一种测定单位体积液体中颗粒数目的方法和应用技术

本发明专利技术属于细胞培养技术领域，特别涉及一种测定单位体积液体中颗粒数目的方法和应用。包括以下步骤：(1)采用染色剂对待测液体进行染色，将染色后的待测液体和层析分离液体依次滴加在滤纸的一端，所述待测液体中的颗粒在毛细管层析作用下在滤纸上分散开，肉眼计数得到待测液体中的颗粒数目；(2)根据待测液体的体积，计算得到单位体积液体中颗粒数目。本发明专利技术的测定方法无需购买昂贵的仪器、无需拍照和使用图像分析软件进行辅助计数，突破了血球计数仪无法测定粒径大于100μm的颗粒的限定，通过肉眼观察即可完成颗粒数目的测定，简单、高效，且成本低。且成本低。且成本低。

【技术实现步骤摘要】
一种测定单位体积液体中颗粒数目的方法和应用


[0001]本专利技术属于细胞培养
，特别涉及一种测定单位体积液体中颗粒数目的方法和应用。

技术介绍

[0002]在细胞生物学领域，通常涉及细胞培养和细胞计数的研究。目前常用的方法是显微镜直接计数法，其是将少量待测细胞或微生物悬浮液加入到一个具有确定面积和容积的血球计数板上，并置于显微镜下直接计数，然后推算出培养液中细胞或微生物数量的一种方法，该方法比较适合尺寸为3～100μm的细胞，而对于尺寸大于100μm的细胞，此方法并不适用。因为血球计数板的计数室大小只有1*1*0.1mm，计数室的高度是固定的，即0.1mm，限制了进入计数室的颗粒的最大尺寸不能超过100μm。因此，在测定直径大于100μm的颗粒数目时，血球计数板将不再适用。
[0003]目前生物学领域经常需要对直径大于100μm的颗粒进行计数，比如干细胞规模化培养工艺中所使用的微载体，微载体尺寸一般在100
‑
300μm，其作为一种贴壁细胞悬浮培养技术所必须使用的辅助材料，在培养过程中，需要知道每单位体积中微载体的数量，以便更好地实时分析细胞生长与微载体的数量关系，以及分离出单个微载体，实时记录分析细胞的生长状态。现有方法中通常使用显微镜拍照和图像分析软件对液体中尺寸大于100μm的颗粒数目进行估算，这类方法不仅耗时、效率低，且大大增加了科研人员的工作量。
[0004]因此，亟需提供一种测定单位体积液体中颗粒数目的方法，该方法可以实现对粒径为100
‑
500μm的颗粒进行计数，且简单、高效、成本低。

