组合物及其用途制造技术

本公开总体上涉及用于治疗猫科动物受试者的组合物和方法。提供了腺相关病毒载体，其包括含有编码猫科动物红细胞生成素(EPO)的核酸序列的核酸分子。酸序列的核酸分子。酸序列的核酸分子。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】组合物及其用途


[0001]本公开总体上涉及用于治疗猫科动物受试者，特别是患有贫血症或有患贫血症风险的猫科动物受试者的组合物和方法。
[0002]关于序列表的声明
[0003]与本申请相关的序列表以文本格式代替纸质副本提供，并据此通过引用并入说明书。包含此序列表的文本文件的名称为SCTB
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008
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01WO_ST25。该文本文件为14Kb，创建于2021年9月24日，并以电子形式随同提交。
技术背景
[0004]红细胞生成素(EPO)，也称为造血素(haematopoietin)或促血细胞生成素(haemopoietin)，是响应细胞缺氧而主要在肾的肾小管周细胞内产生的激素。EPO也在肝脏中产生，主要是在胎儿和围产期期间产生，但在成人期主要由肾脏合成。其作用于骨髓，刺激红细胞生成，以补偿正常的红细胞更新(红细胞稳态)。红细胞生成素还控制成熟红细胞的凋亡(程序性细胞死亡)。
[0005]肾病通常会减少EPO的产生。在人中，重组人促红细胞生成素(Epoetin)的开发使慢性肾病中贫血的治疗发生了革命性的变化。当贫血得到纠正时，许多归因于慢性肾病的症状(诸如疲劳、昏睡、嗜睡和气短，所述症状都对生活质量产生不利影响)得到解决或显著改善。EPO还用于治疗由其它疾病(诸如骨髓增生异常)和化疗引起的贫血疾患。然而，存在与EPO疗法相关的风险，包括心肌梗死、中风和静脉血栓栓塞。当EPO治疗导致红细胞稳态紊乱或红细胞增多症即血红蛋白水平过高(人体内通常高于11
‑<br/>12g/dL)时，这些风险会增加。
[0006]贫血，包括由慢性肾病引起的贫血，也影响动物，包括猫科动物。有超过200万只猫患有慢性肾病(CKD)，注意到患有CKD相关肾衰竭的陪伴动物诸如猫和狗通常呈现与我们在人CKD中看到的相似的病理生理学特征，包括至少部分归因于EPO水平不足的贫血。对患有贫血的陪伴动物的现有治疗包括施用人重组EPO。然而，由于动物通常会对重组EPO产生免疫反应，因此长期治疗通常是无效的。因此，仍然迫切需要改进的治疗方案，用于在有此需要的受试者中、特别是猫科动物中的EPO长期递送。

