储存稳定的笼状半抗原制造技术

本文公开了笼状半抗原和笼状半抗原

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】储存稳定的笼状半抗原
[0001]相关申请的交叉引用
[0002]本申请要求于2021年1月15日提交的美国临时专利申请第63/137,805号的权益，其公开内容据此通过引用整体并入本文。


[0003]公开的实施例涉及检测样品中的靶标，该靶标包括邻近地位于样品中的靶标。公开的实施例还提供了用于使用笼状半抗原或笼状半抗原缀合物检测福尔马林固定的、石蜡包埋的组织中蛋白质二聚体的邻近测定。
[0004]工业适用性声明
[0005]本公开在化学和诊断学领域具有工业适用性。

技术介绍

[0006]免疫组织化学(IHC)是指使用对特定抗原具有特异性的抗体检测、定位和/或定量生物学样品中的抗原(例如蛋白质)的方法。IHC具有准确鉴定组织样品中特定蛋白质的位点的实质性优点。这也是一种检查组织本身的有效的方法。原位杂交(ISH)是指检测、定位和定量核酸的方法。IHC和ISH均可用于各种生物学样品，诸如组织(例如新鲜冷冻、福尔马林固定、石蜡包埋)和细胞学样品。无论靶标是核酸还是抗原，均可使用各种标记物(例如，发色、荧光、发光、放射标记)来检测靶标的识别。为了在临床环境中可靠地检测、定位和定量靶标，期望扩增识别事件，因为可靠地检测低丰度细胞标志物的能力对于诊断用途变得越来越重要。例如，响应于单个抗原检测事件，在标志物位点沉积数百个或数千个标记物分子，通过扩增增强了检测识别事件的能力。
[0007]蛋白质
‑
蛋白质相互作用的网络为生物系统的标志。蛋白质
‑
蛋白质相互作用形成信号通路，该信号通路调节正常细胞和癌细胞中细胞功能所有方面。已经开发出用于检测蛋白质
‑
蛋白质相互作用的方法，例如细胞外生长因子活化后瞬时受体酪氨酸激酶二聚化和复合物形成；然而，这些方法并非特定被设计用于福尔马林固定石蜡包埋(FFPE)组织。
[0008]询问已知是癌症生物学中重要决定簇的生物标志物的特定分子间相互作用的存在和分布的能力在新的诊断能力的背景下令人很感兴趣并且在药物开发的背景下用于确定治疗效果方面。探查和记录冷冻和石蜡包埋组织上的分子相互作用的分布的能力仍然无法获得；已经提出了解决该问题的替代性技术，尽管该解决方案在实际使用中尚未证明是有效和可靠的。
[0009]由Olink AB开发了邻位连接测定。这是唯一已知的用于原位检测在福尔马林固定石蜡包埋组织上的蛋白质
‑
蛋白质相互作用的商业产品。邻位连接测定技术使用DNA连接酶以生成锁式(padlock)环状DNA模板，以及用于滚环扩增的Phi29 DNA聚合酶。这些酶很昂贵。此外，这些酶不适用于自动化系统和方法。由于这些原因，邻位连接测定通常不被认为对商业应用有用。

技术实现思路

[0010]本公开的第一方面为一种具有式(IA)和(IB)中的任一者的笼状半抗原：
[0011]R2‑
R1‑
O
‑
[DIG]‑
[磷酰基]ꢀꢀꢀ
(IA)，
[0012]R2‑
R1‑
O
‑
[DIG]‑
PO4H2ꢀꢀ
(IB)，
[0013]其中
[0014]R1为键，或为包含支链或非支链、取代或未取代、饱和或不饱和的脂肪族基团的基团，该脂肪族基团具有介于1个与30个之间的碳原子，并且任选地包含选自由O、N或S组成的组的一个或多个杂原子；
[0015]R2为H或反应性官能团；
[0016][DIG]为地高辛；
[0017][磷酰基]由下式表示：
[0018][0019]Q1为O或S；并且
[0020]Q2为H、
‑
CH3或
‑
