一种人钙结合蛋白S100A8检测试剂盒制造技术

本发明专利技术属于体外检测技术领域，具体涉及一种人钙结合蛋白S100A8检测试剂盒。本发明专利技术提供一种人钙结合蛋白S100A8检测试剂盒，包括：S100A8特异性抗体；内标S100A8重组蛋白；S100A8蛋白标准品；基质溶液；以及反应缓冲液，其中，所述基质溶液中含有用于MALDI

【技术实现步骤摘要】
一种人钙结合蛋白S100A8检测试剂盒


[0001]本专利技术属于体外检测
，具体涉及一种人钙结合蛋白S100A8检测试剂盒。

技术介绍

[0002]钙结合蛋白S100A8是S100蛋白家族的重要成员，又被称作钙粒蛋白
‑
A(calgranμLin
‑
A)、迁移抑制因子相关蛋白8(migration inhibitory factor
‑
related protein 8，MRP
‑
8或p
‑
8)、囊性纤维化抗原(cystic fibrosis antigen)、白细胞L1轻链蛋白(leukocyte L1 complex light chain)或泌尿系结石蛋白A(urinary stone protein band A)等。S100蛋白(S100 proteins)，因其在中性pH条件下能溶解于100％饱和度硫酸铵中而得名，目前已发现20余种S100蛋白家族成员，是一组结构与功能相似、高度同源性的低分子量(10～12kDa)钙结合蛋白(Ca
2+
‑
binding proteins)。S100A8基因位于人染色体1q21和小鼠第3号染色体上的基因簇中，人S100A8蛋白由93个氨基酸残基组成，蛋白分子量为10833Da，通常以二聚体形式存在。与S100蛋白家族其他成员相似，S100A8单体由两个不同的螺旋
‑
环
‑
螺旋(helix
‑
loop
‑
helix)配基(EF
‑
hand,EF手型)组成，两侧为疏水区，中间为9个氨基酸残基组成的铰链区(hinge)，可与Ca
2+
结合。当S100A8与Ca
2+
结合后，其构象会发生改变，从而暴露出疏水残基，使其可以与靶蛋白结合，进而通过与相应靶蛋白相互作用产生不同的生物学效应。在生理条件下，S100A8蛋白主要分布于粒细胞和单核细胞胞浆中，通过非共价键结合形成同源二聚体(S100A8 homodimer)；在细胞外液中也可检测到不同表达水平的S100A8蛋白，表明S100A8同时具有细胞内和细胞外的功能。
[0003]此外，S100A8通常能与S100A9蛋白通过Ca
2+
依赖的方式形成S100A8/S100A9异源二聚体(S100A8/S100A9 heterodimer或Calprotectin，钙(防)卫蛋白)、三聚体或四聚体而发挥生物学功能。Vogl等的研究显示，S100A8/A9复合体在正常生理状态下并无炎症活性，而脂多糖(lipopolysaccharides,LPS)等的刺激能诱导其产生炎症活性。在结合后的S100A8/A9复合体中，S100A8作为主要的活性成分行使相应的生物学功能，而S100A9的作用可能为辅助调节作用。Gene Ontology生物信息学分析显示S100A8主要参与了急、慢性炎症反应、趋化性、LPS诱导反应等生物学过程，提示S100A8在炎症反应中具有重要作用。S100A8能够在特定条件下刺激炎症细胞释放炎症蛋白和炎症介质，直接参与炎症疾病过程。在哮喘、关节炎、炎症性肠病、慢性支气管炎和肺囊性纤维化、变应性皮炎等不同的炎症性疾病样本检测中均发现存在S100A8蛋白表达失调。近年来，S100A9在炎症疾病中的作用被广泛研究，但由于敲除S100A8基因会导致胚胎小鼠致死进而限制了对S100A8功能的研究。尽管S100A8在慢性炎症中的抗炎、促炎作用均有报道，但其具体功能以及作用基质尚不清楚。
[0004]近期有研究报道S100A8/9会在新冠病毒感染发病期重症病人的外周血中的免疫细胞中普遍上调表达，提示重症病人可能发生了由S100A8/9
‑
TLR4介导的全身的系统免疫反应风暴，这就更加引起了科研工作者对炎症反应中S100A8功能研究的兴趣。S100A8或许会成为新的炎症反应生物标记物，通过对该项指标的监测可以辅助炎症相关疾病的诊断、评估或治疗监测。然而，目前临床上对蛋白大分子的定量检测主要以免疫技术为主，如酶联
免疫吸附(Elisa)法、化学发光法、免疫比浊法等。该类方法基于抗原抗体特异结合的原理，具有检测速度快、检测价格低等优势，但因易漏检、假阳性、酶的纯度和反应过程易受样本基质干扰等因素而导致检测结果稳定性和重现性差，特别对S100A8和S100A9这类同源性较高蛋白中的一个蛋白进行定量更是易受同源蛋白的干扰，无法建立特异性满足要求的精准定量技术。
[0005]因此，为了揭示S100A8在机体炎症反应中的作用机制并推动该项目在临床上的应用，亟需一种定量准确、长期一致性好、方法学稳定、通量高的人钙结合蛋白S100A8的定量技术。

