大豆蛋白水解液中具有降胆固醇功能多肽及其制备方法和应用技术

本发明专利技术提出了大豆蛋白水解液中具有降胆固醇功能多肽及其制备方法和应用，属于功能多肽技术领域。所述多肽来源于与胆固醇酯酶分子对接“binding_energy”值＜

【技术实现步骤摘要】
大豆蛋白水解液中具有降胆固醇功能多肽及其制备方法和应用


[0001]本专利技术涉及功能多肽
，具体涉及大豆蛋白水解液中具有降胆固醇功能多肽及其制备方法和应用。

技术介绍

[0002]血脂异常与人类多种疾病有关，目前高血脂症正成为一种威胁国民健康的疾病，拉低人民生命质量。研究认为，降血脂机制通过抑制胰脂肪酶的活性降低对外源性甘油三脂的吸收，降低脂肪酸合成酶的活性从而减少脂肪合成，加速胆固醇代谢促进胆固醇排泄。胆固醇酯酶是一种催化胆固醇脂水解成胆固醇和脂肪酸的一种酶，胆固醇会通过形成胶束从而被小肠上皮细胞吸收进入血液，血液中过量胆固醇会造成高血脂症。抑制胆固醇脂酶的水解活性，能够有效降低血清胆固醇，从而达到降低血脂的目的。
[0003]目前市面上的药物主要有他汀类和非他汀类，他汀类药物会刺激血糖升高从而导致糖尿病的危害发生，而非他汀类药物效果不如他汀类。已经有研究发现，天然食品中的蛋白质组分能调节血脂异常的情况，其降血脂效应来源于它们的肽段和氨基酸残基。从天然食品原料中开发安全有效的降血脂活性成分对国民健康具有重要意义。我们之前的研究发现纳豆激酶水解大豆蛋白获得的大豆肽粉可以显著降低高血脂症小鼠的总胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇等指标。基于此，我们对纳豆激酶水解大豆蛋白得到的水解液，进行质谱测序，生物活性评分，分子对接等技术筛选出具有抑制胆固醇酯酶活性的降胆固醇肽，并通过动物实验进行功能验证，为开发安全有效的降胆固醇保健食品和药品提供技术支持。