CH2CH3；
[0021]其中基团[磷酰基]或基团
‑
PO4H2可以连接至[DIG]的任何位置。
[0022]在一些实施例中，Q1为S。
[0023]在一些实施例中，Q1为O，并且至少一个Q2为H。在一些实施例中，R2选自胺反应性基团、硫醇反应性基团和羰基反应性基团。在一些实施例中，R2选自由以下项组成的组：二苯并环辛炔、反式环辛烯、炔烃、烯烃、叠氮化物、四嗪、马来酰亚胺、N
‑
羟基琥珀酰亚胺、硫醇、1，3
‑
硝酮、醛、酮、肼、羟胺和氨基基团。
[0024]在一些实施例中，两个Q2基团均为H。在一些实施例中，R2选自胺反应性基团、硫醇反应性基团和羰基反应性基团。在一些实施例中，R2选自由以下项组成的组：二苯并环辛炔、反式环辛烯、炔烃、烯烃、叠氮化物、四嗪、马来酰亚胺、N
‑
羟基琥珀酰亚胺、硫醇、1，3
‑
硝酮、醛、酮、肼、羟胺和氨基基团。在一些实施例中，R1具有式(IIIA)中所描绘的结构：
[0025][0026]其中
[0027]R8为键、
‑
O
‑
、
‑
S
‑
、
‑
C(R
c
)(R
d
)
‑
、
‑
或
‑
N(R
c
)
‑
；
[0028]R
a
和R
b
各自独立地为H、C1‑
C4烷基基团、F、Cl或
‑
N(R
c
)(R
d
)；
[0029]R
c
和R
d
各自独立地选自H或
‑
CH3；
[0030]R9和R
10
各自独立地为键或为选自羰基、酰胺、酰亚胺、酯、醚、胺、硫酮、硫醇的基团；
[0031]每个Z独立地为键、
‑
CH2‑
、
‑
CH2CH2‑
或
‑
CH2CH2CH2‑
；
[0032]t和u各自独立地为0、1或2，前提是t+u为至少1；并且
[0033]v为1至8范围内的整数。
[0034]在一些实施例中，R
a
或R
b
中的至少一者为H。在一些实施例中，R8为O。在一些实施例中，R8为键。在一些实施例中，R
a
或R
b
中的至少一者为H。在一些实施例中，R
a
和R
b
两者均为H。在一些实施例中，Z为键或
‑
CH2‑
。
[0035]在一些实施例中，R1具有式(IIIC)中所描绘的结构：
[0036][0037]其中
[0038]R
a
和R
b
各自独立地为H、C1‑
C4烷基基团、F、Cl或
‑
N(R
c
)本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种具有式(IA)和(IB)中的任一者的笼状半抗原：R2‑
R1‑
O
‑
[DIG]
‑
[磷酰基]
ꢀꢀꢀꢀ
(IA)，R2‑
R1‑
O
‑
[DIG]
‑
PO4H2ꢀꢀ
(IB)，其中R1为键，或为包含支链或非支链、取代或未取代、饱和或不饱和的脂肪族基团的基团，所述脂肪族基团具有介于1个与30个之间的碳原子，并且任选地包含选自由O、N或S组成的组的一个或多个杂原子；R2为H或反应性官能团；[DIG]为地高辛；[磷酰基]由下式表示：Q1为O或S；并且Q2为H、
‑
CH3或
‑
CH2CH3；其中基团[磷酰基]或基团
‑
PO4H2可以连接至[DIG]的任何位置。2.根据权利要求1所述的笼状半抗原，其中Q1为S。3.根据权利要求1所述的笼状半抗原，其中Q1为O，并且至少一个Q2为H。4.根据权利要求3所述的笼状半抗原，其中R2选自胺反应性基团、硫醇反应性基团和羰基反应性基团。5.根据权利要求3所述的笼状半抗原，其中R2选自由以下项组成的组：二苯并环辛炔、反式环辛烯、炔烃、烯烃、叠氮化物、四嗪、马来酰亚胺、N
‑
羟基琥珀酰亚胺、硫醇、1，3
‑
