本发明专利技术提供一种适用于滑液囊支原体的培养基及其制备方法，涉及病原微生物培养技领域，该培养基的组分包括：超纯水100ml、氯化钠0.5g、氯化钾0.04g、七水合硫酸镁0.02g、十二水合磷酸氢二钠0.16g、磷酸二氢钾0.02g、葡萄糖1.0g、蛋白胨1g、酵母浸粉0.25g、1％酚红0.1ml以及辅助成分，本发明专利技术针对现有技术的不足，用鸡胚提取物(CEE)代替一定比例的动物血清，提供一种鸡滑液囊支原体培养基及其制备方法，减少了动物血清等成分的使用，降低了外源异物对鸡的过敏反应，降低了企业的生产成本。添加几种氨基酸(甘氨酸、赖氨酸、胆固醇和精氨酸)，同时添加几种促进支原体生长的氨基酸，提高了鸡滑液囊支原体的活菌滴度。更适合鸡滑液囊支原体的分离鉴定和疫苗生产。体的分离鉴定和疫苗生产。体的分离鉴定和疫苗生产。
【技术实现步骤摘要】
一种适用于滑液囊支原体的培养基及其制备方法
[0001]本专利技术涉及病原微生物培养技领域，尤其涉及一种适用于滑液囊支原体的培养基及其制备方法。
技术介绍
[0002]滑液囊支原体是感染禽类的一种重要的致病性支原体。MS感染主要引起家禽关节炎、滑膜炎、气囊炎、生殖道炎，可导致病鸡明显的跛行，生长发育迟缓、产蛋量下降等，而且感染禽会终生带菌，难以根除，给养鸡业造成重大经济损失。由于MS基因组中缺少很多必须的编码氨基酸和辅助因子生物合成的基因，从而导致能量代谢缓慢，陷型某些营养辅助因子、氨基酸和脂类。需要从外界获取多种营养物质促进代谢繁殖，造成其培养基营养成分复杂，培养条件苛刻。目前，MS培养基面临着成本高，效率低的问题。
[0003]针对现有技术的不足，此方法提供一种鸡滑液囊支原体(WVU1853)培养基及其制备方法，既减少了血清等成分的使用，降低了外源异物对鸡只的过敏反应，降低了企业的生产成本，同时添加几种促进支原体生长的氨基酸，提高了鸡滑液囊支原体的活菌滴度。此方法活菌滴度和分离的敏感性远高于现有技术的培养基，更适合鸡滑液囊支原体的分离鉴定和疫苗生产。
技术实现思路
[0004]本专利技术的目的是解决现有技术存在的以下问题：
[0005]滑液囊支原体是感染禽类的一种重要的致病性支原体。MS感染主要引起家禽关节炎、滑膜炎、气囊炎、生殖道炎，可导致病鸡明显的跛行，生长发育迟缓、产蛋量下降等，而且感染禽会终生带菌，难以根除，给养鸡业造成重大经济损失。由于MS基因组中缺少很多必须的编码氨基酸和辅助因子生物合成的基因，从而导致能量代谢缓慢，陷型某些营养辅助因子、氨基酸和脂类。需要从外界获取多种营养物质促进代谢繁殖，造成其培养基营养成分复杂，培养条件苛刻。目前，MS培养基面临着成本高，效率低的问题。
[0006]为解决现有技术存在的问题，本专利技术提供了一种适用于滑液囊支原体的培养基及其制备方法，该培养基的组分包括：超纯水100ml、氯化钠0.5g、氯化钾0.04g、七水合硫酸镁0.02g、十二水合磷酸氢二钠0.16g、磷酸二氢钾0.02g、葡萄糖1.0g、蛋白胨1g、酵母浸粉0.25g、1％酚红0.1ml以及辅助成分。
[0007]进一步的，所述辅助成分包括以下质量组分组成：鸡胚提取物、猪血清、80万单位/ml青霉素、1％NAD、甘氨酸、赖氨酸、胆固醇、精氨
[0008]进一步的，所述培养基的制备方法如下：
[0009]步骤一：按照基础培养基配方组分配方配制六份基础培养基；
[0010]步骤二：灭菌：放置于高温高压灭菌锅中114℃30min蒸汽灭菌。
[0011]步骤三：添加辅助成分：鸡胚提取物2％
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5％、猪血清0.5
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3％、80万单位/ml青霉素1
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4ml、1％NAD1g、甘氨酸0.005
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0.03g、赖氨酸0.002
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0.0175g、胆固醇0.1
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0.7、精氨酸
0.005
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0.030g，以不同比例组分分为六份并分别添加至基础培养基内。
[0012]步骤四：使用5mol/LNaOH溶液调节鸡滑液囊支原体CEE培养基，pH至7.4
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7.6，于4℃条件下保存。
[0013]进一步的，所述步骤三中的辅助成分，由以下组分组成：鸡胚提取物1％、猪血清0.5％、80万单位/ml青霉素1.5ml、1％NAD1g、甘氨酸0.005g、赖氨酸0.002g、胆固醇0.1g、精氨酸0.005g。
[0014]进一步的，所述步骤三中需调配添加不同比例的辅助成分，由以下组分组成：鸡胚提取物2％、猪血清1.0％、80万单位/ml青霉素1.5ml、1％NAD1g、甘氨酸0.010g、赖氨酸0.005g、胆固醇0.3g、精氨酸0.010g。
[0015]进一步的，所述步骤三中需调配添加不同比例的辅助成分，由以下组分组成：鸡胚提取物2.5％、猪血清1.5％、80万单位/ml青霉素1.5ml、1％NAD1g、甘氨酸0.015g、赖氨酸0.0075g、胆固醇0.4g、精氨酸0.015g。
