一种监测度洛西汀血药浓度的方法及试剂盒技术

本发明专利技术公开了一种监测度洛西汀血药浓度的方法及试剂盒。该方法采用二维色谱仪系统，包括制备溶液、设置色谱参数、实施检测、计算含量。通过一维柱色谱条件、二维柱色谱条件、大体积进样条件和阀切换条件系统的配合，建立了方法学研究，通过严格的加样回收试验，验证了回收率在95％～105％之间。本发明专利技术方法操作简单，大大减少溶剂消耗；且专属性强，灵敏度高、线性范围宽，准确度高，能快速有效地检测血液样品中的度洛西汀含量，缩减了临床诊断时间，极大的节约时间和成本。可在各种医院治疗中广泛应用于度洛西汀的血药浓度快速检测和精准治疗，有效避免病人治疗的不良反应和中毒事件，还可用于科研机构研究人体药物代谢及血药成分快速分析。速分析。速分析。

【技术实现步骤摘要】
一种监测度洛西汀血药浓度的方法及试剂盒


[0001]本专利技术涉及血药浓度监测
，尤其涉及一种监测度洛西汀血药浓度的方法及试剂盒。

技术介绍

[0002]度洛西汀(Duoxetine)，是一种较新的SNRIs化合物，用于治疗抑郁症(Major Depressive Disorder，MDD)，神经性疼痛，应力性尿失禁，纤维肌痛，广泛性焦虑症等。临床上最常使用的是盐酸度洛西汀肠溶片。在体外和动物实验中，Duoxetine对5
‑
羟色胺(5
‑
HT)和去甲肾上腺素(NE)转运体有很高的亲和力，抑制了大脑单胺类神经递质的摄取。该药通过细胞色素P450(CYP)2D6和CYP1A2代谢，平均半衰期为12h(8—17h)，固定剂量使用下，3天后可达到体内最大血药浓度。度洛西汀在抗抑郁症患者中的治疗窗为30ng/mL
‑
120ng/mL，病人用药后血浆经过蛋白沉淀剂稀释后检测窗口约为6ng/mL 24ng/mL，浓度低且范围窄，对检测方法的灵敏度要求高。
[0003]度洛西汀在治疗MDD时表现出疗效性、安全性和耐受性，使用剂量从40mg/d到120mg/d不等。单剂量40mg/d的度洛西汀是最低疗效剂量，诱导了近80％的5
‑
羟色胺转运体，20mg/d和60mg/d剂量的度洛西汀对NE转运分别率为30.5％，40.0％。据此估计，度洛西汀诱导50％去甲肾上腺素转运率的使用量为76.8mg，以及估计的血浆剂量药物浓度诱导50％去甲肾上腺素转运率为58.0ng/mL。可见度洛西汀对神经递质的作用与剂量有着明显的关系。目前，已有研究显示，度洛西汀与临床疗效之间的关系是由药物浓度决定的，而不是剂量，指出使其浓度稳定在58ng/ml以上，才有利于治疗的优化。通过检测药物在血液中的浓度，对药品的不良反应、毒性发生概率进行相关的量化管理，协助调整患者的药物治疗方案，可保证最佳的血药浓度及最佳治疗效果，减少不良反应的发生。
[0004]目前临床上常用的监测度洛西汀血药浓度的方法有两类。第一类，HPLC
‑
UV法，在实际应用中，度洛西汀血药浓度范围窄，用HPLC
‑
UV难以达到检测要求；第二类，HPLC
‑
MS法，尽管灵敏度高，但由于血液基质干扰较大，且HPLC
‑
MS所用仪器昂贵，维修成本高，给开展血浆度洛西汀浓度监测带来一定的局限性。
[0005]专利CN112697919B公开了度洛西汀的检测方法，采用高效液相色谱联合荧光检测器，该方法检测血液中度洛西汀的定量限为6.1ng/mL信噪比(S/N)为10时，线性范围16ng/mL～576ng/mL。但是在荧光测量中的一些干扰非常敏感，如背景荧光和猝灭效应等，在进行定量分析时，还要验证这些干扰是否存在，以及对样品测定的影响程度，增加了操作难度和检测时间。

