一种检测饲料中四环素类抗生素残留的高效液相方法技术

本发明专利技术涉及分析测试领域，具体涉及一种检测饲料中四环素类抗生素残留的高效液相方法；包括以下步骤：（1）将饲料粉碎后过筛，混匀，称取混匀后的饲料于离心管中，依次加入提取液，振荡、超声提取，离心后混合在一起，向其中加入除脂剂在分液漏斗中萃取，取下层清液；残渣中加入提取液重复以上操作后将两次下层液混合在一起得到备用液；（2）将备用液在涡旋混合器上混匀后过微孔滤膜待测；（3）采用高效液相色谱法测定和确证，流动相采用A相为甲醇，B相为咪唑缓冲溶液，采用梯度洗脱，外标法定量。本发明专利技术方法能够经济有效提高检测结果的准确性，本发明专利技术采用的流动相是温和的中性，更有利于色谱柱和仪器的维护保养，提高仪器的使用寿命。提高仪器的使用寿命。

【技术实现步骤摘要】
一种检测饲料中四环素类抗生素残留的高效液相方法


[0001]本专利技术涉及分析测试领域，具体涉及一种检测饲料中四环素类抗生素残留的高效液相方法。

技术介绍

[0002]金霉素、土霉素、四环素、多西环素属于四环素类抗生素，不仅可以防治细菌性疾病，添加在猪饲料中，还对猪的生长具有促进作用，在养殖业中使用现象非常普遍，随之而来的滥用抗生素问题不能忽视。因此，开发一种经济高效对饲料进行金霉素、土霉素、四环素、多西环素残留检测的方法对保证食品安全具有重要意义。
[0003]目前针对饲料中四环素类抗生素的检测主要有GB/T 19684
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2005《饲料中金霉素的测定高效液相色谱法》、GB/T 22259
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2008《饲料中土霉素的测定高效液相色谱法》以及农业农村部公告第282号
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2020《饲料中土霉素、四环素、金霉素、多西环素的测定》。
[0004]GB/T 19684
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2005《饲料中金霉素的测定高效液相色谱法》和GB/T 22259
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2008《饲料中土霉素的测定高效液相色谱法》均为单元素检测方法，限制了实际应用范围。而且两种方法的流动相分别采用磷酸盐缓冲溶液(pH＝3.5)：乙腈＝84:16和乙二酸溶液：乙腈：甲醇＝10:3:2，色谱条件比较苛刻，大量的酸性流动相长期使用会使仪器系统腐蚀，对仪器的维护保养不利从而缩短色谱柱及仪器的使用寿命。
[0005]农业农村部公告第282号
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2020《饲料中土霉素、四环素、金霉素、多西环素的测定》采用的高相液相方法可以同时对四种抗生素进行检测。但是其流动相采用EDTA
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CaCl2‑
乙酸盐缓冲液(pH＝6.5
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6.7)和甲醇。大量的酸性流动相长期使用会腐蚀仪器系统，对仪器的维护保养不利从而缩短色谱柱及仪器的使用寿命；含盐量高的流动相，盐类很容易结晶析出，造成仪器系统配件磨损、堵塞，甚至停机，对色谱系统的维护保养不利，不适宜长期使用。
[0006]饲料中通常含有一定量的金属离子，四环素类抗生素易与饲料中的金属离子鳌合，给提取带来困难。饲料中还含有脂肪、膳食纤维等多种成分，提取时产生乳化现象导致抗生素被包埋，从而造成检测结果的准确度不高。

