炭疽杆菌孢子标志物荧光-紫外双模式检测方法技术

本发明专利技术涉及分析化学技术领域，具体提供一种荧光

【技术实现步骤摘要】
炭疽杆菌孢子标志物荧光
‑
紫外双模式检测方法


[0001]本专利技术涉及分析化学
，尤其涉及一种炭疽杆菌孢子标志物荧光
‑
紫外双模式检测方法。

技术介绍

[0002]2,6
‑
吡啶二羧酸(2,6
‑
pyridinedicarboxylic acid,DPA)占炭疽杆菌孢子干重的5％
‑
15％，是炭疽杆菌孢子的标志物。炭疽杆菌孢子是由活性炭疽杆菌在高温、冷冻、紫外线照射、干燥、强酸以及强碱等极端环境中转化而来的。炭疽杆菌孢子在极端环境中有很强的生存能力，在适当的条件下转化为活性炭疽杆菌，同时释放出DPA。人类如果接触被炭疽杆菌孢子污染的牲畜、水、空气和土壤，就会感染炭疽病。例如，人如果吸入超过一万个炭疽杆菌孢子，并且在24
‑
36小时内没有得到有效的治疗就会死亡。由于炭疽杆菌孢子的巨大危害，检测其标记物DPA对其早期识别和治疗十分重要。
[0003]目前检测DPA的方法有高效液相色谱法、拉曼光谱法、电化学法、荧光法和紫外法等。其中，荧光和紫外检测法因其快速、简便、直观、低成本等优点而受到广泛关注。无论是荧光法还是紫外法，一般都是基于DPA与金属离子(Ca
2+
、Zn
2+
、Cu
2+
、Eu
3+
等)的配位作用而实现检测的。例如，Lei Jia等人合成了荧光素和Eu
3+
的复合材料用于DPA的荧光检测，荧光素的绿色荧光不受DPA的影响，而DPA与Eu
3+
的配位敏化了Eu
3+
的红色荧光(J.Hazard.Mater.,2021,402,123776)。又如，Mirza Muhammad等人开发了一种基于谷胱甘肽功能化金纳米颗粒和钙离子的紫外法，用于DPA的检测，Ca
2+
与谷胱甘肽的配位作用使金纳米粒子聚集，颜色由红色变为紫色，而DPA也可与Ca
2+
配位，使得金纳米粒子解聚集。由上可知，已报道的方法通常是单模式的荧光法或紫外法，单模式检测的缺点在于易受环境和仪器波动引起的干扰，导致准确度不足；相比之下，荧光
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紫外双模检测方法存在两个可用的读出信号，可实现不同检测模式之间的校准、验证，保证检测的准确性，在实际应用中表现出更好的便利性。因此，DPA的荧光
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紫外双模式检测方法的开发引起了研究者的广泛关注。

