一种萎缩芽孢杆菌及其应用制造技术

本发明专利技术涉及一种萎缩芽孢杆菌及其应用。所述萎缩芽孢杆菌保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC No.27015，用于防治菌尖孢镰刀菌(Fusarium oxysporum)和/或菌核盘菌(Sclerotinia sclerotiorum)。所述萎缩芽孢杆菌在有机肥中具有良好的定殖能力。具有良好的定殖能力。具有良好的定殖能力。

【技术实现步骤摘要】
一种萎缩芽孢杆菌及其应用


[0001]本专利技术涉及生物防治领域，特别涉及一种用于防治真菌病害的萎缩芽孢杆菌。

技术介绍

[0002]真菌病害严重危及全球粮食安全，植物病害中有70％至80％是病原真菌的侵染所导致，造成大量粮食作物减产，甚至一些真菌类病害还导致了严重的动植物死亡和灭绝。例如菌核菌能够侵害400余种植物，包括十字花科、豆科、茄科、菊科和撤形花科等。化学防治是目前防治真菌病害最有效的措施，我国每年化学农药的使用量为5060万吨，对环境和生态带来了严重的污染和危害，在一些国家和地区化学杀菌剂已经被限制使用。而生物防治因其见效快、杀菌谱广、环境友好和不易产生抗性等特点，具有广阔的应用前景。
[0003]用于生物防治的微生物种类主要有细菌、真菌、放线菌和病毒。然而，近年来，随着生防细菌的发掘和研究，寻找新的具有病原真菌拮抗作用的细菌难度越来越大，但是筛选新的具有病原真菌拮抗作用的细菌仍然具有重要的科学价值的实用价值。
[0004]此外，在实际使用中，生防微生物对病原菌的防治效果除受自身的抑菌活性的影响，还会受定殖情况的影响，也就是说，其定殖情况会直接影响其实际的应用价值。

