全新流感病毒疫苗治疗肿瘤的方法及其应用技术

本发明专利技术涉及一种全新流感病毒疫苗治疗肿瘤的方法及其应用，将流感病毒H1N1血凝素糖蛋白引入治疗实体肿瘤，将流感病毒血凝素HA基因与C3d功能序列连接，构建成C3d

【技术实现步骤摘要】
全新流感病毒疫苗治疗肿瘤的方法及其应用


[0001]本专利技术涉及肿瘤治疗
，具体是指一种全新流感病毒疫苗治疗肿瘤的方法及其应用。

技术介绍

[0002]全球每年新增约2000万癌症患者，死亡约1000万人。截至目前，虽然不断有抗癌新药或新方法问市，如单克隆抗体，小分子，CART免疫细胞治疗技术和溶瘤病毒等，然而，治疗癌症，尤其是治疗实体瘤仍未取得满意的效果。癌症仍然严重威胁人类的健康，研发抗癌新药及寻找治疗癌症的新方法仍是科学家面临的挑战。
[0003]由于实体瘤微环境的特殊性，使得免疫细胞进入实体瘤的数量有限。免疫检测点的发现，使科学家认识到了某些癌细胞上的PD
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L1与T细胞表面PD
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1结合，使T细胞“致盲”。CD47与巨噬细胞表面上的蛋白SIRPα相结合，抑制巨噬细胞杀死癌细胞的能力，被广泛认为是一种“不要吃我”的信号。这些细胞进入实体瘤后不仅没有消灭癌细胞，反而成为了实体瘤的组成成分。肿瘤微环境的抑制作用及免疫细胞无法有效浸润使免疫细胞，包括CART细胞治疗实体瘤仍然面临挑战。抗原呈递细胞(Antigen
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presentingcells,APC)是指能够摄取、加工处理抗原，并将处理过的抗原呈递给T细胞的一类免疫细胞。APC主要包括树突状细胞、单核吞噬细胞、B细胞及朗格汉斯细胞等，其中树突状细胞的抗原呈递能力最强。目前已有越来越多的科学家将注意力集中在肿瘤特异性抗原上，以期采用肿瘤特异性抗原作为肿瘤疫苗治疗肿瘤。然而，缺乏肿瘤特异性抗原及其免疫原性低使得肿瘤疫苗治疗实体瘤同样面临挑战。面对治疗实体瘤的难题，促使专利技术人思考通过引入病毒糖蛋白在癌细胞表面人工制造特异性抗原治疗实体瘤的策略，从而实现治疗实体瘤的目的。专利技术人还认为，抗体在治疗实体瘤中可能是不可或缺的，因为抗体在抗体依赖细胞介导的细胞毒性作用、补体依赖的细胞毒性作用、改变癌组织的信号转导和免疫调节中起关键性作用。当抗体与癌细胞结合后，会使癌细胞更容易被人体免疫系统识别，从而引导免疫系统杀死癌细胞。
[0004]目前，全球已有四款溶瘤病毒药品上市，如溶瘤腺病毒H101治疗鼻咽癌，溶瘤疱症病毒I型Imlygic(T
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Vec)治疗黑色素瘤和Delytact治疗脑胶质瘤，这些溶瘤病毒产品在临床上取得了一定的治疗效果，但仍有很大的提高空间。各国科学家正在采用不同的技术路线构建新的溶瘤病毒，以期进一步提高溶瘤病毒治疗实体瘤的效果。虽然溶瘤病毒可以通过诱导趋化因子使“冷”肿瘤变成“热”肿瘤，从而激发局部和系统的抗肿瘤免疫反应，然而，不同的溶瘤病毒因各自的特点在溶瘤中表现各异，如腺病毒没有囊膜糖蛋白，不以出芽的方式释放病毒。腺病毒E3A(gp19K)糖蛋白主要与细胞内质网上的MHC
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1结合。腺病毒具有嗜上皮细胞性，而人类的大多数肿瘤来源于上皮细胞，因此，将腺病毒改造成溶瘤病毒具有广谱治疗肿瘤的潜力。