技术实现思路

[0007]本专利技术为解决现有的高效液相方法所使用的酸性流动相及含盐量高的流动相会缩短仪器的使用寿命，以及饲料提取时产生乳化现象导致抗生素被包埋，从而造成检测结果的准确度不高的技术问题，提供一种检测饲料中四环素类抗生素残留的高效液相方法。本专利技术方法既可以进行准确可靠的测试，又能在长期使用中有利于仪器的维护保养，还能够节约成本、经济实惠。
[0008]为解决上述技术问题，本专利技术所采用的技术方案为：
[0009]一种检测饲料中四环素类抗生素残留的高效液相方法，所述四环素类抗生素为金霉素、土霉素、四环素及多西环素；
[0010]所述方法包括以下步骤：
[0011](1)将饲料粉碎后过0.45mm孔径的分析筛，混匀，称取混匀后的饲料于离心管中，加入提取液后振荡提取一定时间，超声提取一定时间，离心提取一定时间，倾出上清液到分液漏斗中，向分液漏斗中加除脂剂后充分振摇，静置分层后取下层液至另一离心管中；残渣中加入提取液重复以上操作后将两次下层液混合在一起得到备用液；
[0012](2)将步骤(1)所得备用液在涡旋混合器上混匀后过微孔滤膜待测；
[0013](3)采用高效液相色谱法测定和确证，流动相采用A相为甲醇，B相为咪唑缓冲溶液，采用梯度洗脱，外标法定量。
[0014]进一步的，步骤(1)中混匀后的饲料、提取液及除脂剂的添加比例为3
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5g：18
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23mL：13
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17mL。
[0015]进一步的，步骤(1)中振荡提取时间为18
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22分钟，超声提取时间为8
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12分钟，离心时间为8
‑
12分钟。
[0016]进一步的，步骤(1)中离心机参数设置为：10000r/min，离心5min。
[0017]进一步的，步骤(1)中提取液为EDTA
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Mcllvaine缓冲溶液。
[0018]进一步的，步骤(1)中除脂剂是正己烷。
[0019]进一步的，步骤(2)中的微孔滤膜规格为0.45μm。
[0020]与现有技术相比本专利技术具有以下有益效果：
[0021]利用EDTA
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Mcllvaine缓冲液作为提取液能有效地降低四环素类抗生素与饲料中金属离子的鏊合，确保检测结果源头上的准确性。
[0022]正己烷是一种优良的油脂萃取剂，能有效去除提取液中的油脂，防止四环素类抗生素被包埋，提高提取效率。
[0023]以A相:甲醇，B相：咪唑缓冲溶液为流动相，采用梯度洗脱，既有效地保证结果的准确性，又有利于色谱柱和机子的维护保养。
[0024]本专利技术的检测饲料中抗生素残留的方法，能够有效提高检测结果的准确性，为饲料安全提供有益保障。
具体实施方式
[0025]以下结合具体实施例对本专利技术作进一步说明。
[0026]实施例1
[0027]以空白的猪浓缩饲料里添加适量的抗生素为样品，检测其金霉素、土霉素、四环素、多西环素残留的具体含量，来介绍本专利技术的实施过程和效果。
[0028]1.提取液的制备
[0029]1.1柠檬酸溶液：称取柠檬酸10.51g，用水溶解并稀释至500mL。
[0030]1.2磷酸氢二钠溶液：称取磷酸氢二钠35.82g，用水溶解并稀释至500mL。
[0031]1.3Mcllvaine缓冲溶液：取0.1mol/L柠檬酸溶液(1.1中的)500mL、0.2mol/L磷酸氢二钠溶液(1.2中的)310mL，混匀，用盐酸或者氢氧化钠溶液调pH至4.0
±
0.05。
[0032]1.4EDTA
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Mcllvaine缓冲溶液：取乙二胺四乙酸二钠30.30g，加Mcllvaine缓冲溶液(1.3中的)810mL，溶解，混匀。
[0033]2.样品液的制备
[0034]2.1样品液A的制备
[0035]利用粉碎机将饲料粉碎后过0.45mm孔径的分析筛，混匀，称取混匀后的5g饲料于50ml离心管中，加入25ml EDTA
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Mcllvaine缓冲溶液振荡10分钟，超声10分钟，10000r/min离心5min后，倾出上清液到分液漏斗中，加15mL正己烷后充分振摇，静置分层后取下层液至另一50ml离心管中；残渣中加入25ml提取液重复以上操作后将两次下层液混合在一起得到备用液，过0.45微米的微孔滤膜后待测。
[0036]2.2样品液B的制备
[0037]为了对比本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种检测饲料中四环素类抗生素残留的高效液相方法，其特征在于，所述四环素类抗生素为金霉素、土霉素、四环素及多西环素；所述方法包括以下步骤：（1）将饲料粉碎后过0.45 mm孔径的分析筛，混匀，称取混匀后的饲料于离心管中，加入提取液后振荡提取一定时间，超声提取一定时间，离心提取一定时间，倾出上清液到分液漏斗中，向分液漏斗中加除脂剂后充分振摇，静置分层后取下层液至另一离心管中；残渣中加入提取液重复以上操作后将两次下层液混合在一起得到备用液；（2）将步骤（1）所得备用液在涡旋混合器上混匀后过微孔滤膜待测；（3）采用高效液相色谱法测定和确证，流动相采用A相为甲醇， B相为咪唑缓冲溶液，采用梯度洗脱，外标法定量。2.根据权利要求1所述的一种检测饲料中四环素类抗生素残留的高效液相方法，其特征在于，步骤（1）中混匀后的饲料、提取液及除脂剂的添加比例为3
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5g：18
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23mL：13
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【专利技术属性】
技术研发人员：张薇，廉国宁，武晋孝，吕小虎，杨慧玲，宋艳红，赵平伟，米彦飞，郭禹，李二东，冯素彬，王琦，梁文丽，
申请(专利权)人：山西省检验检测中心山西省标准计量技术研究院，
类型：发明
国别省市：