技术实现思路

[0005]本专利技术之一提供了一种萎缩芽孢杆菌(Bacillus atrophaeus)，其保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC No.27015。
[0006]本专利技术之二提供了一种组合物，其包括如本专利技术之一所述的萎缩芽孢杆菌。
[0007]在一个具体实施方式中，所述组合物中还包括有机肥。
[0008]在一个具体实施方式中，所述有机肥为牛粪与蘑菇菌渣混合后发酵的有机肥。
[0009]在一个具体实施方式中，所述牛粪与所述蘑菇菌渣的质量比为1：10至10：1。
[0010]本专利技术之三提供了根据本专利技术之一所述的萎缩芽孢杆菌或本专利技术之二中任意一项所述的组合物在用于防治菌尖孢镰刀菌(Fusarium oxysporum)和/或菌核盘菌(Sclerotinia sclerotiorum)中的应用。
[0011]在一个具体实施方式中，根据本专利技术之一所述的萎缩芽孢杆菌或本专利技术之二所述的组合物用于防治菌尖孢镰刀菌(Fusarium oxysporum)引起的花生果腐病和/或菌核盘菌(Sclerotinia sclerotiorum)引起的向日葵菌核病。
[0012]本专利技术的有益效果：
[0013]本专利技术的萎缩芽孢杆菌IPPB013对菌尖孢镰刀菌(Fusarium oxysporum)和/或菌核盘菌(Sclerotinia sclerotiorum)均有较好的抑菌效果，并且，其定殖能力，特别是在发酵的有机肥中的定殖能力远远超出其他芽孢杆菌菌株，因而较其他芽孢杆菌更有利于病虫害的防治，特别是更有利于防治菌尖孢镰刀菌(Fusarium oxysporum)和/或菌核盘菌(Sclerotinia sclerotiorum)。
附图说明
[0014]图1显示了IPPB013分矢量系统发育树。
[0015]菌种保藏
[0016]本专利技术筛选的IPPB013被定名为萎缩芽孢杆菌(Bacillus atrophaeus)，该菌株保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC No.27015，保藏日期为2023年04月04日，保藏地址为：北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所。其系统分类为萎缩芽孢杆菌(Bacillus atrophaeus)。
具体实施方式
[0017]以下通过优选的实施案例的形式对本专利技术的上述内容作进一步的详细说明，但其不构成对本专利技术的限制。
[0018]如无特别说明，本专利技术的实施例中的试剂均可通过商业途径购买。
[0019]实施例1
[0020]菌株的分离
[0021]1)称取1g腐熟有机质至灭菌过的50ml离心管(康宁430828塑料)中，加入15mL的无菌水，盖上离心管盖后用40KHz的超声波清洗机震荡10分钟，得到有机质浸泡液。
[0022]2)在酒精灯下准备经高压灭菌锅115℃30min灭菌的5个1.5mL的离心管，放在离心管架上，编号10
‑1、10
‑2、10
‑3、10
‑4、10
‑5，用1mL的移液枪吸取900μL的无菌水至5个离心管中。
[0023]3)用100μL的移液枪吸取有机质浸泡液100μL至编号10
‑1的1.5mL的离心管中，用枪头吸吹三次混均；用100μL的移液枪从编号10
‑
1 1.5mL离心管中吸取100μL稀释液至编号10
‑
2 1.5mL的离心管中，枪头吸吹三次混均；以此类推，直到编号10
‑
5 1.5mL的离心管的稀释液混匀。
[0024]4)用100μL的移液枪从编号10
‑1离心管中吸取100μL稀释液至LB固体培养基中，3次重复；用100μL的移液枪从编号10
‑2离心管中吸取100μL稀释液至LB固体培养基中，3次重复；依次类推，直至用100μL的移液枪从编号10
‑5离心管中吸取100μL稀释液至LB固体培养基中。
[0025]5)用一次性涂布器(L
‑
Shaped Cell Spreader CSP
‑
012
‑
014)从低浓度至高浓度涂布加有稀释液的LB固体培养基平板，即从10
‑5至10
‑1依次涂板；涂板完成后放入30℃的恒温培养箱中培养至长出单菌落。
[0026]6)挑取单菌落进行纯培养，获得1300株，编号并保存以用作后续抗菌活性的筛选的候选菌株。
[0027]实施例2
[0028]分离菌株的活性筛选
[0029]1.对菌尖孢镰刀菌的活性
[0030]花生果腐病致病菌尖孢镰刀菌(Fusarium oxysporum)保藏于中国农业科学院植物保护研究所。
[0031]将花生果腐病致病菌尖孢镰刀菌(Fusarium oxysporum)接种于PDA培养基上，30℃恒温培养10d左右进行活化，取活化后直径约为7mm的菌饼，放置于90mm新鲜PDA固体培养基平板中央，然后在平板对称位置距离菌饼20mm处放置四个直径6mm的无菌滤纸片，向无菌滤纸片滴加5微升候选菌株的菌液，置于28℃培养箱中培养，每处理设3次重复。以仅接种尖
孢镰刀菌而不接种候选菌株的样品作为对照。7d后测量尖孢镰刀菌的菌落半径并计算抑菌率。
[0032]候选菌株的抑菌率(％)＝(对照尖孢镰刀菌的菌落半径
‑
候选菌株对峙培养尖孢镰刀菌的菌落半径)/对照尖孢镰刀菌的菌落半径
×
100。
[0033]从中筛选到1株抑菌活性最好的菌株，为IPPB013，其对菌尖孢镰刀菌的抑菌率为25.8％。本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种萎缩芽孢杆菌(Bacillus atrophaeus)，其保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC No.27015。2.一种组合物，其包括如权利要求1所述的萎缩芽孢杆菌。3.根据权利要求2所述的组合物，其特征在于，所述组合物中还包括有机肥。4.根据权利要求3所述的组合物，其特征在于，所述有机肥为牛粪与蘑菇菌渣混合后发酵的有机肥。5.根据权利要求4所述的组合物，其特征在于，所述牛粪与所述蘑菇菌渣的质量比为1：10至10：1。6.根据权利要求...

【专利技术属性】
技术研发人员：束长龙，耿丽丽，王泽宇，彭琦，张杰，黄鹍，黄鹏，
申请(专利权)人：中国农业科学院植物保护研究所，
类型：发明
国别省市：