技术实现思路

[0005]本专利技术要解决上述技术问题，提供一种全新流感病毒疫苗治疗肿瘤的方法及其应
用。
[0006]为解决上述技术问题，本专利技术提供的技术方案为：
[0007]一种全新的流感病毒疫苗在肿瘤治疗中的应用，包括流感病毒血凝素糖蛋白基因和流感病毒，所述的流感病毒血凝素糖蛋白基因包括HA1和HA2和跨膜区,与C3d或辅助蛋白及多肽核苷酸连接，中间用2A或Linker连接，末产生HA融合蛋白；
[0008]所述的流感病毒为WHO推荐的疫苗毒株NYMCX
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179A血凝素糖蛋白作为抗原，包括所有流感病毒亚型的HA或神经氨酸酶、麻疹病毒血凝素、冠状病毒表面糖蛋白和其他可用于疫苗的病毒糖蛋白。
[0009]优选地，所述的流感病毒血凝素糖蛋白基因限制性人类TERT启动子控制HA融合蛋白基因，以实现HA融合蛋白在肿瘤中选择性表达并锚定在肿瘤细胞表面。
[0010]一种人流感病毒HA基因，CMV启动子控制HA融合蛋白基因，以实现HA融合蛋白的过表达并锚定在肿瘤细胞表面。
[0011]优选地，限制性仓鼠TERT启动子控制E1A基因，以实现溶瘤腺病毒在肿瘤中选择性复制及流感病毒HA糖蛋白局限在肿瘤中表达并锚定在肿瘤细胞表面。
[0012]一种全新的流感病毒疫苗治疗肿瘤的方法，包括以下步骤：利用机体内已存在抗HA抗体和记忆免疫细胞或在治疗前预先给机体接种HA蛋白疫苗，待机体产生抗HA抗体后，注射携带HA基因的重组溶瘤病毒，以实现免疫系统对癌细胞准确的识别和杀死及清除肿瘤细胞。
[0013]优选地，可直接向肿瘤中注射携带HA基因的重组溶瘤病毒。
[0014]采用以上方案后，本专利技术具有如下优点：
[0015]上述概述仅仅是为了说明书的目的，并不意图以任何方式进行限制。除上述描述的示意性的方面、实施方式和特征之外，通过参考附图和以下的详细描述，本专利技术进一步的方面、实施方式和特征将会是容易明白的。
附图说明
[0016]为了更清楚地说明本申请实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本申请的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
[0017]附图说明
[0018]图1为重组腺病毒载体Ad
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JYT
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hTERT
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HA、Ad
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JYT
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CMV
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HA、Ad
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JYT
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hamsterTERT
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E1A构建示意图。
[0019]图2为Marker(1)。重组溶瘤腺病毒Ad
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JYT
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hamsterTERT
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E1A(2)，Ad
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JYT
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CMV
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HA(3)，Ad
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JYT
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hTERT
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HA(4)分别感染DDT细胞，48小时收集细胞，Westernblot检测结果。
[0020]图3为CsCl超速离心纯化病毒后，Westernblot检测结果，(1)Ad
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JYT
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hamsterTERT
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E1A，(2)Ad
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JYT
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CMV
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HA，(3)Ad
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JYT
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hTERT
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HA和(4)血凝素(HA)纯化糖蛋白。
[0021]图4为重组溶瘤腺病毒Ad
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JYT
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CMV
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HA(A、B)和Ad
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JYT
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hTERT...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种全新的流感病毒疫苗在肿瘤治疗中的应用，其特征在于：包括流感病毒血凝素糖蛋白基因和流感病毒，所述的流感病毒血凝素糖蛋白基因包括HA1和HA2和跨膜区,与C3d或辅助蛋白及多肽核苷酸连接，中间用2A或Linker连接，末产生HA融合蛋白；所述的流感病毒为WHO推荐的疫苗毒株NYMCX
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179A血凝素糖蛋白作为抗原，包括所有流感病毒亚型的HA或神经氨酸酶、麻疹病毒血凝素、冠状病毒表面糖蛋白和其他可用于疫苗的病毒糖蛋白。2.根据权利要求1所述的全新的流感病毒疫苗在肿瘤治疗中的应用，其特征在于：所述的流感病毒血凝素糖蛋白基因限制性人类TERT启动子控制HA融合蛋白基因，以实现HA融合蛋白在肿瘤中选择性表达并锚定在肿瘤细胞表面。3.一种人流感病毒HA...

【专利技术属性】
技术研发人员：谭业平，邹海望，郑惠，周华山，
申请(专利权)人：武汉金益肽生物有限公司，
类型：发明
国别省市：