技术实现思路

[0006]本专利技术的目的在于针对现有技术的上述不足，提供一种监测度洛西汀血药浓度的方法及试剂盒，该方法操作简单，专属性强，灵敏度高、线性范围宽，准确度高，能够快速有效地检测血液样品中的度洛西汀含量，提高了医院监测患者体内度洛西汀的血药浓度的效
率，缩减了临床诊断时间，实现精准医疗。
[0007]为了实现上述目的，本专利技术采用了如下技术方案：
[0008]一种监测度洛西汀血药浓度的方法，采用二维液相色谱仪系统，二维液相色谱仪系统为Thermo Ultimate3000SD系统，包括带在线脱气单元的双三元梯度泵DGP
‑
3600SD、自动进样器WPS
‑
3000SL、辅助泵AXP Pump、带有一个六通阀的柱温箱TCC
‑
3000RS和检测器DAD
‑
3000，所述方法包括以下具体步骤：
[0009]步骤S1、制备溶液：
[0010]空白血浆溶液：采用蛋白沉淀剂稀释正常人空白血浆制成血浆溶液，离心过滤取其续滤液，得到的续滤液作为空白血浆性溶液；
[0011]系统适用性溶液：取度洛西汀溶液和正常人空白血浆适量，混匀，采用蛋白沉淀剂稀释制成浓度为M的度洛西汀的血浆溶液，离心过滤取其续滤液，得到的续滤液作为系统适用性溶液；
[0012]标准曲线溶液：制备不同浓度的度洛西汀溶液，得到的不同浓度的标准曲线溶液；
[0013]供试品溶液：取正在进行度洛西汀治疗的患者的人体血浆，加入蛋白沉淀剂后离心过滤，得到的续滤液作为所述供试品溶液；
[0014]步骤S2、设置色谱参数
[0015]在所述二维液相色谱仪系统上设置一维柱色谱条件的参数、二维柱色谱条件的参数、大体积进样条件的参数和阀切换条件的参数，并使用所述空白血浆溶液和所述系统适用性溶液确认，其中，
[0016]所述一维柱色谱条件的参数：
[0017]一维柱为DIONEX SolExTM RSLC HRP固相萃取柱，规格为2.1mml.D.
×
20mm；
[0018]一维洗脱液包括一维流动相A和一维流动相B，所述一维流动相A为甲醇，所述一维流动相B为水；
[0019]一维洗脱方式为梯度洗脱，所述梯度洗脱程序为0
‑
6.5min，流速为0.5mL/min，一维流动相A：一维流动相B体积比为10：90；6.5
‑
7.0min，流速由0.5mL/min改变为1.5mL/min，一维流动相A：一维流动相B体积比由10：90改变为80：20；7.5
‑
9.0min，流速为1.5mL/min，一维流动相A：一维流动相B体积比为80：20；9.0
‑
9.2min，流速为1.5mL/min，一维流动相A：一维流动相B体积比由80：20改变为10：90；9.2
‑
11.0min，流速为1.5mL/min，一维流动相A：一维流动相B体积比为90：10；11.0
‑
11.5min，流速由1.5mL/min改变为0.5mL/min，一维流动相A：一维流动相B体积比为10：90；11.5
‑
15.0min，流速为0.5mL/min，一维流动相A：一维流动相B体积比为10：90，
[0020]所述二维柱色谱条件的参数：
[0021]二维柱为Acclaim
TM 120C18色谱柱色谱柱，规格为250
×
4.6mm，5μm；
[0022]二维洗脱液包括二维流动相A和二维流动相B，所述二维流动相A为乙腈，所述二维流动相B为0.05mmol磷酸二氢钾，磷酸调pH＝6.0；
[0023]二维洗脱方式为等度洗脱，所述等度洗脱程序为0
‑
15min，流速为1.0mL/min，二维流动相A：二维流动相B体积比为51：49；
[0024]一维色谱与二维色谱阀切换程序为：0.1min...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种监测度洛西汀血药浓度的方法，采用二维液相色谱仪系统，二维液相色谱仪系统为Thermo Ultimate3000SD系统，包括带在线脱气单元的双三元梯度泵DGP
‑
3600SD、自动进样器WPS
‑
3000SL、辅助泵AXP Pump、带有一个六通阀的柱温箱TCC
‑
3000RS和检测器DAD
‑
3000，其特征在于，所述方法包括以下具体步骤：S1、制备溶液：空白血浆溶液：采用蛋白沉淀剂稀释正常人空白血浆制成血浆溶液，离心过滤取其续滤液，得到的续滤液作为空白血浆性溶液；系统适用性溶液：取度洛西汀溶液和正常人空白血浆适量，混匀，采用蛋白沉淀剂稀释制成浓度为M的度洛西汀的血浆溶液，离心过滤取其续滤液，得到的续滤液作为系统适用性溶液；标准曲线溶液：制备不同浓度的度洛西汀溶液，得到的不同浓度的标准曲线溶液；供试品溶液：取正在进行度洛西汀治疗的患者的人体血浆，加入蛋白沉淀剂后离心过滤，得到的续滤液作为所述供试品溶液；S2、设置色谱参数在所述二维液相色谱仪系统上设置一维柱色谱条件的参数、二维柱色谱条件的参数、大体积进样条件的参数和阀切换条件的参数，并使用所述空白血浆溶液和所述系统适用性溶液确认，其中，所述一维柱色谱条件的参数：一维柱为DIONEX SolEx TM RSLC HRP固相萃取柱，规格为2.1mml.D.
×
20mm；一维洗脱液包括一维流动相A和一维流动相B，所述一维流动相A为甲醇，所述一维流动相B为水；一维洗脱方式为梯度洗脱，所述梯度洗脱程序为0
‑
6.5min，流速为0.5mL/min，一维流动相A：一维流动相B体积比为10：90；6.5
‑
7.0min，流速由0.5mL/min改变为1.5mL/min，一维流动相A：一维流动相B体积比由10：90改变为80：20；7.5
‑
9.0min，流速为1.5mL/min，一维流动相A：一维流动相B体积比为80：20；9.0
‑
9.2min，流速为1.5mL/min，一维流动相A：一维流动相B体积比由80：20改变为10：90；9.2
‑
11.0min，流速为1.5mL/min，一维流动相A：一维流动相B体积比为90：10；11.0
‑
11.5min，流速由1.5mL/min改变为0.5mL/min，一维流动相A：一维流动相B体积比为10：90；11.5
‑
15.0min，流速为0.5mL/min，一维流动相A：一维流动相B体积比为10：90，所述二维柱色谱条件的参数：二维柱为Acclaim
TM 120C18色谱柱色谱柱，规格为250

【专利技术属性】
技术研发人员：李效宽，田丽，周玲，杨艳羚，高怡欣，刘文秀，
申请(专利权)人：武汉帕默康创药物研究开发有限公司，
类型：发明
国别省市：