技术实现思路

[0004]本专利技术的目的在于提出大豆蛋白水解液中具有降胆固醇功能多肽及其制备方法和应用，具有良好的降胆固醇的效果。
[0005]本专利技术的技术方案是这样实现的：
[0006]本专利技术提供大豆蛋白水解液中具有降胆固醇功能多肽，所述多肽来源于与胆固醇酯酶分子对接“binding_energy”值＜
‑
1.2Kcal的肽段；所述多肽与胆固醇酯酶进行分子对接的肽段来源于Peptide Ranker生物活性打分>0.9的23种多肽。
[0007]作为本专利技术的进一步改进，所述多肽的氨基酸序列为FFFPF、DFPALWLL、GNWGPL、NWGPL、NNPFKF、LFLPHF、GQYPYGGF、NNNPFKFL、NNPFSF、WNPNNKPF、NNNPFKF、GSGIFGM、QQDEDEDEDEDDEDEQIPSHPPRRPSHGK、DEDEDEDEDDEDEQIPSHPPRRPSHGK、QDEDEDEDEDDEDEQIPSHPPRRPSHGK、LRPPF、FSEYPPLGRF、FEFLPPFIRR、NEPWWPKL、VFDPF、SLDVWDPFEGFPF、HFGSF、FFYNPK中的至少一种，优选地，为FFFP。
[0008]本专利技术进一步保护一种上述大豆蛋白水解液中具有降胆固醇功能多肽在制备降低高血脂药物中的应用。
[0009]本专利技术进一步保护一种上述大豆蛋白水解液中具有降胆固醇功能多肽在制备适
用于高血脂人群的食品或者保健品中的应用。
[0010]本专利技术进一步保护一种上述大豆蛋白水解液中具有降胆固醇功能多肽的制备方法，具体包括以下步骤：
[0011](1)制备蛋白水解物：使用蛋白酶对大豆蛋白进行水解得到蛋白水解物；
[0012](2)胆固醇酯酶抑制活性测定：对胆固醇酯酶抑制活性测定；
[0013](3)大豆蛋白水解物序列鉴定：将大豆蛋白水解物进行LC
‑
MS/MS测定，分析其多肽组成；
[0014](4)降胆固醇肽的筛选：将鉴定出的多肽片段先筛选出Peptide Ranker>0.9的潜在生物活性肽，然后将其通过AutoDock 4.2.6软件进行对接，筛选出最具潜力的降胆固醇肽。
[0015]作为本专利技术的进一步改进，所述蛋白酶为纳豆激酶，酶底比为6000IU/g。
[0016]作为本专利技术的进一步改进，所述胆固醇酯酶分子来源于RCSB数据库(PDB:1F6W)。
[0017]作为本专利技术的进一步改进，具体包括以下步骤：
[0018](1)大豆蛋白溶解：以大豆蛋白作为原料，将其溶解于纯水中，配置成3
‑
7％(W/V)大豆分离蛋白溶液；
[0019](2)酶水解大豆蛋白：向其中加入酶，在一定温度下搅拌酶解，得到水解蛋白溶液；
[0020](3)大豆蛋白水解液：灭酶，离心，取上清液，即为大豆分离蛋白水解液；
[0021](4)胆固醇酯酶抑制活性测定：参照文献方法对胆固醇酯酶抑制活性的测定；
[0022](5)多肽序列的鉴定：通过ThermoFisher Q Exactive系统对酶水解大豆蛋白的水解液进行肽谱鉴定；
[0023](6)降胆固醇肽的筛选：将鉴定出的多肽片段先筛选出Peptide Ranker>0.9的潜在生物活性肽，然后将其通过AutoDock 4.2.6软件进行分子对接，筛选出最具潜力的降胆固醇肽。
[0024]作为本专利技术的进一步改进，步骤(1)中90℃搅拌15分钟使大豆分离蛋白溶解；步骤(2)中的温度为45℃，搅拌时间为2h。
[0025]作为本专利技术的进一步改进，步骤(3)中灭酶温度为90℃，灭酶时间为15分钟；步骤(4)中离心转速为5000
‑
10000r/min，离心时间为20min。
[0026]本专利技术具有如下有益效果：本专利技术所述的降胆固醇肽为大豆蛋白经过纳豆激酶水解后筛选得到。水解得到的大豆蛋白水解液具有抑制胆固醇酯酶的活性，水解液进行测序鉴定出2359种多肽，所有肽段的
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10lgP值均大于20，可信度高。符合Peptide Ranker>0.9的肽段有23条，将23条肽段与胆固醇酯酶分子对接后，分子对接结果得到大豆肽
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FFFPF的“binding_energy”值在
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1.2Kcal以下，说明此肽段与胆固醇酯酶分子对接效果最好，且经过动物实验验证具有显著的降血脂的功能。其余生物活性评分>0.9的22种多肽，可能具有其他的生物活性功能，需进行后续研究。本次筛选出的降胆固醇多肽可开发成降血脂药物，活性成分添加到功能食品和保健食品中，在医药和食品行业具有良好的市场前景。
附图说明
[0027]为了更清楚地说明本专利技术实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本
专利技术的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动性的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
[0028]图1为多肽FFFPF与胆固醇酯酶分子相互作用的模式图。
具体实施方式
[0029]下面将对本专利技术实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本专利技术一部分实施例，而不是全部的本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.大豆蛋白水解液中具有降胆固醇功能多肽，其特征在于，所述多肽来源于与胆固醇酯酶分子对接“binding_energy”值＜
‑
1.2Kcal的肽段，所述多肽与胆固醇酯酶进行分子对接的肽段来源于Peptide Ranker生物活性打分>0.9的多肽。2.根据权利要求1所述大豆蛋白水解液中具有降胆固醇功能多肽，所述多肽的氨基酸序列为FFFPF、DFPALWLL、GNWGPL、NWGPL、NNPFKF、LFLPHF、GQYPYGGF、NNNPFKFL、NNPFSF、WNPNNKPF、NNNPFKF、GSGIFGM、QQDEDEDEDEDDEDEQIPSHPPRRPSHGK、DEDEDEDEDDEDEQIPSHPPRRPSHGK、QDEDEDEDEDDEDEQIPSHPPRRPSHGK、LRPPF、FSEYPPLGRF、FEFLPPFIRR、NEPWWPKL、VFDPF、SLDVWDPFEGFPF、HFGSF、FFYNPK中的至少一种，优选地，为FFFPF。3.一种如权利要求1或2所述大豆蛋白水解液中具有降胆固醇功能多肽在制备降低高血脂药物中的应用。4.一种如权利要求1或2所述大豆蛋白水解液中具有降胆固醇功能多肽在制备适用于高血脂人群的食品或者保健品中的应用。5.一种如权利要求1或2所述大豆蛋白水解液中具有降胆固醇功能多肽的制备方法，其特征在于，具体包括以下步骤：(1)制备蛋白水解物：使用蛋白酶对大豆蛋白进行水解得到蛋白水解物；(2)胆固醇酯酶抑制活性测定：对胆固醇酯酶抑制活性测定；(3)大豆蛋白水解物序列鉴定：将大豆蛋白水解物进行LC
‑
MS/MS测定，分析其多肽组成；(4)降胆固醇肽的筛...

【专利技术属性】
技术研发人员：何瑜林，董艳山，王春，高雅，廖园园，范宇鹏，王业富，
申请(专利权)人：武汉真福创新生物制药有限公司，
类型：发明
国别省市：