治疗AML的产品。
[0015]本专利技术的第三个方面，提供一种治疗急性髓系白血病的方法，所述方法包括向受试者施用上述AF9(59
‑
78)肽或对应药物。
[0016]上述一个或多个技术方案的有益技术效果：
[0017]上述技术方案发现，在AML患者中AF9和白血病发生和不良预后有关，同时在体内和体外AF9会发生液胶相变。同时上述技术方案证明AF9(3A)突变体失去了识别乙酰化蛋白的能力，也不能形成胶样颗粒，从而无法促进AML细胞的增殖和耐药。最后，上述技术方案证明AF9和TRiC复合体是正确折叠所必需的，对AF9的液胶相变和AML的促进有重要作用。AF9(59
‑
78)肽通过阻止和TRiC结合干扰AF9折叠，将AF9液胶相变逆转成液液相变，从而抑制AML。
[0018]总之，上述结果证明AF9通过胶样相变来促进AML增殖和耐药，AF9(59
‑
78)肽是AML一个很有潜力的治疗工具，因此具有良好的实际应用之价值。
附图说明
[0019]构成本专利技术的一部分的说明书附图用来提供对本专利技术的进一步理解，本专利技术的示意性实施例及其说明用于解释本专利技术，并不构成对本专利技术的不当限定。
[0020]图1为本专利技术实施例中AF9表达和AML进展和预后有关；其中，(A)从PanglaoDB获得健康对照骨髓样本的CD34+细胞的单细胞测序来分析AF9的表达；(B)从TCGA数据库获得173例AML患者和70例健康对照的AF9表达；(C)基于从TCGA数据库获得106例AML患者的AF9表达的总生存分析；(D)20例AF9高表达和20例AF9低表达AML患者的缓解和难治复发比例；(E)AF9高表达和低表达患者来源的肿瘤移植小鼠阿霉素和阿糖胞苷治疗前后骨髓CD45+细胞比例，n＝4；(F)阿霉素和阿糖胞苷治疗后脾脏CD45+细胞比例。n＝4，*P<0.05,**P<0.01；##P<0.01,###P<0.001。
[0021]图2为本专利技术实施例中AF9在体内外促进AML细胞的增殖和耐药；其中，(A)EdU实验显示NC，shAF9
‑
1和shAF9
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2组OCI
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AML3和Kasumi
‑
1中阳性细胞比例(B)CCK8实验中，记录0,12,24,48和72小时的OD值并将数据根据0小时结果计算增殖(C)集落形成实验显示OCI
‑
AML3和Kasumi
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1的长期增殖，统计结果在(D)显示；(E)用流式对NC，shAF9
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1和shAF9
‑
2组OCI
‑
AML3和Kasumi
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1细胞IDA处理后的凋亡进行分析，统计结果在(F)显示；(G)NC，shAF9
‑
1和shAF9
‑
2组OCI
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AML3移植的小鼠在阿霉素和阿糖胞苷治疗前后的脾重，n＝5(H)用流式分析NSG小鼠的骨髓和脾脏中OCI
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AML3细胞的比例，n＝5，*P<0.05；**P<0.01；***P<0.001.##P<0.01,####P<0.0001。
[0022]图3为本专利技术实施例中AF9发生液胶相变；其中，(A
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B)对照的CD34
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,CD34+和AML细胞的免疫荧光图像和颗粒统计，比例尺,5μm；(C)用IUPred2A分析AF9的无序区；(D)在不同浓度聚合剂纯化的AF9显示浓度依赖的浑浊度增加；(E)在2本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.检测AF9编码基因及其表达产物的物质在制备用于急性髓系白血病诊断、检测、监测或预后评估的产品中的应用。2.如权利要求1所述应用，其特征在于，所述预后评估至少包括对AML患者的总生存期、耐药性以及病情严重程度的评估。3.如权利要求1所述应用，其特征在于，所述检测AF9编码基因及其表达产物的物质包含基于高通量测序方法和/或基于定量PCR方法和/或基于探针杂交方法检测样品中AF9的转录；或基于免疫检测方法检测样品中AF9蛋白表达情况的物质。4.如权利要求3所述应用，其特征在于，所述样品为受试者的骨髓样品。5.抑制AF9编码基因及其表达产物和/或使其活性降低的物质在如下任意一种或多种中的应用：a)抑制AF9发生液胶相变或制备抑制AF9发生液胶相变的产品；b)促进AF9发生液液相变或制备促进AF9发生液液相变的产品；c)抑制AML细胞增殖或制备抑制AML细胞增殖的产品；d)抑制AML耐药或制备抑制AML耐药的产品；e)制备治疗AML的产品。6.如权利要求5所述应用，其特征在于，所述抑制AF9编码基因及其表达产物和/或降低其活性...

【专利技术属性】
技术研发人员：孙涛，纪春岩，吴语嫣，
申请(专利权)人：山东大学齐鲁医院，
类型：发明
国别省市：