一种快速制备马铃薯Y病毒属（Potyvirus）病毒的方法技术

本发明专利技术通过将TVCV侵染性克隆拆分为两个载体，在相应目的片段引入LoxP序列，将马铃薯Y病毒属病毒外壳蛋白基因替换对应野生型病毒的外壳蛋白基因，利用Cre酶诱导LoxP位点在植物体内重组后形成能够表达马铃薯Y病毒属病毒外壳蛋白的嵌合体病毒载体，从而产生具有类似对应马铃薯Y病毒属病毒粒子的嵌合体病毒病毒粒子。本发明专利技术也提供一种快速制备表达马铃薯Y病毒属病毒蛋白外壳的载体组合，改造pGT载体就能实现形成多种马铃薯Y病毒属病毒的类似嵌合体病毒，突破了马铃薯Y病毒属病毒寄主范围的限制，克服了马铃薯Y病毒属病毒粒子纯化困难的难题，降低了马铃薯Y病毒属病毒粒子提取的难度，推进了对马铃薯Y病毒属病毒生物学特性等方面的研究。性等方面的研究。性等方面的研究。

【技术实现步骤摘要】
一种快速制备马铃薯Y病毒属(Potyvirus)病毒的方法


[0001]本专利技术涉及植物基因工程领域，具体涉及一种马铃薯Y病毒属病毒粒子快速制备技术。

技术介绍

[0002]马铃薯Y病毒属(Potyvirus)病毒是植物病毒中最多的一类病毒，包括辣椒环斑病毒(chilli ringspot virus,ChiRSV)、辣椒轻斑驳病毒(chilli veinal mottle virus,ChiVMV)、百合斑驳病毒(lily mottle virus,LMoV)、马铃薯Y病毒(Potato virus Y,PYV)、鸢尾马铃薯Y病毒B(iris potyvirus B,IPB)、鸢尾马铃薯Y病毒A(iris potyvirus A,IPA)等多种病毒，是增殖过程复杂但基因组简单的一类重要病毒,对农业生产造成重大的经济损失。目前，针对植物病毒制备抗血清进行免疫检测是防控植物病毒的有效手段，而在采用植物病毒制备抗血清的过程中利用纯化的病毒粒子制备抗血清是常用的抗体制备手段。
[0003]自然界一般为多种病毒复合侵染，特别是百合、辣椒等园艺本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种快速制备马铃薯Y病毒属(Potyvirus)病毒的方法，其特征在于，拆分TVCV病毒后构建载体，将载体中TVCV
‑
CP蛋白序列替换为Potyvirus
‑
CP蛋白序列，并使用Cre
‑
LoxP重组系统构建嵌合病毒载体。2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)拆分TVCV病毒后构建pMT和pGT两个载体，其中pGT部分包含TVCV
‑
CP，替换pGT中的CP序列为Potyvirus
‑
CP序列，获得pGT
‑
Potyvirus
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CP；(2)构建Cre
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LoxP重组系统，在pMT载体的3
’
端接入LoxP序列，在pGT
‑
Potyvirus
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CP的5
’
端接入LoxP序列；(3)构建pCre载体；(4)将pCre，pMT，pGT
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Potyvirus
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CP三种载体采用农杆菌介导法共转化至植物体内，Cre基因表达后获得表达Potyvirus
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CP的嵌合体病毒载体。3.如权利要求2所述的方法，其特征在于，所述pCre载体为pLoxP
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Cre或pCB
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ACre，所述pLoxP
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Cre包含表达后自我敲除序列...

【专利技术属性】
技术研发人员：彭杰军，燕飞，章戈，焦梦婷，华梦滢，鲁宇文，郑红英，
申请(专利权)人：宁波大学，
类型：发明
国别省市：