一种利用铜绿假单胞菌治理土壤中镍污染的方法技术

本发明专利技术提供了一种利用铜绿假单胞菌治理土壤中镍污染的方法。从受镍污染的土壤中筛选出的铜绿假单胞菌；通过分离、纯化等步骤，获得纯种菌株，并优化培养条件，以获得最佳的生长状态和细胞数量；将铜绿假单胞菌菌株用于受镍污染的土壤中，通过生物吸附的方式，将土壤中的镍污染物质高效地吸附，将镍污染物质从土壤中去除，达到修复土壤的目的。该方法具有高效、经济的优点，对于土壤污染治理具有重要的意义。义。

【技术实现步骤摘要】
一种利用铜绿假单胞菌治理土壤中镍污染的方法


[0003]本专利技术涉及环境污染治理
，具体涉及一种利用铜绿假单胞菌治理土壤中镍污染的方法。

技术介绍

[0005]土壤污染是目前环境问题中的一个重要问题。其中，镍污染是土壤污染中的一种重要类型。传统的镍污染治理方法主要包括物理和化学方法，如吸附、沉淀、还原等。但这些方法具有成本高、效果差、副产物产生等缺点，不能满足实际需求。
[0006]生物技术作为一种新兴的污染治理技术，具有成本低、效果好、环境友好等优点。因此，近年来，越来越多的研究关注于利用生物技术治理土壤污染。在其中，利用微生物修复土壤污染具有广阔的应用前景。而铜绿假单胞菌作为一种普遍存在于土壤中的细菌，具有高吸附能力和生物降解能力，在污染物的修复方面具有很好的应用前景。

