幽门螺旋杆菌检测试剂条、试剂笔及其应用制造技术

本发明专利技术涉及兽用体外诊断技术领域，尤其是涉及幽门螺旋杆菌检测试剂条、试剂笔及其应用。本发明专利技术将幽门螺旋杆菌抗体Ⅱ作为检测区的包被抗体，用于制备检测宠物幽门螺杆菌的产品；所述检测宠物幽门螺杆菌产品通过免疫层析法检测宠物幽门螺杆菌，检测过程中待测样品的层析方向为垂直的由下往上。故选择参考本发明专利技术原有的笔型外观进行改进，本发明专利技术不仅为动物行业对于犬/猫幽门螺杆菌抗原提供一种较新颖的检测方式，同时缩短了样品的处理时间，其优点主要是一步法可检测出在幽门螺杆菌阳性粪便样本含量超出5ng/mL的尿素酶。样本含量超出5ng/mL的尿素酶。样本含量超出5ng/mL的尿素酶。

【技术实现步骤摘要】
幽门螺旋杆菌检测试剂条、试剂笔及其应用


[0001]本专利技术涉及兽用体外诊断
，尤其是涉及幽门螺旋杆菌检测试剂条、试剂笔及其应用。

技术介绍

[0002]幽门螺旋杆菌Helicobacter Pylori(简称HP)是一种螺旋状革兰氏阴性细菌，是常见的消化道致病菌之一，影响全球约50％的人口，其感染是引起胃炎、胃溃疡、腺癌和淋巴增生等疾病的主要原因，被列为I类致癌因子。
[0003]人与宠物猫狗存在HP相关的尿素酶菌株包括：H.pylori、H.canis、H.bizzozeronii等，所以在研究制备理想的HP抗体过程中，针对于尿素酶的研究不可或缺。尿素酶是一种存在于人和动物胃肠道及泌尿道细菌感染最常见的酶，Hp尿素酶分子量为550KDa，每个单体由A、B两个亚单位组成，结合成六聚体结构。尿素酶B是HP的主要外膜抗原成分，由569给氨基酸残基编码产生，是主要的保护性蛋白，具有无毒，保守及抗原性强等特点，是该菌疫苗的首选抗原检测表位。
[0004]幽门螺杆菌在犬、猫身上于人类的同源率接近100％，传播方式主要通过粪
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口传播和口
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口传播途径进行传播，在世界的不同种族，不同地区均有感染，可以说是宠物与人之间最广泛的慢性细菌性感染疾病，人一旦感染可能会直接或者间接感染自家宠物，反之宠物感染HP也可能传染给人，患有HP感染的犬猫在临床症状主要表现为呕吐，腹泻，精神萎靡，食欲不振，口臭严重，异嗜现象，严重的会发生精神症状。所以针对此疾病，日常的防范至关重要，如定期的宠物检查以及家庭环境的消毒。
[0005]目前检测感染HP的方法主要有：直接检查、尿素酶活性测定、免疫学检测等。
[0006](1)细菌的直接检查：通过钳取组织部位制备组织切片染色及细菌培养来检测HP，该方法具有灵敏度高，特异性强等优点，可以作为验证诊断性试验的“金标准”，但局限性大，需要专业的人员进行操作。
[0007](2)尿素酶检查：因HP在体内能产生大量尿素酶，故可通过检测尿素酶来诊断HP感染，尿素酶分解胃部尿毒生成氨气和二氧化碳，使尿素浓度降低、氨浓度升高，所以可以开展胃活检组织尿毒酶试验；胃液尿素或尿素氮测定；15N
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尿素试验；呼气试验。
[0008](3)免疫学检测：目前主要的免疫学方法都是通过测定血清中的HP抗体来诊断HP感染，包括补体结合试验、凝集试验、被动血凝测定、免疫印迹技术和酶联免疫吸附测定(ELISA)等。
[0009]和检测人源幽门螺杆菌不同，检测宠物时可方便采集的样品种类有限，而对来源于排泄系统的样本进行方便快捷的检测，相对于采集于口腔的渗透液等天然液态样本相比，检测难度大大提高，从而对抗体的灵敏度和特异性提出了更高的要求。同时检测笔类由下往上层析的形式，需要采集部，层析过程中，采集部的截留效应和重力的影响，都会降低层析效果，因此，也进一步加大了检测难度。目前国内用于检测犬/猫的幽门螺杆菌的试剂较少，而运用笔型检测试剂，采样与检测合二为一的检测方式在目前市面上的产品尚未见
到。
[0010]鉴于此，开发一种准确、快速、一步法的笔型试剂来检测HP，有利于在宠物医院或居家检测宠物胃幽门螺旋杆菌的推广应用，对宠物幽门螺杆菌导致的相关疾病的防治有重要的临床意义。