技术实现思路

[0006]本专利技术旨在至少在一定程度上解决现有技术中存在的技术问题至少之一。为此，本专利技术提供了一种人钙结合蛋白S100A8检测试剂盒，该试剂盒重现性及一致性良好、方法学稳定，可实现精准定量；不受同源蛋白的干扰，可满足特异性需求，实现对S100A8和S100A9同源性较高蛋白中的S100A8蛋白的精准定量检测；可为揭示S100A8在机体炎症反应中的作用机制，提供精准定量技术。
[0007]在本专利技术的一个方面，本专利技术提出了一种人钙结合蛋白S100A8检测试剂盒。根据本专利技术的实施方案，所述试剂盒包括：
[0008]S100A8特异性抗体；
[0009]内标S100A8重组蛋白；
[0010]S100A8蛋白标准品；
[0011]基质溶液；
[0012]以及反应缓冲液，
[0013]其中，所述基质溶液中含有用于MALDI
‑
TOF MS平台的基质和抗原抗体复合物解离试剂。
[0014]S100A8是临床常用的指标钙卫蛋白的一个亚基，也就是S100A8是钙卫蛋白的一个组成部分，它的作用不只是与S100A9形成钙卫蛋白形式的异源二聚体，还可以单独游离或者形成同源二聚体S1008A或者与S100A9形成异源三、四聚体。根据研究，钙卫蛋白的抗炎作用很可能是S100A8在起作用，因此定量S100A8会具有更好的临床诊断特异性。
[0015]本专利技术提供一种人钙结合蛋白S100A8检测的试剂盒，解决临床对S100A8在机体炎症反应中的作用机制研究中S100A8蛋白定量技术缺失的问题，进而推动这个重要的炎症指标在临床上的应用。本专利技术基于MALDI
‑
TOF MS平台和所述试剂盒开发了一种抗干扰强、方法学稳定、通量高、样品用量少、可实现前处理自动化的S100A8蛋白定量技术。该技术在临床上的推广将更好地诊疗S100A8蛋白表达失调所导致的相关疾病。
[0016]本专利技术提供的用于人钙结合蛋白S100A8检测试剂盒，该试剂盒重现性及一致性良好、方法学稳定，可实现精准定量；不受同源蛋白的干扰，可满足特异性需求，实现对S100本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种人钙结合蛋白S100A8检测试剂盒，其特征在于，包括：S100A8特异性抗体；内标S100A8重组蛋白；S100A8蛋白标准品；基质溶液；以及反应缓冲液，其中，所述基质溶液中含有用于MALDI
‑
TOF MS平台的基质和抗原抗体复合物解离试剂。2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述S100A8特异性抗体为单克隆抗体或多克隆抗体；任选地，所述S100A8特异性抗体的亲和力常数KD值为9.9
×
10
‑
12
M
‑1×
10
‑9M。3.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒进一步包括磁珠，所述磁珠通过连接单元与所述S100A8特异性抗体键合；任选地，所述连接单元包括第一结合分子和第二结合分子，所述第一结合分子和第二结合分子能够特异性结合；任选地，所述第一结合分子、第二结合分子选自生物素、链霉亲和素或亲和素；任选地，所述第一结合分子与所述S100A8特异性抗体偶联，所述第一结合分子为生物素；所述第二结合分子与所述磁珠键合，所述第二结合分子为链霉亲和素。4.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述内标S100A8重组蛋白为连接标签序列的S100A8重组蛋白，或者与S100A8蛋白的氨基酸序列一致性超过80％的能够被所述S100A8特异性抗体富集的多肽；任选地，所述标签序列包括选自His标签、Flag标签、GST标签、MBP标签、C
‑
MYC标签、HA标签、FC标签、AVI标签、MBP标签、DDDDK标签中的至少之一。5.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述用于MALDI
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TOF MS平台的基质包括选自芥子酸、α
‑
氰基
‑4‑
羟基肉桂酸、2,5
‑
二羟基苯甲酸、2,4,6
‑
三羟基苯乙酮、蒽三酚、3
‑
吲哚丙烯酸中的至少之一；任选地，所述用于MALDI
‑
TOF MS平台的基质为芥子酸；任选地，所述芥子酸的浓度为5
‑
20mg/mL。6.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述抗原抗体复合物解离试剂包括选自有机酸溶液、无机酸溶液、碱溶液；所述有机酸溶液包括选自甲酸溶液、乙酸溶液、三氟乙酸溶液、丙酸溶液、羟基乙酸溶液、氨基酸溶液、丁酸溶液、柠檬酸、琥珀酸、抗坏血酸、乳酸、苹果酸、酒石酸中的至少之一；所述无机酸溶液包括选自盐酸溶液、硫酸溶液、磷酸溶液中的至少之一；所述碱溶液包括选自氢氧化钠溶液、氢氧化钾溶液、三羟甲基氨基甲烷溶液、四乙基溴化铵溶液、碳酸钠溶液、碳酸氢钠溶液、碳酸氢铵溶液、氨水溶液、尿素溶液中的至少之一；任选地，所述抗原抗体复合物解离试剂为三氟乙酸溶液；任选地，所述三氟乙酸溶液的质量浓度为0.05
‑
5％。7.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述反应缓冲液包括选自MES缓冲液、PBST缓冲液、Tris
‑
HCl缓冲液中的至少之一；
任选地，所述反应缓冲液的pH值为6
‑
8；任选地，所述反应缓冲液为MES缓冲液，浓度为0.05
‑
1M，pH值为6
‑
8。8.根据权利要求1所述的试剂盒...

【专利技术属性】
技术研发人员：马雪婷，门丽影，陈宏敏，
申请(专利权)人：融智生物科技青岛有限公司，
类型：发明
国别省市：