一种用于筛选高亲和力纳米抗体的工程菌及其应用制造技术

本发明专利技术涉及纳米抗体筛选技术，具体而言，涉及一种用于筛选高亲和力纳米抗体的工程菌及其应用。该工程菌为含有双表达载体的大肠杆菌；双表达载体中含有目的抗原蛋白序列、抗原蛋白的纳米抗体序列、氨苄青霉素抗性基因TEM

【技术实现步骤摘要】
一种用于筛选高亲和力纳米抗体的工程菌及其应用


[0001]本专利技术涉及纳米抗体筛选技术，具体而言，涉及一种用于筛选高亲和力纳米抗体的工程菌及其应用。

技术介绍

[0002]抗体具有高度特异性的抗原结合能力，可用于检测和操纵目的蛋白，因此在基础研究以及靶向药物治疗中发挥着重要作用。纳米抗体(Nbs)，也称为VHHs或单域抗体(sdAbs)，源于骆驼单链抗体(HCAbs)的可变域。纳米抗体的体积仅为传统抗体的十分之一，但仍然保留了高亲和力和特异性。此外，纳米抗体表现出高温耐受(60
‑
80℃)、抗蛋白酶酶解等特点，而且在组织穿透能力、隐蔽表位可及性和蛋白稳定性方面优于传统抗体。因此，纳米抗体在不同领域获得广泛应用。
[0003]抗体的抗原结合能力对于抗体的功能发挥极为重要，然而，通过噬菌体文库筛选等方法直接得到的原始纳米抗体，特别是通过天然文库或人工合成文库筛选得到的纳米抗体的抗原亲和力往往难以满足需要。高亲和力纳米抗体多通过严格的筛选方法或在筛选出的原始纳米抗体的基础上进一步优化获得。对关键结合位点的饱和突变结合展示筛本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种用于筛选高亲和力纳米抗体的工程菌，其特征在于，所述工程菌为含有双表达载体的大肠杆菌；所述双表达载体中含有目的抗原蛋白的序列、纳米抗体的序列、以及氨苄青霉素抗性基因TEM
‑
1型β
‑
内酰胺酶的两个片段BLF1和BLF2的序列。2.根据权利要求1所述一种用于筛选高亲和力纳米抗体的工程菌，其特征在于，所述大肠杆菌的菌株为Origami(DE3)。3.根据权利要求2所述一种用于筛选高亲和力纳米抗体的工程菌，其特征在于，所述双表达载体为pRSFDuet
‑1‑
BLF1
‑
Linker
‑
POI
‑
Nb
‑
Linker
‑
BLF2；其中，所述pRSFDuet
‑
1为载体质粒，所述POI为目的抗原蛋白的序列，所述Nb为纳米抗体的序列。4.一种如权利要求3所述的用于筛选高亲和力纳米抗体的工程菌的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：S1、合成C端含有Linker的片段BLF1
‑
Linker，所述BLF1
‑
Linker片段的序列如SEQ ID NO:1所示；再将所述片段BLF1
‑
Linker、所述目的抗原蛋白的DNA片段与pRSFDuet
‑
1进行连接，测序正确后，得到载体pRSFDuet
‑1‑
BLF1
‑
Linker
‑
POI；S2、合成N端含有Linker的片段Linker
‑
BLF2，所述Linker
‑
BLF2片段的序列如SEQ ID NO:3所示；将所述纳米抗体的DNA片段、所述Linker
‑
BLF2片段与载体pRSFDuet
‑1‑
BLF1
‑
Linker连接，测序正确后，得到所述双表达载体pRSFDuet
‑1‑
BLF1
‑
Linker
‑
POI
‑
Nb
‑
Linker
‑
BLF2；S3、将所述双表达载体pRSFDuet
‑1‑
BLF1
‑
Linker
‑
POI
‑
Nb
‑
Linker
‑
BLF2转入所述Origami(DE3)中。5.根据权利要求4所述一种用于筛选高亲和力纳米抗体的工程菌的构建方法，其特征在于，所述BLF1
‑
Linker片段的5
’
端和3
’
端分别带有BamHI和PstI酶切位点，所述BLF1
‑
Linker片段编码的氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示；所述Linker
‑
BLF2片段的5

【专利技术属性】
技术研发人员：王文义，胡悦，霍莉，黄文娣，蒋诗越，杨佳敏，
申请(专利权)人：中南民族大学，
类型：发明
国别省市：