本申请涉及生物防治的技术领域，具体公开了一种噬菌体及其应用、引物序列和微生态制剂。该噬菌体已于2023年3月23日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO：M 2023392。分类命名为：Xanthomonas citri Phage 10KY502B。该噬菌体为有尾噬菌体目（Caudoviricetes）的噬菌体新种。该噬菌体宿主谱广，对橘溃疡病菌具有较高的裂解能力，能裂解柑橘黄单胞菌41株，野油菜黄单胞菌10株、水稻黄单胞菌8株，在橘溃疡病菌的防治中具有良好的应用潜力和广阔的应用前景。该微生态制剂可用于防治柑橘溃疡病菌等病害。可用于防治柑橘溃疡病菌等病害。
【技术实现步骤摘要】
一种噬菌体及其应用、引物序列和微生态制剂
[0001]本申请涉及生物防治的
，更具体地说，涉及一种噬菌体及其应用、引物序列和微生态制剂。
技术介绍
[0002]柑橘溃疡病是柑橘种植过程中常见的病害之一，该病症主要危害柑橘的叶片、枝梢和果实。柑橘黄单胞菌(Xanthomonas citri)是引起柑橘溃疡病的主要病原菌。柑橘黄单胞菌可在果树的叶片、病枝和果实上越冬，并通过皮孔、气孔和伤口等部位侵染植物。第二年春季能借风雨、昆虫、人工器具及枝叶接触传播，也可通过苗木、接穗、砧木和其他繁殖材料、病果、污染的包装物和运输工具等进行远距离传播。
[0003]在被柑橘溃疡病感染的初期，柑橘叶片的背面会形成1
‑
2mm的黄色油渍状斑点。随着感染面积的扩大，柑橘叶片的正面与背面会出现海绵状隆起。在感染后期，柑橘叶片上的发病部位表皮会逐渐木栓化，并开裂呈火山口状且周边有黄色晕圈。柑橘溃疡病在柑橘果皮表面形成的病斑与柑橘叶片上的病斑相似，但木栓化及火山口状开裂更为明显。在潮湿的热带及亚热带地区，柑橘溃疡病还会为害沃柑、葡萄柚、冰糖橙、砂糖橘、脐橙、红江橙、柠檬等。柑橘溃疡病发生时，不仅不利于果树的健壮生长，而且还会降低果实的产量和品质，极大地威胁着相关果业的发展。
[0004]目前，我国对柑橘溃疡病的防治主要依赖于农药、抗生素以及化学试剂。但农药、抗生素以及化学试剂对柑橘溃疡病的治疗效果并不好，同时还会造成农药、抗生素和化学物质的残留。而生物防治不仅环境友好，且不存在对人体健康带来潜在威胁的问题，因此，对柑橘溃疡病的生物防治引起了国内外广大学者的重视。
[0005]噬菌体具有特异裂解性与专一宿主性，可有选择性地杀灭某一特定的有害细菌菌株，且使用时不会对生态环境中的其他有益菌群造成伤害。噬菌体不仅具有指数式增殖的自我复制能力，而且只需极少量即可杀灭相应的细菌，从而达到预防或控制细菌性感染的目的。同时，噬菌体环境丰度高，自然界中普遍存在各类细菌相应的噬菌体，且噬菌体易于分离、纯化周期短，还能够在常温下保存，便于运输和应用。总而言之，噬菌体产品具有安全高效、特异性强、稳定性高、自我增殖快、筛选周期短以及不影响食品感官品质等优点，是较为安全的食品安全生物防控手段，发展前景非常广阔。
[0006]因此，噬菌体产品代替相关技术中对柑橘溃疡病的防治手段是形式所需，开发噬菌体产品具有重大意义。
技术实现思路
[0007]本申请提供一种噬菌体及其应用、引物序列和微生态制剂。该噬菌体宿主谱广，对橘溃疡病菌具有较高的裂解能力，能裂解柑橘黄单胞菌41株，野油菜黄单胞菌10株、水稻黄单胞菌8株，在橘溃疡病菌的防治中具有良好的应用潜力和广阔的应用前景。该微生态制剂可用于防治柑橘溃疡病菌等病害。因此，本申请能够更有效的解决农作物种植中出现的细
菌病害感染问题，具有良好的应用前景。
[0008]由于噬菌体对宿主有高度专一性，因此，噬菌谱窄的噬菌体一般不能解决在柑橘种植过程中出现的多种细菌病害感染问题。本申请所用的噬菌体宿主谱广，避免了常规的噬菌体产品的治理有害病菌谱窄、见效慢和稳定性差的缺点。与常规益生菌制剂相比，噬菌体复合制剂产品具有治理见效快、安全、无害的特点。
[0009]第一方面，本申请提供一种噬菌体，采用如下的技术方案：
[0010]一种噬菌体，该噬菌体已于2023年3月23日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO：M 2023392。分类命名为：柑橘溃疡病菌噬菌体10KY502B，Xanthomonas citri Phage 10KY502B。
[0011]该噬菌体为有尾噬菌体目(Caudoviricetes)的噬菌体新种，其全基因组已上传NCBI官网并获得GeneBank登录号OP617560.1。
[0012]所述噬菌体具有两个特异性基因片段。