技术实现思路

[0004]本专利技术为解决上述问题，而提供一种炭疽杆菌孢子标志物荧光
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紫外双模式检测探针及检测方法。
[0005]本专利技术第一目的是提供炭疽杆菌孢子标志物荧光
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紫外双模式检测方法，具体包括如下步骤：
[0006]S1、制备CdTe量子点分散液；
[0007]S2、将二甲酚橙加入水，制备1mM的二甲酚橙溶液；
[0008]S3、将所述CdTe量子点分散液与二甲酚橙溶液按1：3～5体积比加入缓冲溶液，混合，配制荧光模式检测探针；
[0009]S4、所述CdTe量子点分散液与二甲酚橙溶液按1：1～6体积比加入缓冲溶液，混合，配制紫外模式检测探针；
[0010]S5、取待测样品，加入步骤S3所述的荧光模式检测探针，在激发波长为286nm、发射波长为635nm下测定炭疽杆菌孢子标志物的浓度；
[0011]S6、取待测样品，加入步骤S4所述的紫外模式检测探针，室温下静置1
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3min，在紫外吸收波长434nm～578nm下，测定炭疽杆菌孢子标志物的浓度。
[0012]优选地，步骤S3中CdTe量子点分散液与二甲酚橙溶液体积比为1：3，步骤S4中CdTe量子点分散液与二甲酚橙溶液体积比为1：1。
[0013]优选地，步骤S1中CdTe量子点分散液的制备方法，包括：
[0014]S11、在室温下，将0.2～0.3g二水柠檬酸钠、0.1～0.2g二水乙酸镉和50～60μL 3
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巯基丙酸溶解在100mL水中，在搅拌条件下用1M氢氧化钠的水溶液将pH值调节至10～11；
[0015]S12、加入0.02～0.03g亚碲酸钠和0.05～0.06g硼氢化钠，搅拌8～12min，在95～100℃下回流8.5～9.5小时，冷却至室温；
[0016]S13、置于3500Da透析袋，在水中透析20～30小时，得到CdTe量子点分散液。
[0017]优选地，缓冲溶液为10mM、pH6.0的HEPES缓冲溶液。
[0018]本专利技术第二目的是提供荧光
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紫外双模式检测探针，包括：荧光模式检测探针和紫外模式检测探针，所述探针包括CdTe量子点和二甲酚橙。
[0019]优选地，CdTe量子点为CdTe量子点分散液，所述二甲酚橙为浓度1mM的二甲酚橙溶液。
[0020]优选地，荧光模式检测探针是由所述CdTe量子点分散液与二甲酚橙溶液按1：3～5体积比加入缓冲溶液，混合配制而成；所述紫外模式检测探针由所述CdTe量子点分散液与二甲酚橙溶液按1：1～6体积比加入缓冲溶液，混合配制而成。
[0021]优选地，荧光模式检测探针中CdTe量子点分散液与二甲酚橙溶液的体积比为1：3；紫外模式检测探针中CdTe量子点分散液与二甲酚橙溶液的体积比为1：1。
[0022]优选地，CdTe量子点分散液的制备方法，包括：
[0023]S11、在室温下，将0.2～0.3g二水柠檬酸钠、0.1～0.2g二水乙酸镉和50～60μL 3
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巯基丙酸溶解在100mL水中，在搅拌条件下用1M氢氧化钠的水溶液将pH值调节至10～11；
[0024]S12、加入0.02～0.03g亚碲酸钠和0.05～0.06g硼氢化钠，搅拌8～12min，在95～100℃下回流8.5～9.5小时，冷却至室温；
[0025]S13、置于3500Da透析袋，在水中透析20～30小时，得到CdTe量子点分散液。
[0026]本专利技术第三目的是提供荧光
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紫外双模式检测探针在检测炭疽杆菌孢子标志物方面的应用。
[0027]优选地，炭疽杆菌孢子标志物为2,6
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吡啶二羧酸。
[0028]本专利技术有益效果：
[0029]本专利技术基于二甲酚橙功能化CdTe量子点的炭疽杆菌孢子标志物的探针，通过改变CdTe量子点和二甲酚橙的比例可以实现荧光和紫外两种检测模式的切换；在荧光检测模式下，加入炭疽杆菌孢子标志物后，635nm处的发射峰增强；在紫外检测模式下，加入炭疽杆菌孢子标志物后，434nm处的吸收峰增强、578nm处的吸收峰减弱。探针可通过荧光和紫外两种模式检测炭疽杆菌孢子标志物，在实际应用中更加便利，且两种检测模式的结果可相互印证，具有更高的准确性。
附图说明
[0030本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.炭疽杆菌孢子标志物荧光
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紫外双模式检测方法，其特征在于：具体包括如下步骤：S1、制备CdTe量子点分散液；S2、将二甲酚橙加入水，制备1mM的二甲酚橙溶液；S3、将所述CdTe量子点分散液与二甲酚橙溶液按1：3～5体积比加入缓冲溶液，混合，配制荧光模式检测探针；S4、所述CdTe量子点分散液与二甲酚橙溶液按1：1～6体积比加入缓冲溶液，混合，配制紫外模式检测探针；S5、取待测样品，加入步骤S3所述的荧光模式检测探针，在激发波长为286nm、发射波长为635nm下测定炭疽杆菌孢子标志物的浓度；S6、取待测样品，加入步骤S4所述的紫外模式检测探针，室温下静置1
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3min，在紫外吸收波长434nm～578nm下，测定炭疽杆菌孢子标志物的浓度。2.根据权利要求1所述的炭疽杆菌孢子标志物荧光
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紫外双模式检测方法，其特征在于：所述步骤S3中CdTe量子点分散液与二甲酚橙溶液体积比为1：3，所述步骤S4中CdTe量子点分散液与二甲酚橙溶液体积比为1：1。3.根据权利要求2所述的炭疽杆菌孢子标志物荧光
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紫外双模式检测方法，其特征在于：所述步骤S1中CdTe量子点分散液的制备方法，包括：S11、在室温下，将0.2～0.3g二水柠檬酸钠、0.1～0.2g二水乙酸镉和50～60μL 3
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巯基丙酸溶解在100mL水中，在搅拌条件下用1M氢氧化钠的水溶液将pH值调节至10～11；S12、加入0.02～0.03g亚碲酸钠和0.05～0.06g硼氢化钠，搅拌8～12min，在95～100℃下回流8.5～9.5小时，冷却至室温；S13、置于3500Da透析袋，在水中透析20～30小时，得到CdTe量子点分散液。4.根据权利要求3所述的炭疽杆菌孢子标志物荧光
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紫外双模式检测方法，其特征在于：所述缓冲溶液为10mM、pH6.0的HEPES缓冲溶液。5.荧光

【专利技术属性】
技术研发人员：李慧慧，曹亚甜，潘勤鹤，
申请(专利权)人：海南大学三亚研究院，
类型：发明
国别省市：