硝酮、醛、酮、肼、羟胺和氨基基团。6.根据权利要求1所述的笼状半抗原，其中两个Q2基团均为H。7.根据权利要求6所述的笼状半抗原，其中R2选自胺反应性基团、硫醇反应性基团和羰基反应性基团。8.根据权利要求6所述的笼状半抗原，其中R2选自由以下项组成的组：二苯并环辛炔、反式环辛烯、炔烃、烯烃、叠氮化物、四嗪、马来酰亚胺、N
‑
羟基琥珀酰亚胺、硫醇、1，3
‑
硝酮、醛、酮、肼、羟胺和氨基基团。9.根据权利要求6所述的笼状半抗原，其中R1具有式(IIIA)中所描绘的结构：
其中R8为键、
‑
O
‑
、
‑
S
‑
、
‑
C(R
c
)(R
d
)
‑
、
‑
或
‑
N(R
c
)
‑
；R
a
和R
b
各自独立地为H、C1‑
C4烷基基团、F、Cl或
‑
N(R
c
)(R
d
)；R
c
和R
d
各自独立地选自H或
‑
CH3；R9和R
10
各自独立地为键或为选自羰基、酰胺、酰亚胺、酯、醚、胺、硫酮、硫醇的基团；每个Z独立地为键、
‑
CH2‑
、
‑
CH2CH2‑
或
‑
CH2CH2CH2‑
；t和u各自独立地为0、1或2，前提是t+u为至少1；并且v为1至8范围内的整数。10.根据权利要求9所述的笼状半抗原，其中R
a
或R
b
中的至少一者为H。11.根据权利要求9所述的笼状半抗原，其中R8为O。12.根据权利要求9所述的笼状半抗原，其中R8为键。13.根据权利要求12所述的笼状半抗原，其中R
a
或R
b
中的至少一者为H。14.根据权利要求12所述的笼状半抗原，其中R
a
和R
b
两者均为H。15.根据权利要求14所述的笼状半抗原，其中Z为键或
‑
CH2‑
。16.根据权利要求1所述的笼状半抗原，其中R1具有式(IIIC)中所描绘的结构：其中R
a
和R
b
各自独立地为H、C1‑
C4烷基基团、F、Cl或
‑
N(R
c
)(R
d
)；R
c
和R
d
各自独立地选自H或
‑
CH3；R9和R
10
各自独立地为键或为选自羰基、酰胺、酰亚胺、酯、醚、胺、硫酮、硫醇的基团；每个Z独立地为键、
‑
CH2‑
、
‑
CH2CH2‑
或
‑
CH2CH2CH2‑
；u和t各自独立地为0、1或2，前提是u+t为至少1；并且v为1至8范围内的整数。17.根据权利要求16所述的笼状半抗原，其中R
a
或R
b
中的至少一者为H。
18.根据权利要求16所述的笼状半抗原，其中Z为键或
‑
CH2‑
。19.根据权利要求16所述的笼状半抗原，其中两个Q2基团均为H。20.根据权利要求19所述的笼状半抗原，其中R2选自胺反应性基团、硫醇反应性基团和羰基反应性基团。21.根据权利要求19所述的笼状半抗原，其中R2选自由以下项组成的组：二苯并环辛炔、反式环辛烯、炔烃、烯烃、叠氮化物、四嗪、马来酰亚胺、N
‑
羟基琥珀酰亚胺、硫醇、1，3
‑
硝酮、醛、酮、肼、羟胺、氨基基团。22.根据权利要求19所述的笼状半抗原，其中Q1为O。23.一种具有式(IIID)的笼状半抗原：其中R1为键，或为包含支链或非支链、取代或未取代、饱和或不饱和的脂肪族基团的基团，所述脂肪族基团具有介于1个与30个之间的碳原子，并且任选地包含选自由O、N或S组成的组的一个或多个杂原子；R2为H或反应性官能团；R3为H、
‑
CH3、
‑
CH2CH3、
‑
OH或
‑
O
‑
Me；R4为H、
‑
CH3或
‑
CH2CH3、
‑
OH或
‑
O
‑
Me；R6为H或者直链或支链或者取代或未取代的C1‑
C6烷基基团；m、n和
o
各自独立地为0或1至4范围内的整数；并且Y为
‑
CH2‑
、
‑
C(R7)
‑
、
‑
N(H)
‑
、
‑
N(R7)
‑
、
‑
O
‑
或
‑
S
‑
或
‑
C(O)
‑