技术实现思路

[0008]本专利技术提供了一种利用铜绿假单胞菌治理土壤中镍污染的方法。通过从受镍污染的土壤中分离筛选出的铜绿假单胞菌菌株在适宜的生长条件下培养获得最佳的生长状态和细胞数量，然后将培养好的铜绿假单胞菌用于镍污染土壤之中，使菌株吸附土壤中的镍离子。通过吸附将土壤中的镍离子去除，从而实现对土壤镍污染的修复。所述具体步骤为：
[0009]步骤1.从镍污染土壤中随机采集一定量的土样。
[0010]步骤2.将土样制成悬液，加入铜绿假单胞菌选择性富集液中，进行摇床富集培养，增加铜绿假单胞菌菌株的比例。
[0011]步骤3.培养结束后使用无菌移液管，取出富集液中的菌液，滴在含有选择性抗生素的Cetrimide Agar(CA)培养基的琼脂平板表面上，进行涂布培养。
[0012]步骤4.将培养好的菌落进行形态学特征观察和染色镜检。
[0013]步骤5.将筛选出的菌株分离单株纯化后，接种Luria
‑
Bertani(LB)液体培养基中进行培养。通过优化培养条件，获得足够数量的菌株。
[0014]步骤6.取上述培养好的铜绿假单胞菌菌株，接种于土壤悬液中培养一定时间，使菌株在土壤中生长繁殖并吸附镍离子，将镍离子从土壤中去除。
[0015]步骤7.培养结束后，通过离心的方法分离出土壤悬液中的铜绿假单胞菌，取离心后的上清液进行镍离子浓度变化分析，以评估铜绿假单胞菌细菌对镍离子的吸附能力。
[0016]优选的，所述将土样制成悬液是将采集到的土样通过干燥、粉碎、筛分后加入0.85％氯化钠溶液中，然后通过振荡充分混合和分散土样，待沉淀后取上清液作为土壤悬液。
[0017]优选的，所述进行富集培养的铜绿假单胞菌选择性富集液主要成分为：马铃薯葡萄糖琼脂(PDA)、氯化钠、磷酸氢二钾、磷酸氢二钠、氯化镁、青霉素钾盐、氯霉素、地塞米松、pH值调节至7.2
‑
7.4。
[0018]优选的，所述进行富集培养的培养温度为25℃
‑
30℃，培养时间为12
‑
24小时，摇床振荡强度为60
‑
70rpm。
[0019]优选的，所述涂布培养的Cetrimide Agar(CA)培养基的主要成分为：酪蛋白胨、氯化十六烷基三甲基溴化铵、葡萄糖、氯化钠、硫酸镁、磷酸二氢钾、磷酸氢二钠、琼脂、pH值调节至为7.0
‑
7.4。
[0020]优选的，所述涂布培养的培养温度为30℃
‑
35℃，培养时间为24
‑
48小时。
[0021]优选的，所述培养好的菌落进行形态学特征观察和染色镜检，经观察培养基上的菌株会形成蓝绿色的菌落，并且其在紫外光下发出绿色荧光；革兰氏染色后在光学微镜下观察该菌株，经染色镜检，该菌为革兰氏阴性，杆状，初步鉴定为铜绿假单胞菌。
[0022]优选的，所述LB培养基的主要成分为：蛋白胨、酵母提取物、氯化钠。
[0023]优选的，通过调整培养基的pH值、培养温度优化培养条件。
[0024]优选的，所述离心的方法分离出悬液中的铜绿假单胞菌菌株时离心速度设定为4000
‑
4500rpm，时间为5
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10分钟。
[0025]本专利技术提供了一种利用铜绿假单胞菌进行生物吸附治理土壤镍污染的方法。与传统的物理和化学方法相比，生物吸附方法具有以下优点：
[0026]1.环境友好。与传统的物理和化学方法相比，生物吸附方法对环境的污染更少，更符合环保要求。
[0027]2.高效性。铜绿假单胞菌菌株具有较高的吸附能力，能够高效地吸附土壤中的镍污染物质。
[0028]3.经济性。生物吸附方法不需要昂贵的设备和化学药剂，具有成本较低的优势。
[0029]4.操作简单。生物吸附方法的操作相对简单，不需要过多的人力和物力投入。
具体实施方式
[0031]为了使本专利技术的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合具体实施例，对本专利技术进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用于解释本专利技术，并不用于限定本专利技术。
[0032]实施例1从土壤中分离筛选出能够在镍污染环境中生长繁殖的铜绿假单胞菌菌株
[0033]从受镍污染土壤中随机采集一定量的土样，将采集到的土样通过干燥、粉碎、筛分后加入0.85％氯化钠溶液中，然后通过振荡充分混合和分散土样，待沉淀后取上清液作为土壤悬液，然后将制备好的土壤悬液加入铜绿假单胞菌选择性富集液中，进行摇床富集培养，在培养温度为25℃
‑
30℃，摇床振荡强度为60
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70rpm下培养12
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24小时。培养结束后使用无菌移液管，取出富集液中的菌液，滴在含有选择性抗生素的CA培养基的琼脂平板表面上，然后使用火焰消毒的铁环将液滴在琼脂平板表面上涂抹均匀，在培养温度为30℃
‑
35℃下进行涂布培养，培养24
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48小时后，经观察培养基上的菌株会形成蓝绿色的菌落，并且其在紫外光下发出绿色荧光；革兰氏染色后在光学微镜下观察该菌株，经染色镜检，该菌为革兰氏阴性，杆状，鉴定为铜绿假单胞菌。
[0034]实验例2将筛选出的菌株在适宜的生长条件下进行培养，以获取足够数量的细胞。
[0035]使用无菌的医用铁针将单菌落转移到Luria
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Bertani(LB)固体培养基上，在培养基表面涂布均匀后，35℃恒温培养箱培养24小时，划线分离，纯化。
[0036]在无菌条件下分别配制不同pH值(pH为5.0、6.0、7.0、8.0、9.0)的Luria
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Bertani(LB)液体培养基中，将上述纯化好的菌株分别接种在培养基中，不同温度下(25℃、30℃、35℃、40℃、45℃)下振荡培养，在不同时段(0、8、16、24、32、40、48、56h)定时取样，采用稀释平板计数测定细菌数量，比较不同pH的培养基和培养温度下菌株的生长情况，以确定菌株能够快速生长的培养条件。
[0037]实验例3铜本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种利用铜绿假单胞菌修复土壤中镍污染的方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤1.从受镍污染的土壤中分离筛选出铜绿假单胞菌菌株，筛选出的菌株经过分离纯化后在适宜的生长条件下培养获得最佳的生长状态和细胞数量；步骤2.将培养好的铜绿假单胞菌接种于镍污染土壤之中，使菌株在土壤中吸附镍离子，收集处理后的土壤样品，检测其中镍离子浓度变化。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于从土壤中分离筛选出铜绿假单胞菌菌株的步骤包括采集土壤样品制成悬液，加入铜绿假单胞菌选择性富集液中富集培养，培养好后转移到CA培养基上进行涂布培养，培养好的菌落进行观察和镜检。3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于适宜的生长条件是调整培养基的pH值和培养温度。4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于培养好的铜绿假单胞菌接种于镍污染土壤之中是将铜绿假单胞菌接种于含镍离子的土壤样品悬液中。5.根据权利要求2所述的办法，其特征在于铜绿假单胞菌选择性...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈祖开，陈德静宜，
申请(专利权)人：弥逻上海环保节能科技有限公司，
类型：发明
国别省市：