技术实现思路

[0005]本专利技术旨在解决现有技术中存在的一个或多个技术问题，至少提供一种有益的选择或创造条件。本专利技术提供一种测定单位体积液体中颗粒数目的方法，该方法可以实现对粒径为100
‑
500μm的颗粒进行计数，且更加简单、高效、成本低。
[0006]本专利技术的专利技术构思：利用染色剂对待测液体进行染色，待测液体中的颗粒被染成深色，然后将待测液体和层析分离液体滴加在滤纸一端，通过层析分离作用，颗粒在滤纸上分散开，深色的颗粒和白色的滤纸形成对比，在滤纸上可得到肉眼可见的单一颗粒，即可对颗粒进行计数，最后根据待测液体的体积，计算得出单位体积待测液体中的颗粒数目，突破了血球计数仪无法测定粒径大于100μm的颗粒的限定，可以实现对粒径为100
‑
500μm的颗粒进行计数，且更加简单、高效、成本低。
[0007]因此，本专利技术的第一方面提供一种测定单位体积液体中颗粒数目的方法。
[0008]具体的，所述方法包括以下步骤：
[0009](1)采用染色剂对待测液体进行染色，将染色后的待测液体和层析分离液体依次滴加在滤纸的一端，所述待测液体中的颗粒在毛细管层析作用下在滤纸上分散开，肉眼计数得到待测液体中的颗粒数目；
[0010](2)根据待测液体的体积，计算得到单位体积液体中颗粒数目。
[0011]其中，步骤(1)中的待测液体为从待测液体总体积中取适量的待测液体进行测试，根据单位体积液体中的颗粒数目和待测液体的总体积，可以进一步计算得到整个待测液体中的总颗粒数目。
[0012]优选的，步骤(1)中，若待测液体中的颗粒浓度≥50个/10μL，则染色前还包括对待测液体进行稀释；将稀释、染色后的稀释液和层析分离液体依次滴加在所述滤纸的一端，所述稀释液中的颗粒在滤纸上分散，得到稀释液中的颗粒数目；根据所述稀释的倍数，所述稀释液的体积和所述稀释液中的颗粒数目，计算得到单位体积待测液体中的颗粒数目。
[0013]优选的，所述染色剂为能使颗粒着色的任意一种染色剂；所述染色剂选自台盼蓝、结晶紫、苏木精、伊红、龙胆紫、甲基绿、刚果红、甲基蓝、苏丹III、番红、固绿、碱性品红、中性红和洋红中的至少一种。
[0014]具体的，染色剂将待测液体中的颗粒染成深色，得到深色的颗粒，便于后续用肉眼直接对颗粒数目进行计数。
[0015]优选的，步骤(1)中，所述染色剂的浓度为0.4
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4％；所述染色的时间为30
‑
60s。
[0016]具体的，在实际的测定过程中，染色剂的浓度和染色时间，可以根据具体情况进行相应的调整，只要能使颗粒染色后容易分辨清楚即可。
[0017]优选的，采用层析分离液体对所述颗粒进行分散，所述层析分离液体选自水、无机盐缓冲液中的至少一种。
[0018]进一步优选的，所述无机盐缓冲液选自磷酸盐缓冲液、Tris
‑
盐酸缓冲液、柠檬酸盐缓冲液中的至少一种。
[0019]优选的，步骤(1)中，所述滤纸为过滤用滤纸。
[0020]具体的，当待测液体和层析分离液体滴加在滤纸一端后，液体中的颗粒会通过毛细管层析分离作用而逐渐分散开来，由于被染成深色的颗粒和白色滤纸具有颜色上的鲜明对比，在滤纸上可得到肉眼可见的单一颗粒，从而可以更加简单，快速的对颗粒进行计数，无需显微镜和计数器。
[0021]优选的，步骤(1)中，所述颗粒选自微载体、水凝胶微球、药物缓释颗粒、止血粉颗粒中的任意一种。
[0022]本专利技术的方法并不限于测定单位体积液体中的颗粒数目，还可以为单位质量颗粒或粉末中的颗粒数目测定提供有效的计数方法，只需将单位质量的粉末分散在溶剂中形成颗粒均匀分散的液体即可。
[0023]优选的，步骤(1)中，所述颗粒的粒径为100
‑
500μm。
[0024]具体的，所述颗粒为在溶剂中可自由均匀分散的颗粒。
[0025]优选的，采用移液器分别依次吸取步骤(1)中所得的所述待测液体和层析分离液体，然后依次滴加在滤纸的一端。
[0026]具体的，移液器是分子细胞生物学实验常用仪器，具有较高的准确度。
[0027]优选的，步骤(1)中，若待测液体中的颗粒浓度大于50个/10μL时，则采用溶剂对所述待测液体进行稀释。
[0028]优选的，所述溶剂选自水、无机盐缓冲液中的至少一种。
[0029]优选的，所述无机盐缓冲液选自磷酸盐缓冲液、Tris
‑
盐酸缓冲液、柠檬酸盐缓冲
液中的至少一种。
[0030]具体的，可根据待测液体的浓度来判断稀释的倍数，通常情况下，当待测液体浓度大于50个/10μL时，需要对待测液体进行稀释，因为颗粒数目较多时，通过肉眼计数容易出错，而且花费的时间较长。另外，对于如何判断待测液体是否需要稀释以及稀释的倍数，可先将待测液体不进行稀释而直接进行染色、计数，如果发现数目过多(超过50个/10μL)时，则可以根据估算的数目，重新对待测液体进行相应倍数的稀释后再进行颗粒数目的测定。
[0031]优选的，所述染色剂的添加量占所述稀释液的体积的1
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10％。
[0032]优选的，所述稀释液的浓度为小于50个/10μL。
[0033]具体的，稀释后稀释液的浓度小于本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种测定单位体积液体中颗粒数目的方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)采用染色剂对待测液体进行染色，将染色后的待测液体和层析分离液体依次滴加在滤纸的一端，所述待测液体中的颗粒在毛细管层析作用下在滤纸上分散开，肉眼计数得到待测液体中的颗粒数目；(2)根据待测液体的体积，计算得到单位体积液体中颗粒数目。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(1)中，若待测液体中的颗粒浓度>50个/10μL，则染色前还包括对待测液体进行稀释；将稀释、染色后的稀释液和层析分离液体依次滴加在所述滤纸的一端，所述稀释液中的颗粒在滤纸上分散，得到稀释液中的颗粒数目；根据所述稀释的倍数，所述稀释液的体积和所述稀释液中的颗粒数目，计算得到单位体积待测液体中的颗粒数目。3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(1)中，所述染色剂为能使颗粒着色的任意一种染色剂，所述染色剂选自台盼蓝、结晶紫、苏木精、伊红、龙胆紫、甲基绿、刚果红、甲基蓝、苏丹III、番红、固绿、碱性品红、中性红和洋红中的至少一种。4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(1)中，所述染色剂的浓度为0.4
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【专利技术属性】
技术研发人员：游凯，高博韬，龚尧，
申请(专利权)人：广东省科学院生物与医学工程研究所，
类型：发明
国别省市：