，其中R7为C1‑
C4直链或支链、取代或未取代的烷基基团。24.根据权利要求23所述的笼状半抗原，其中R1具有式(IIIC)中所描绘的结构：
其中R
a
和R
b
各自独立地为H、C1‑
C4烷基基团、F、Cl或
‑
N(R
c
)(R
d
)；R
c
和R
d
各自独立地选自H或
‑
CH3；R9和R
10
各自独立地为键或为选自羰基、酰胺、酰亚胺、酯、醚、胺、硫酮、硫醇的基团；每个Z独立地为键、
‑
CH2‑
、
‑
CH2CH2‑
或
‑
CH2CH2CH2‑
；u和t各自独立地为0、1或2，前提是u+t为至少1；并且v为1至8范围内的整数。25.根据权利要求24所述的笼状半抗原，其中R
a
或R
b
中的至少一者为H。26.根据权利要求24所述的笼状半抗原，其中Z为键或
‑
CH2‑
。27.根据权利要求24所述的笼状半抗原，其中R2选自胺反应性基团、硫醇反应性基团和羰基反应性基团。28.根据权利要求24所述的笼状半抗原，其中R2选自由以下项组成的组：二苯并环辛炔、反式环辛烯、炔烃、烯烃、叠氮化物、四嗪、马来酰亚胺、N
‑
羟基琥珀酰亚胺、硫醇、1，3
‑
硝酮、醛、酮、肼、羟胺、氨基基团。29.根据权利要求24所述的笼状半抗原，其中R2选自胺反应性基团、硫醇反应性基团和羰基反应性基团。30.根据权利要求24所述的笼状半抗原，其中R2选自由以下项组成的组：二苯并环辛炔、反式环辛烯、炔烃、烯烃、叠氮化物、四嗪、马来酰亚胺、N
‑
羟基琥珀酰亚胺、硫醇、1，3
‑
硝酮、醛、酮、肼、羟胺、氨基基团。31.根据权利要求29所述的笼状半抗原，其中R1具有式(IIIA)中所描绘的结构：其中R8为键、
‑
O
‑
、
‑
S
‑
、
‑
C(R
c
)(R
d
)
‑
、
‑
或
‑‑
N(R
c
)
‑
；R
a
和R
b
各自独立地为H、C1‑
C4烷基基团、F、Cl或
‑
N(R
c
)(R
d
)；
R
c
和R
d
各自独立地选自H或
‑
CH3；R9和R
10
各自独立地为键或为选自羰基、酰胺、酰亚胺、酯、醚、胺、硫酮、硫醇的基团；每个Z独立地为键、
‑
CH2‑
、
‑
CH2CH2‑
或
‑
CH2CH2CH2‑
；t和u各自独立地为0、1或2，前提是t+u为至少1；并且v为1至8范围内的整数。32.根据权利要求31所述的笼状半抗原，其中R
a
或R
b
中的至少一者为H。33.根据权利要求31所述的笼状半抗原，其中R8为O。34.根据权利要求31所述的笼状半抗原，其中R8为键。35.根据权利要求34所述的笼状半抗原，其中R
a
或R
b
中的至少一者为H。36.根据权利要求34所述的笼状半抗原，其中R
a
和R
b
两者均为H。37.根据权利要求36所述的笼状半抗原，其中Z为键或
‑
CH2‑
。38.根据权利要求23所述的笼状半抗原，其中R3、R4或R6中的至少一者为
‑
CH3。39.根据权利要求23所述的笼状半抗原，其中R3和R4中的至少一者为
‑
CH3。40.根据权利要求39所述的笼状半抗原，其中R6为H。41.根据权利要求23所述的笼状半抗原，其中R2为H。42.根据权利要求23所述的笼状半抗原，其中Y为
‑
C(O)
‑
。43.根据权利要求23所述的笼状半抗原，其中R2为H并且Y为
‑
C(O)
‑
。44.根据权利要求43所述的笼状半抗原，其中R1具有式(IIIA)中所描绘的结构：其中R8为键、
‑
O
‑
、
‑
S
‑
、
‑
C(R
c
)(R
d
)
‑
、
‑
或
‑
N(R
c
)
‑
；R
a
和R
b
各自独立地为H、C1‑
C4烷基基团、F、Cl或
‑
N(R
c
)(R