[0013]具体地，所述噬菌体的特异性基因片段如SEQ ID NO 5所示的核苷酸序列。
[0014]具体地，所述噬菌体的特异性基因片段如SEQ ID NO 6所示的核苷酸序列。
[0015]优选地，所述噬菌体对柑橘溃疡病细菌的最佳感染复数为0.01。
[0016]优选地，所述噬菌体对柑橘溃疡病细菌具有较强的裂解能力。
[0017]优选地，所述噬菌体宿主谱更广，对黄单胞菌的裂解率达73.75％。
[0018]优选地，所述噬菌体具有较强的耐受性。
[0019]具体地，所述噬菌体具有耐高温性。所述噬菌体在80℃下处理12h依然能够存活。
[0020]具体地，所述噬菌体具有耐酸碱性。所述噬菌体在pH为4和10的条件下依然能够存活。
[0021]具体地，所述噬菌体具有紫外耐受性。所述噬菌体在紫外照射8h处理下能够存活。
[0022]第二方面，本申请提供了上述噬菌体在治理柑橘溃疡病方面的应用。
[0023]第三方面，本申请提供了上述噬菌体在制备用于治理柑橘溃疡病的制剂方面的应用。
[0024]进一步地，所述噬菌体还有两对特异性PCR扩增引物。
[0025]第四方面，本申请提供了上述噬菌体的第一对特异性PCR扩增引物，采用如下技术方案：
[0026]一种引物序列，所述引物序列为上述噬菌体的引物序列；所述引物序列的上游引物如SEQ ID NO 1所示的核苷酸序列，下游引物如SEQ ID NO 2所示的核苷酸序列。
[0027]第五方面，本申请提供了上述噬菌体的第二对特异性PCR扩增引物，采用如下技术方案：
[0028]一种引物序列，所述引物序列为上述噬菌体的引物序列；所述引物序列的上游引物如SEQ ID NO 3所示的核苷酸序列，下游引物如SEQ ID NO 4所示的核苷酸序列。
[0029]第六方面，本申请提供了一种微生态制剂，采用如下技术方案：
[0030]一种微生态制剂，所述微生态制剂中包括上述噬菌体。
[0031]优选地，所述微生态制剂中噬菌体的有效价为6.9
×
10
10
pfu/mL。
[0032]优选地，所述微生态制剂能够降低混合黄单胞菌引起的植株发病率，处理10d的植株的发病率降低至6.67％，植株的发病率下降了90％。
[0033]优选地，所述微生态制剂对柑橘黄单胞菌具有较好的防治效果和治疗效果，处理10d的植株的发病率降低至0，植株的发病率下降了92.50％。
[0034]综上所述，本申请具有以下有益效果：
[0035]本申请提供的噬菌体微生态制剂与常规噬菌体制剂相比，所用的噬菌体为可针对一系列有害病菌特异性的噬菌体，该噬菌体宿主谱广，对橘溃疡病菌具有较高的裂解能力。能裂解柑橘黄单胞菌41株、野油菜黄单胞菌10株、水稻黄单胞菌8株，在橘溃疡病菌的防治中具有良好的应用潜力和广阔的应用前景。
[0036]本申请以噬菌体复合制剂高密度生产技术为核心，研究和开发一种可治理柑橘溃疡病害的本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.一种噬菌体，其特征在于，所述噬菌体的保藏编号为CCTCC NO：M 2023392。2.根据权利要求1所述的噬菌体，其特征在于，所述噬菌体的特异性基因片段如SEQ ID NO 5所示的核苷酸序列。3.根据权利要求1所述的噬菌体，其特征在于，所述噬菌体的特异性基因片段如SEQ ID NO 6所示的核苷酸序列。4.根据权利要求1所述的噬菌体，其特征在于，所述噬菌体宿主谱更广，对黄单胞菌的裂解率达73.75%；优选地，所述噬菌体对柑橘溃疡病细菌的最佳感染复数为0.01；优选地，所述噬菌体具有耐高温性、耐酸碱性、紫外耐受性。5.一种如权利要求1
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4中任一项所述的噬菌体在治理柑橘溃疡病方面的应用。6.一种如权利要求1
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4中任一项所述的噬菌体在制备用于治理柑橘溃疡病的制剂方面的应用。7.一种引物序列，其特征在于，所述引物序列为权利要求1
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4中任一项所述的噬菌体的引物序列；所述引物序列的上游引物...
【专利技术属性】
技术研发人员：陈德国，赵勇，赖阳琼，蒋诗涛，刘裴清，苏清金，
申请(专利权)人：厦门昶科生物工程有限公司，
类型：发明
国别省市：
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