技术实现思路

[0007]在本文公开的一个方面，提供了一种用于促进患有贫血的猫科动物受试者的红细胞稳态的方法，该方法包括向有此需要的受试者施用包含重组腺相关病毒(rAAV)的组合物，所述重组腺相关病毒包含AAV衣壳，其中所述AAV衣壳包含编码猫科动物红细胞生成素(EPO)的核酸序列和指导EPO在受试者中的表达的表达控制序列，其中以有效促进猫科动物受试者的红细胞稳态的剂量向受试者施用所述组合物，其中所述剂量为约2
×
109个基因组拷贝/kg体重(gc/kg)或更低。在一个实施方案中，剂量为约1
×
109个基因组拷贝/kg体重(gc/kg)或更低。
[0008]本公开还扩展至包含AAV衣壳的重组腺相关病毒(rAAV)在制备用于在患有贫血的
猫科动物受试者中促进红细胞稳态的药物中的用途，其中AAV衣壳包含编码猫科动物红细胞生成素(EPO)的核酸序列和指导EPO在受试者中的表达的表达控制序列，其中将rAAV配制成以有效促进猫科动物受试者的红细胞稳态的剂量施用，其中所述剂量为约2
×
109个基因组拷贝/kg体重(gc/kg)或更低。在一个实施方案中，剂量为约1
×
109个基因组拷贝/kg体重(gc/kg)或更低。
[0009]在本文公开的另一方面，提供了用于在患有贫血的猫科动物受试者中促进红细胞稳态的药物组合物，其中所述组合物包含重组腺相关病毒(rAAV)，所述重组腺相关病毒包含AAV衣壳，其中所述AAV衣壳包含编码猫科动物红细胞生成素(EPO)的核酸序列和指导EPO在受试者中的表达的表达控制序列，其中将所述rAAV配制成以有效促进猫科动物受试者中的红细胞稳态的剂量施用，其中所述剂量为约2
×
109个基因组拷贝/kg体重(gc/kg)或更低。在一个实施方案中，剂量为约1
×
109个基因组拷贝/kg体重(gc/kg)或更低。
[0010]本文所述的重组载体可用于治疗慢性肾病和以循环红细胞数量不足为特征的其它疾患(即贫血)的方案。
[0011]在本文公开的另一方面，提供了包含本文所述的重组腺相关病毒(rAAV)的单位剂型，其中该剂型以约1.0
×
109至约5.0
×
109个基因组拷贝的量包含所述rAAV。
[0012]本专利技术还扩展至包含本文所述的组合物或剂型的药盒。
[0013]根据本专利技术的以下详细说明，本专利技术的其它方面和有利方面将显而易见。
附图说明
[0014]图1显示了表达猫科动物EPO的AAV1(AAV1
‑
EPO)对正常实验室猫的血细胞比容(HCT)的影响。以1.9
×
108、6.0
×
108、1.9
×
109和6.0
×
109个基因拷贝/kg体重(gc/kg；剂量组n＝6)施用AAV1
‑
EPO。对照动物接受磷酸盐缓冲盐水(PBS)作为安慰剂。任何一只猫的HCT的最大增加是15点(％)。在正常健康的猫中，剂量1.9
×
109和6.0
×
109gc/kg显示了群体平均HCT的显著且持续的增加。与安慰剂相比，1.9
×
108gc/kg和6.0
×
108gc/kg对平均HCT没有任何显著影响。Y轴
–
血细胞比容(HCT％)；X轴
‑
AAV1
‑
EPO施用后的天数。
[0015]图2显示了3.0
×
109gc/kg的AAV1
‑
EPO对患有CKD相关贫血的三只猫的血细胞比容(HCT)的影响。Y轴
–
血细胞比容(HCT％)；X轴
‑
在第0天施用AAV1
‑
EPO后的天数。
[0016]图3显示了在以约2.0
×
108至约6.0
×
108gc/kg的剂量范围施用AAV1
‑
EPO后，CKD相关贫血猫中的红细胞稳态。接受AAV1
‑
EPO治疗的猫均不需要针对红细胞增多症进行治疗。Y轴
–
血细胞比容或红细胞压积(packed cell volume)(PCV％)。X轴
‑
在第0天(基线)施用AAV1
‑
EPO后的天数。*与基线相比的p&lt;0.05(配对T检验)；误差棒表示标准偏差；在指定的时间点分别是n＝15、15、14、13、10、9。
[0017]图4显示了猫科动物EPO的一个示例性氨基酸序列(SEQ ID NO:1)。前导序列带有本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种用于在患有贫血的猫科动物受试者中促进红细胞稳态的方法，所述方法包括向有此需要的受试者施用包含重组腺相关病毒(rAAV)的组合物，所述重组腺相关病毒包含AAV衣壳，其中所述AAV衣壳包含编码猫科动物红细胞生成素(EPO)的核酸序列和指导EPO在所述受试者中的表达的表达控制序列，其中所述组合物以有效促进所述猫科动物受试者中的红细胞稳态的剂量向所述受试者施用，其中所述剂量为约2
×