d
)；R
c
和R
d
各自独立地选自H或
‑
CH3；R9和R
10
各自独立地为键或为选自羰基、酰胺、酰亚胺、酯、醚、胺、硫酮、硫醇的基团；每个Z独立地为键、
‑
CH2‑
、
‑
CH2CH2‑
或
‑
CH2CH2CH2‑
；t和u各自独立地为0、1或2，前提是t+u为至少1；并且v为1至8范围内的整数。45.一种缀合物，其包含根据权利要求1至44中任一项所述的笼状半抗原以及一抗。46.根据权利要求45所述的缀合物，其中所述笼状半抗原间接地偶联至所述一抗。47.根据权利要求46所述的缀合物，其中所述一抗为完整一抗。48.一种缀合物，其包含根据权利要求1至44中任一项所述的笼状半抗原以及二抗。49.根据权利要求48所述的缀合物，其中所述笼状半抗原间接地偶联至所述二抗。
50.根据权利要求48所述的缀合物，其中所述二抗为完整二抗。51.一种具有式(IVA)和(IVB)中的任一者的缀合物：[特异性结合实体]
‑
W1‑
W2‑
R1‑
O
‑
[DIG]
‑
[磷酰基]
ꢀꢀꢀꢀ
(IVA)，[特异性结合实体]
‑
W1‑
W2‑
R1‑
O
‑
[DIG]
‑
PO4H2ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
(IVB)，其中W1为键，或为包含支链或非支链、取代或未取代、饱和或不饱和的脂肪族基团的基团，所述脂肪族基团具有介于1个与10个之间的碳原子，并且任选地包含选自由O、N或S组成的组的一个或多个杂原子；W2衍生自反应性官能团；[DIG]为地高辛；[磷酰基]由下式表示：Q1为O或S；Q2为H、
‑
CH3或
‑
CH2CH3；并且[特异性结合实体]为特异性结合实体；其中基团[磷酰基]或基团
‑
PO4H2可以连接至[DIG]的任何位置。52.根据权利要求51所述的缀合物，其中Q1为O，并且至少一个Q2为H。53.根据权利要求52所述的缀合物，其中W2衍生自胺反应性基团、硫醇反应性基团和羰基反应性基团。54.根据权利要求52所述的缀合物，其中W2衍生自二苯并环辛炔、反式环辛烯、炔烃、烯烃、叠氮化物、四嗪、马来酰亚胺、N
‑
羟基琥珀酰亚胺、硫醇、l，3
‑
硝酮、醛、酮、肼、羟胺或氨基基团。55.根据权利要求51所述的缀合物，其中两个Q2基团均为H。56.根据权利要求55所述的缀合物，其中W2衍生自胺反应性基团、硫醇反应性基团和羰基反应性基团。57.根据权利要求55所述的缀合物，其中W2衍生自二苯并环辛炔、反式环辛烯、炔烃、烯烃、叠氮化物、四嗪、马来酰亚胺、N
‑
羟基琥珀酰亚胺、硫醇、1，3
‑
硝酮、醛、酮、肼、羟胺或氨基基团。58.根据权利要求55所述的缀合物，其中R1具有式(IIIA)中所描绘的结构：
其中R8为键、
‑
O
‑
、
‑
S
‑
、
‑
C(R
c
)(R
d
)
‑
、
‑
或
‑
N(R
c
)
‑
；R
a
和R
b
各自独立地为H、C1‑
C4烷基基团、F、Cl或
‑
N(R
c
)(R
d
)；R
c
和R
d
各自独立地选自H或
‑
CH3；R9和R
10
各自独立地为键或为选自羰基、酰胺、酰亚胺、酯、醚、胺、硫酮、硫醇的基团；每个Z独立地为键、
‑
CH2‑
、
‑
CH2CH2‑
或
‑
CH2CH2CH2‑
；t和u各自独立地为0、1或2，前提是t+u为至少1；并且v为1至8范围内的整数。59.根据权利要求58所述的缀合物，其中R
a
或R
b
中的至少一者为H。60.根据权利要求59所述的缀合物，...

【专利技术属性】
技术研发人员：Y，
申请(专利权)人：文塔纳医疗系统公司，
类型：发明
国别省市：