[0016]进一步的，所述步骤三中需调配添加不同比例的辅助成分，由以下组分组成：鸡胚提取物3％、猪血清2％、80万单位/ml青霉素1.5ml、1％NAD1g、甘氨酸0.020g、赖氨酸0.0100g、胆固醇0.5g、精氨酸0.020g。
[0017]进一步的，所述步骤三中需调配添加不同比例的辅助成分，由以下组分组成：鸡胚提取物3.5％、猪血清2.5％、80万单位/ml青霉素1.5ml、1％NAD1g、甘氨酸0.025g、赖氨酸0.0150g、胆固醇0.6、精氨酸0.025g。
[0018]进一步的，所述步骤三中需调配添加不同比例的辅助成分，由以下组分组成：鸡胚提取物4％、猪血清3％、80万单位/ml青霉素1.5ml、1％NAD1g、甘氨酸0.030g、赖氨酸0.0175g、胆固醇0.7、精氨酸0.030g。
[0019]与现有技术相比，本专利技术的有益效果是：
[0020]本专利技术针对现有技术的不足，用鸡胚提取物(CEE)代替一定比例的动物血清，提供一种鸡滑液囊支原体培养基及其制备方法，减少了动物血清等成分的使用，降低了外源异物对鸡的过敏反应，降低了企业的生产成本。添加几种氨基酸(甘氨酸、赖氨酸、胆固醇和精氨酸)，同时添加几种促进支原体生长的氨基酸，提高了鸡滑液囊支原体的活菌滴度。更适合鸡滑液囊支原体的分离鉴定和疫苗生产。
附图说明
[0021]图1为不同配方本专利技术培养基制备示意图；
[0022]图2为不同培养不同时间培养支原体活菌量示意图；
[0023]图3为培养基的培养效果试验结果对比示意图；
[0024]图4不同培养基的培养结果示意图
具体实施方式
[0025]为了使本专利技术实现的技术手段、创作特征、达成目的与功效易于明白了解，下面结合具体实施例和附图，进一步阐述本专利技术，但下述实施例仅仅为本专利技术的优选实施例，并非全部。基于实施方式中的实施例，本领域技术人员在没有做出创造性劳动的前提下所获得其它实施例，都属于本专利技术的保护范围。
[0026]下面结合附图描述本专利技术的具体实施例。
[0027]实施例1
[0028]如图1
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4所示，一种适用于滑液囊支原体的培养基，该培养基的组分基础培养基以及辅助成分组成，其中，基础培养基由以下成分组成：超纯水100ml、氯化钠0.5g、氯化钾0.04g、七水合硫酸镁0.02g、十二水合磷酸氢二钠0.16g、磷酸二氢钾0.02g、葡萄糖1.0g、蛋白胨1g、酵母浸粉0.25g、1％酚红0.1ml，辅助成分由以下成分组成：鸡胚提取物1％、猪血清0.5％、80万单位/ml青霉素1.5ml、1％NAD1g、甘氨酸0.005g、赖氨酸0.002g、胆固醇0.1g、精氨酸0.005g。
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【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.一种适用于滑液囊支原体的培养基，其特征在于，该培养基的组分包括：超纯水100ml、氯化钠0.5g、氯化钾0.04g、七水合硫酸镁0.02g、十二水合磷酸氢二钠0.16g、磷酸二氢钾0.02g、葡萄糖1.0g、蛋白胨1g、酵母浸粉0.25g、1％酚红0.1ml以及辅助成分。2.根据权利要求1所述的一种适用于滑液囊支原体的培养基，其特征在于：所述辅助成分包括以下质量组分组成：鸡胚提取物、猪血清、80万单位/ml青霉素、1％NAD、甘氨酸、赖氨酸、胆固醇、精氨酸。3.根据权利要求1所述的一种适用于滑液囊支原体培养基的制备方法，其特征在于：所述培养基的制备方法如下：步骤一：按照基础培养基配方组分配方配制六份基础培养基；步骤二：灭菌：放置于高温高压灭菌锅中114℃30min蒸汽灭菌。步骤三：添加辅助成分：鸡胚提取物1％
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4％、猪血清0.5
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3％、80万单位/ml青霉素1
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4ml、1％NAD1g、甘氨酸0.005
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0.03g、赖氨酸0.002
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0.0175g、胆固醇0.1
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0.7、精氨酸0.005
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0.030g，以不同比例组分分为六份并分别添加至基础培养基内。步骤四：使用5mol/LNaOH溶液调节鸡滑液囊支原体CEE培养基，pH至7.4
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7.6，于4℃条件下保存。4.根据权利要求3所述的一种适用于滑液囊支原体培养基的制备方法，其特征在于：所述步骤三中的辅助成分，由以下组分组成：鸡胚提取物1％、猪血清0.5％、80万单位/ml青霉素1.5ml、1％NAD1g、甘氨酸0.005g、赖氨酸0...
【专利技术属性】
技术研发人员：武小椿，贾尚栋，张旭东，王昊，包世俊，邢小勇，权国梅，
申请(专利权)人：甘肃农业大学，
类型：发明
国别省市：
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