本发明专利技术公开了一种增强间充质干细胞表达肝生长因子的无血清培养基及增强表达HGF的培养方法，属于细胞培养技术领域。该培养基属于增强型培养基，培养基含有细胞所需的营养因子，可以提供维持细胞生长和增殖的良好环境。通过添加乙酸芳樟酯，异鼠李素，茵陈黄酮，可以显著提高间充质干细胞的贴壁，促进细胞增殖速率和表达HGF。利用增强间充质干细胞表达肝生长因子的无血清培养基在增强表达HGF的培养方法中的应用，该培养基中添加的成分明确，效果稳定，无批次间差异，适合标准化的工艺生产，促进MSCs表达的无血清培养基能够满足细胞生长、增殖和表达肝生长因子的需要，成本低，材料易得且易于工艺化生产。得且易于工艺化生产。得且易于工艺化生产。
【技术实现步骤摘要】
一种增强间充质干细胞表达肝生长因子的无血清培养基及增强表达HGF的培养方法
[0001]本专利技术属于细胞培养
，具体涉及一种增强间充质干细胞表达肝生长因子的无血清培养基及增强表达HGF的培养方法。
技术介绍
[0002]间充质干细胞作为成体干细胞的一种，具有多种优点，如材料易得、无伦理问题、高度增殖、多向分化和免疫调节。已经成为多种重大疾病的潜在治疗材料，如神经退行性疾病、糖尿病、脑卒中、肺纤维化、类风湿性关节炎和移植物抗宿主病等。在国内和国外，近些年已经有众多MSCs的临床试验开展并取得了积极的治疗效果。
[0003]MSCs作为一种药物，其治疗效果会受到供体来源、细胞来源、培养条件、细胞状态等外在因素的影响。干细胞的标准化工艺培养是临床取得良好疗效的重要基础。如今已经发展了多种培养体系，包括以胎牛血清为主的血清培养基和无血清培养体系。胎牛血清由于其异源性存在很多缺点，开发和应用新型无血清培养体系已经成为未来干细胞工业化生产的趋势。维持MSCs的自我更新、多向分化和分泌生长因子是干细胞发挥疗效的基础，这要求培养体系能够提供相应的维持干细胞生长和分泌的营养物质。通过特定的无血清培养基对MSCs进行培养，能够增强干细胞的生长因子表达，有助于扩展其应用和疗效。肝生长因子HGF是MSCs表达的生长因子，其有助于介导干细胞治疗多种重大疾病。目前市场上缺乏特异性增强间充质干细胞表达HGF表达的方法和产品。
技术实现思路
[0004]本专利技术的第一目的在于提供一种增强间充质干细胞表达肝生长因子的无血清培养基，该培养基属于增强型培养基，培养基含有细胞所需的营养因子，可以提供维持细胞生长和增殖的良好环境。通过添加乙酸芳樟酯，异鼠李素，茵陈黄酮，可以显著提高间充质干细胞的贴壁，促进细胞增殖速率和表达HGF。
[0005]本专利技术的第二目的在于提供一种利用增强间充质干细胞表达肝生长因子的无血清培养基在增强表达HGF的培养方法中的应用，该培养基中添加的成分明确，效果稳定，无批次间差异，适合标准化的工艺生产，促进MSCs表达的无血清培养基能够满足细胞生长、增殖和表达肝生长因子的需要，成本低，材料易得且易于工艺化生产。
[0006]本专利技术通过以下技术方案实现：一种增强间充质干细胞表达肝生长因子的无血清培养基，包括：将添加因子浓缩液和含中药小分子浓缩液混于DMEM高糖基础培养基中。
[0007]作为优选地，所述DMEM高糖基础培养基保存于0
‑
8 ℃，浓缩液保存于
‑
20 ℃以下。
[0008]作为优选地，所述添加因子浓缩液包括添加浓度分别为重组人胰岛素1
‑
20 mg/L，维生素C 10
‑
80 mg/L，L
‑
谷氨酰胺1
‑
10 ng/mL和人血小板裂解物1
‑
8 wt %；所述含中药小分子浓缩液包括添加浓度分别为乙酸芳樟酯0.1
‑
1.0 μmol/L，异鼠
李素1
‑
15 μmol/L和茵陈黄酮1
‑
5 μmol/L中的一种或多种。
[0009]作为优选地，所述添加因子浓缩液包括添加浓度分别为重组人胰岛素5
‑
15 mg/L，维生素C 30
‑
60 mg/L，L
‑
谷氨酰胺3
‑
8 ng/mL和人血小板裂解物3
‑
6 wt %；所述含中药小分子浓缩液包括添加浓度分别为乙酸芳樟酯0.3
‑
0.8 μmol/L，异鼠李素8
‑
12 μmol/L和茵陈黄酮2
‑
4 μmol/L中的一种或多种。
[0010]作为优选地，所述添加因子浓缩液包括添加浓度分别为重组人胰岛素10 mg/L，维生素C 50 mg/L，L
‑
谷氨酰胺5 ng/mL和人血小板裂解物5 wt%；所述含中药小分子浓缩液包括添加浓度分别为乙酸芳樟酯0.5 μmol/L，异鼠李素10 μmol/L和茵陈黄酮3 μmol/L中的一种或多种。
[0011]一种增强间充质干细胞表达肝生长因子的无血清培养基的制备方法，包括如下步骤：将除人血小板裂解物的添加因子浓缩液和含中药小分子浓缩液依次按照1：1000的比例加入DMEM高糖基础培养基中混匀，然后用滤膜过滤除菌，按照相应添加比例加入人血小板裂解物，完成。