109个基因组拷贝/kg体重(gc/kg)或更低。2.根据权利要求1所述的方法，其中所述剂量为约1
×
109gc/kg或更低。3.根据权利要求1所述的方法，其中所述剂量为约1
×
108至2
×
109gc/kg。4.根据权利要求1所述的方法，其中所述剂量为约1
×
108至1
×
109gc/kg。5.根据权利要求1所述的方法，其中所述剂量为约2
×
108至1
×
109gc/kg。6.根据权利要求1所述的方法，其中所述剂量为约2
×
108至6
×
108gc/kg。7.根据权利要求1至6中任一项所述的方法，其中患有贫血的所述猫科动物受试者具有约28％或更少的红细胞压积(PCV)。8.根据权利要求7所述的方法，其中患有贫血的猫科动物受试者的PCV在约10％至约28％的范围内。9.根据权利要求7所述的方法，其中患有贫血的猫科动物受试者的PCV在约22％至约28％的范围内。10.根据权利要求7所述的方法，其中患有贫血的所述猫科动物受试者的PCV约为22.5％。11.根据权利要求1至10中任一项所述的方法，其中所述剂量有效地将所述猫科动物受试者的PCV增加到约30％至约55％的值到施用所述组合物后第70天。12.根据权利要求11所述的方法，其中所述剂量有效地将所述猫科动物受试者的PCV增加至约30％至约35％的值到施用所述组合物后第70天。13.根据权利要求11所述的方法，其中所述剂量有效地将所述猫科动物受试者的PCV增加至约33％至约35％的值到施用所述组合物后第70天。14.根据权利要求1至13中任一项所述的方法，其中所述剂量有效地将所述猫科动物受试者的PCV增加约5至约30个PCV％点的量到施用所述组合物后第70天。15.根据权利要求14所述的方法，其中所述剂量有效地将所述猫科动物受试者的PCV增加约10至约20个PCV％点的量到施用所述组合物后第70天。16.根据权利要求14所述的方法，其中所述剂量有效地将所述猫科动物受试者的PCV增加约15个PCV％点到施用所述组合物后第70天。17.根据权利要求1至16中任一项所述的方法，其中所述猫科动物受试者不需要治疗红细胞增多症。18.根据权利要求1至17中任一项所述的方法，其中以约1.0
×
109至约5.0
×
109个基因组拷贝的单位剂量肌内施用所述组合物。19.根据权利要求1至18中任一项所述的方法，其中所述方法包括向所述猫科动物受试者施用后续剂量的所述组合物。20.根据权利要求19所述的方法，其中在初次施用所述组合物后约第28天至约第56天，向所述猫科动物受试者施用所述后续剂量。
21.根据权利要求19所述的方法，其中在初次施用所述组合物后约第40天至约第45天，向所述猫科动物受试者施用所述后续剂量。22.根据权利要求1至21中任一项所述的方法，其中所述猫科动物EPO是全长猫科动物EPO蛋白。23.根据权利要求1至22中任一项所述的方法，其中所述核酸序列编码与异源前导序列组合的成熟猫科动物EPO蛋白。24.根据权利要求1至23中任一项所述的方法，其中所述猫科动物EPO序列包含SEQ ID NO:1的氨基酸序列或与其具有至少70％序列同一性的氨基酸序列。25.根据权利要求1至24中任一项所述的方法，其中编码所述猫科动物EPO的所述核酸序列包含SEQ ID NO:2的核酸序列或与其具有至少70％序列同一性的核酸序列。26.根据权利要求25所述的方法，其中所述核酸序列是经密码子优化的。27.根据权利要求1至26中任一项所述的方法，其中所述表达控制序列包含启动子。28.根据权利要求27所述的方法，其中所述启动子是CB7启动子。29.根据权利要求27所述的方法，其中所述启动子是TBG启动子。30.根据权利要求27所述的方法，其中所述表达控制序列包括组织特异性启动子。31.根据权利要求30所述的方法，其中所述组织特异性启动子是肾特异性启动子或肌肉特异性启动子。32.根据权利要求30所述的方法，其中所述组织特异性启动子选自Nkcc2启动子、尿调节蛋白启动子、Ksp
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钙粘蛋白启动子和THP基因启动子。33.根据权利要求1至32中任一项所述的方法，其中所述AAV衣壳还包含内含子、Kozak序列、polyA和转录后调控元件中的一者或多者。34.根据权利要求1至33中任一项所述的方法，其中所述AAV衣壳选自AAV1、AAV5、AAV6、AAV8、AAVrh64R1、AAV9、AAVrh91、AAVhu.37、AAV3b、AAV3b.AR2.12和AAVrh10。35.根据权利要求34所述的方法，其中所述AAV衣壳是...

【专利技术属性】
技术研发人员：A，
申请(专利权)人：斯克奥特比奥股份有限公司，
类型：发明
国别省市：