黄芩素用于制备降低烟气引起DNA氧化损伤的卷烟制造技术

本发明专利技术涉及卷烟制造领域，尤其涉及一种使用中药物质有效降低烟气引起ＤＮＡ氧化损伤的卷烟。本发明专利技术提供了黄芩素用于制备降低烟气引起ＤＮＡ氧化损伤的卷烟的应用。其具体方法是在卷烟的烟丝中加入黄芩素，黄芩素的加入量为０．１～５ｍｇ／支。本发明专利技术的含黄芩素的卷烟通过检测，产生的８－ＯＨ－ｄＧ均比对照组的少，黄芩素可以有效降低卷烟烟气导致的ＤＮＡ氧化损伤。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及巻烟制造领域，尤其涉及一种使用中药物质有效降低烟气引起 DNA氧化损伤的巻烟。
技术介绍
吸烟可产生大量的自由基、活性氧(ROS)，多环芳烃类物质，经CYP1A1 活化成亲电子化合物，可攻击DNA，形成共价的DNA加合物，引起DNA碱基 错配，DNA单链或双链断裂，导致DNA损伤，最终导致癌变(Poulsen, HE., Oxidative DNA modifications, 7b;dco/. P"Ao/" 2005, 57, 161-169.) 。 DNA损伤与癌症、阿尔茨海默氏症和正常衰老过程等人类一切变化均有关联。体外研究也表明香烟烟雾中产生的大量超氧自由基和羟自由基能与小牛胸腺DNA反应，产生大量的加合物8-OH-dG， 8-OH-dG的水平可以作为香烟 烟雾暴露水平及其对DNA损伤的生物学标志物，可用于环境污染物与人类健 康危险性评价研究。Phillips等于1988年在《Nature》杂志上提出吸烟可导致肺 组织DNA加合物水平升高。香烟烟雾在体外就可产生大量的超氧自由基(02—) 和羟自由基(—OH)，在分子水平上直接进攻DNA而产生大量的8_OH-dG或形 成其它的DNA损伤形式，如DNA单链断裂(SSB)， DNA双链断裂(DSB)、交联 等。8-OH-dG生成量在一定程度上反应了 DNA受损伤的程度。Pilger等研究表 明，和不吸烟的人群相比，吸烟人群尿中的8-OH-dG浓度明显著升高。孙咏梅 等以DNA加合物8-羟基脱氧鸟苷(8-OH-dG)作为DNA氧化损伤的生物学标志 物，研究了香烟烟雾成分对DNA生物氧化损伤。中草药是我国的传统药物，在我国经过上千年的实践应用，具有高效、安 全等特性，特别是很多中草药提取物在抗氧化、清除自由基保护机体免受伤害等方面具有重要作用。它对许多疾病有良好的疗效，它对许多疑难杂症的治疗 效果远远好于西药，因此它闩益受到全世界的关注，成为新的研究热点。专利技术人申请的专利技术专利(申请号为200810121850.1)公幵了巻烟烟气导致 DNA氧化损伤产生8-羟基脱氧鸟苷的测定评价方法，该方法可以检测巻烟烟气 对DNA的损伤，用来检测筛选中草药对巻烟烟气对DNA损伤的保护作用，为研制和开发高效安全的中草药制剂降低巻烟的危害以及低危害巻烟提供理论支 ^。
技术实现思路
为了降低吸烟导致人体DNA氧化损伤的危害，本专利技术的一个目的是提供黄 苓素的一种应用，其可以有效降低烟气引起DNA氧化损伤。本专利技术的另外一个 目的是提供采用黄芩素制备得到的巻烟。为了实现上述的第一个目的，本专利技术提供/黄芩素用于制备降低烟气引起 DNA氧化损伤的巻烟的应用。为了实现上述的第二个目的，本专利技术采用了以下的技术方案一种有效降低烟气引起DNA氧化损伤的巻烟，在巻烟的烟丝中加入黄芩素， 黄芩素的加入量为0. 1 5mg/支。作为优选，黄芩素的加入量为l 3mg/支。本专利技术由于采用了上述的技术方案，本专利技术的黄芩素通过检测，产生的8-OH-dG均比对照组的少，黄芩素可以有效降低巻烟烟气导致的DNA氧化损伤。附图说明 图1为本专利技术检测设备的结构图。 图2为本专利技术检测方法的原理图。 图3为DNA的量对化学发光检测信号的影响图。具体实施例方式一、 试剂与仪器-所有试剂均为分析纯，实验用水为去离子超纯水。pH6. 0的咪唑缓冲液；0. 1M 的PBS, pH二7. 2-7. 4;洗涤液为含有O. P/。