技术实现思路

[0011]本专利技术的目的在于，提供一种适用于宠物的幽门螺杆菌的检测试剂条和/或试剂笔，为宠物疫病方面研制一种特异性较好，灵敏度高，检测快速，采样简单的临床检测产品，同时为人与宠物健康提供有力的保障。
[0012]需要说明的是，抗体的“可变区”或“可变结构域”是指抗体的重链或轻链的氨基端结构域。重链的可变结构域可以被称为“VH”。轻链的可变结构域可以被称为“VL”。这些结构域通常是抗体的最可变的部分，并含有抗原结合位点。轻链或重链可变区由被三个称为“互补决定区”或“CDR”的高变区打断的构架区构成。抗体的构架区，即构成要件轻链和重链的组合的构架区，起到定位和对齐CDR的作用，所述CDR主要负责与抗原的结合。
[0013]“构架”或“FR”区意味着抗体可变结构域的排除被定义为CDR的那些区域之外的区域。每个抗体可变结构域构架可以被进一步细分成被CDR分隔开的毗邻区域(FR1、FR2、FR3和FR4)。
[0014]通常情况下，重链和轻链的可变区VL/VH可由以下编号的CDR与FR按如下组合排列连接获得：FR1
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CDR1
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FR2
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CDR2
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FR3
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CDR3
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FR4。
[0015]在本专利技术中，CDR1
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VH、CDR2
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VH和CDR3
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VH分别指重链可变区的三个高变区，相应的，CDR1
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VL、CDR2
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VL和CDR3
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VL分别指轻链可变区的三个高变区。
[0016]为了解决上述技术问题，实现上述目的，本专利技术提供以下技术方案：
[0017]第一方面，本专利技术提供了一种鼠源幽门螺旋杆菌抗体Ⅱ在制备检测宠物幽门螺杆菌产品中的应用；所述检测宠物幽门螺杆菌产品通过免疫层析法检测宠物幽门螺杆菌，检测过程中待测样品的层析方向为垂直的由下往上，所述鼠源幽门螺旋杆菌抗体包被于免疫层析法的检测区；
[0018]所述鼠源幽门螺旋杆菌抗体Ⅱ的可变区包括：具有如SEQ ID NO.1所示氨基酸序列的互补决定区CDR1
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VH、具有如SEQ ID NO.2所示氨基酸序列的互补决定区CDR2
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VH、具有如SEQ ID NO.3所示氨基酸序列的互补决定区CDR3
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VH、具有如SEQ ID NO.4所示氨基酸序列的互补决定区CDR1
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VL、具有如SEQ ID NO.19所示氨基酸序列的互补决定区CDR2
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VL和具有如SEQ ID NO.5所示氨基酸序列的互补决定区CDR3
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VL。
[0019]CDR1
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VH：DYTFTNSW(SEQ ID NO.1)；
[0020]CDR2
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VH：INPSTGST(SEQ ID NO.2)；
[0021]CDR3
‑
VH：ASEEYDGFDY(SEQ ID NO.3)；
[0022]CDR1
‑
VL：SSIIYM(SEQ ID NO.4)；
[0023]CDR2
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VL：DTS(SEQ ID NO.19)；
[0024]CDR3
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VL：QQWSSSPYT(SEQ ID NO.5)。
[0025]作为进一步技术方案，所述鼠源幽门螺旋杆菌抗体Ⅱ的重链的可变区氨基酸序列如SEQ ID NO.6所示：本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.鼠源幽门螺旋杆菌抗体Ⅱ在制备检测宠物幽门螺杆菌产品中的应用；所述检测宠物幽门螺杆菌产品通过免疫层析法检测宠物幽门螺杆菌，检测过程中待测样品的层析方向为垂直的由下往上，所述鼠源幽门螺旋杆菌抗体Ⅱ包被于免疫层析法的检测区；所述鼠源幽门螺旋杆菌抗体Ⅱ的可变区包括：具有如SEQ ID NO.1所示氨基酸序列的互补决定区CDR1
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VH、具有如SEQ ID NO.2所示氨基酸序列的互补决定区CDR2
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VH、具有如SEQ ID NO.3所示氨基酸序列的互补决定区CDR3
‑
VH、具有如SEQ ID NO.4所示氨基酸序列的互补决定区CDR1
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VL、具有如SEQ ID NO.19所示氨基酸序列的互补决定区CDR2
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VL和具有如SEQ ID NO.5所示氨基酸序列的互补决定区CDR3
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VL。2.幽门螺旋杆菌检测试剂条，其特征在于，所述试剂条由上往下依次包括质控区、检测区、含乳胶标记物Ⅰ聚酯膜、样本垫和吸水纸；所述检测区包被有鼠源幽门螺旋杆菌抗体Ⅱ；所述鼠源幽门螺旋杆菌抗体Ⅱ的可变区包括：具有如SEQ ID NO.1所示氨基酸序列的互补决定区CDR1
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VH、具有如SEQ ID NO.2所示氨基酸序列的互补决定区CDR2
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VH、具有如SEQ ID NO.3所示氨基酸序列的互补决定区CDR3
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VH、具有如SEQ ID NO.4所示氨基酸序列的互补决定区CDR1
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VL、具有如SEQ ID NO.19所示氨基酸序列的互补决定区CDR2
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VL和具有如SEQ ID NO.5所示氨基酸序列的互补决定区CDR3
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VL；优选地，所述试剂条的基底材料为硝酸纤维素膜。3.根据权利要求2所述的试剂条，其特征在于，所述乳胶标记物Ⅰ为偶联幽门螺旋杆菌抗体Ⅰ的乳胶微球；所述幽门螺旋杆菌抗体Ⅰ的可变区包括：具有如SEQ ID NO.10所示氨基酸序列的互补决定区CDR1
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VH、具有如SEQ ID NO.11所示氨基酸序列的互补决定区CDR2
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VH、具有如SEQ ID NO.12所示氨基酸序列的互补决定区CDR3
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VH、具有如SEQ ID NO.13所示氨基酸序列的互补决定区CDR1
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VL、具有如SEQ ID NO.20所示氨基酸序列的互补决定区CDR2
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VL和具有如SEQ ID NO.14所示氨基酸序列的互补决定区CDR3
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VL；优选地，所述乳胶为C乳胶，选自C
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Latex1、C
‑
La...

【专利技术属性】
技术研发人员：张宣伟，林埴，平兆锁，张维宇，董文坤，请求不公布姓名，魏文涛，
申请(专利权)人：杭州安旭生物科技股份有限公司，
类型：发明
国别省市：