[0012]一种增强间充质干细胞表达肝生长因子的无血清培养基在间充质干细胞培养中的应用。
[0013]一种用于间充质干细胞的增强表达HGF的培养方法，包括：S1、将所需间充质干细胞复苏培养或者传代培养后，接种于10 cm2的培养皿中；S2、将上述细胞置于37℃恒温湿式培养箱中培养4
‑
12 h后，更换为如权利要求1
‑
5任一项所述的增强间充质干细胞表达肝生长因子的无血清培养基，随后继续培养24 h；S3、去掉上清，PBS清洗2
‑
3次后，收集所有细胞，裂解后采用ELISA法检测HGF的表达量。
[0014]作为优选地，所述HGF的表达量在1
×
106个细胞中的表达量不低于为1417.165 pg/mL。
[0015]与现有技术相比，本专利技术至少具有如下技术效果：本专利技术提供了一种增强间充质干细胞表达肝生长因子的无血清培养基，该培养基属于增强型培养基，培养基含有细胞所需的营养因子，可以提供维持细胞生长和增殖的良好环境。通过添加乙酸芳樟酯，异鼠李素，茵陈黄酮，可以显著提高间充质干细胞的贴壁，促进细胞增殖速率和表达HGF。
[0016]该利用增强间充质干细胞表达肝生长因子的无血清培养基在增强表达HGF的培养方法中的应用，该培养基中添加的成分明确，效果稳定，无批次间差异，适合标准化的工艺生产，促进MSCs表达的无血清培养基能够满足细胞生长、增殖和表达肝生长因子的需要，成本低，材料易得且易于工艺化生产。
附图说明
[0017]图1为试验例1中的细胞形态示意图；图2为试验例4中的成骨分化示意图；图3为试验例5中的成脂分化示意图；图4为试验例6中的生长因子表达示意图。
具体实施方式
[0018]下面将结合实施例对本专利技术的实施方案进行详细描述，但是本领域技术人员将会理解，下列实施例仅用于说明本专利技术，而不应视为限制本专利技术的范围，实施例中未注明的具体条件，按照常规条件或者制造商建议的条件进行，所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市售购买获得的常规产品。
[0019]实施例1：一种增强间充质干细胞表达肝生长因子的无血清培养基，包括：将添加因子浓缩液和含中药小分子浓缩液混于DMEM高糖基础培养基中；所述DMEM高糖基础培养基保存于0
‑
8℃，浓缩液保存于
‑
20℃以下；所述添加因子浓缩液包括添加浓度分别为重组人胰岛素1 mg/L，维本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.一种增强间充质干细胞表达肝生长因子的无血清培养基，其特征在于，包括：将添加因子浓缩液和含中药小分子浓缩液混于DMEM高糖基础培养基中。2.根据权利要求1所述的一种增强间充质干细胞表达肝生长因子的无血清培养基，其特征在于，所述DMEM高糖基础培养基保存于0
‑
8℃，浓缩液保存于
‑
20℃以下。3. 根据权利要求1所述的一种增强间充质干细胞表达肝生长因子的无血清培养基，其特征在于，所述添加因子浓缩液包括添加浓度分别为重组人胰岛素1
‑
20 mg/L，维生素C 10
‑
80 mg/L，L
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谷氨酰胺1
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10 ng/mL和人血小板裂解物1
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8 wt%；所述含中药小分子浓缩液包括添加浓度分别为乙酸芳樟酯0.1
‑
1.0 μmol/L，异鼠李素1
‑
15 μmol/L和茵陈黄酮1
‑
5 μmol/L中的一种或多种。4. 根据权利要求3所述的一种增强间充质干细胞表达肝生长因子的无血清培养基，其特征在于，所述添加因子浓缩液包括添加浓度分别为重组人胰岛素5
‑
15 mg/L，维生素C 30
‑
60 mg/L，L
‑
谷氨酰胺3
‑
8 ng/mL和人血小板裂解物3
‑
6 wt %；所述含中药小分子浓缩液包括添加浓度分别为乙酸芳樟酯0.3
‑
0.8 μmol/L，异鼠李素8
‑
12 μmol/L和茵陈黄酮2
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4 μ...
【专利技术属性】
技术研发人员：李雪阳，雷建慧，赵雅宁，刘彦彦，
申请(专利权)人：北京葆来生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
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