的吐温20的PBS;封闭液1为40mM甘氨 酸，P/。BSA的咪唑缓冲液；封闭液II为10。/。BSA的PBS。,N-(3-二甲基氨丙基)-N，-乙基-碳二亚胺盐酸盐(EDC)购于Sigma公司； 服P标记兔抗羊IgG购于北京博奥森生物技术有限公司；羊抗8-0H-dG购于abcam 公司；HRP化学发光试剂盒购于Milipore公司；羧基修饰的磁性微球(1.5um， Bangs Laboratories, Inc. ) ; DNA(5' -GCC AAC AGC CAG TGG GAA ACA AAA AAA AAA-NH厂3，)，由上海英骏生物技术公司合成。烟气由Borgwaldt Technik公 司的RM1/Plus吸烟机制得。BPCL微弱发光测量仪(中国科学院生物物理研究所)；HZ-9211K恒温振荡 器(太仓市科教器材厂)。二、 检测的方法'如图2所示该检测方法包括以下的步骤(1)将固定于磁珠的DNA分散在气 体普及器的捕集液中，捕集器与吸烟机连接，实行在线氧化DNA (如图l所示)， 欲筛选的中药可在氧化前加入捕集液内；(2)氧化后的DNA通过磁性分离手段， 弃去烟气剩余物等杂质，多次洗涤，从而保证将杂质对检测信号的影响降至最 低；(3)酶联免疫反应上述氧化后的DNA经过含有BSA的溶液封闭后，与加入 的羊抗8-0HdG抗体特异性反应，随后又与加入的服P标记的驴抗羊的工gG发生免 疫反应；(4)多余的反应物经过磁性分离洗涤后，加入HRP增强型化学发光底 物，化学发光扫描发光强度。在线监测烟气对DNA的氧化损伤产生8-OHdG发现随 烟量的增加，8-0HdG先增加后减少。此外，DNA的量，抗体稀释比例影响信号强度，其中DNA量对信 号的影响如图3所示，图中显示了在120ug磁珠上固定80pmol的DM化学发光信号 最高，于是将此作为后续实验的条件。另通过优化抗体稀释比例，最终用于DNA抗吸烟氧化损伤保护剂筛选的条件 为3mLPBS-TW溶液中含有固定在120ug磁珠上的80pmolDNA，吸烟口后反应 80min， 一抗稀释比例为10000倍，二抗稀释比例为1000倍。在此条件下可评价 中草药对DNA的保护作用，中药在DNA氧化前加入到反应液中，最终得到的信号 与对照组相比进行计算。在上述条件下可评价黄芩素对DNA的保护作用一、 黄芩素在DNA氧化前加入到反应液中，最终得到的信号与对照组相比 进行计算。显示黄芩素能100。/。保护DNA损伤，是极好的DNA抗吸烟氧化保护剂。二、 含黄芩素的香烟制作黄芩素lmg溶解在乙醇中，用注射器注射到烟丝 部位，室温挥干lh, 37。C真空干燥30min，放入恒温恒湿箱内待用。利用自动吸 烟机吸每种香烟4 puff，酶联免疫化学发光法检测发现添加不同浓度黄芩素的巻 烟对DNA损伤的程度明显下降。种类剂量(mg/支)效果(%)黄芩素2801520. 539. 2权利要求1.黄芩素用于制备降低烟气引起DNA氧化损伤的卷烟的应用。2. —种有效降低烟气引起DNA氧化损伤的巻烟，其特征在于在巻烟的烟丝中 加入黄芩素，黄芩素的加入量为O. 1 5mg/支。3. 根据权利要求1所述的一种有效降低烟气引起DNA氧化损伤的巻烟，其特征 在于黄芩素的加入量为1 3mg/支。全文摘要本专利技术涉及卷烟制造领域，尤其涉及一种使用中药物质有效降低烟气引起DNA氧化损伤的卷烟。本专利技术提供了黄芩素用于制备降低烟气引起DNA氧化损伤的卷烟的应用。其具体方法是在卷烟的烟丝中加入黄芩素，黄芩素的加入量为0.1～5mg/支。本专利技术的含黄芩素的卷烟通过检测，产生的8-OH-dG均比对照组的少，黄芩素可以有效降低卷烟烟气导致的DNA氧化损伤。文档编号A24B15/10GK101本文档来自技高网...

【技术保护点】
黄芩素用于制备降低烟气引起ＤＮＡ氧化损伤的卷烟的应用。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：周国俊，周建华，黄芳芳，刘金莉，陈红君，卢建忠，
申请(专利权)人：浙江中烟工业有限责任公司，
类型：发明
国别省市：86[]