lncRNAHIF1A-AS3基因抑制剂在制备治疗肺癌的药物中的应用制造技术

本发明专利技术公开了lncRNA HIF1A

【技术实现步骤摘要】
lncRNAHIF1A
‑
AS3基因抑制剂在制备治疗肺癌的药物中的应用


[0001]本专利技术涉及生物医药
，具体涉及lncRNAHIF1A
‑
AS3基因抑制剂在制备治疗肺癌的药物中的应用。

技术介绍

[0002]肺癌的发生除了与吸烟有关，压力应激也是重要的因素。近期研究表明，肺癌的发生发展除了与异常表达的蛋白相关，长链非编码RNA(lncRNA)也是肺癌发展的重要驱动因素。目前发现的多数lncRNA都是在体外培养的细胞中筛选到的，而体内外培养环境，尤其缺氧状态有很大差异，尚无令人信服的功能性lncRNA。
[0003]本专利技术以慢性应激的小鼠为模型，期望筛选出一种与慢性应激导致的肺癌发生发展相关、能在缺氧环境下特异性影响肺癌细胞增殖和转移能力、可用于肺癌诊断的新型lncRNA。

技术实现思路

[0004]有鉴于此，本专利技术的目的之一在于提供一种lncRNA HIF1A
‑
AS3基因抑制剂在制备治疗肺癌的药物中的应用；本专利技术的目的之二在于提供检测lncRNA HIF1A
‑
AS3基因表达的试剂在制备肺癌诊断试剂盒中应用；本专利技术的目的之三在于提供lncRNA HIF1A
‑
AS3基因在筛选肺癌治疗药物中的用途。
[0005]为达到上述目的，本专利技术提供如下技术方案：
[0006]1、lncRNA HIF1A
‑
AS3基因抑制剂在制备治疗肺癌的药物中的应用。
[0007]本专利技术优选的，所述lncRNA HIF1A
‑
AS3基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。
[0008]本专利技术优选的，所述lncRNA HIF1A
‑
AS3基因抑制剂为以lncRNA HIF1A
‑
AS3基因或其转录本为抑制靶标或沉默靶标的dsRNA、反义核酸、小干扰RNA、微小RNA，或者能表达或形成所述dsRNA、反义核酸、小干扰RNA、微小RNA的构建物。
[0009]本专利技术优选的，所述小干扰RNA的核苷酸序列为：
[0010]shRNA1:GAGCCAAGACAAGGGAATAAATTCAAGAGATTTATTCCCTTGTCTTGGCTCTTTTTT；或
[0011]shRNA2:TCCCAAAGTGCGAGGATTATATTCAAGAGATATAATCCTCGCACTTTGGGATTTTTT；或
[0012]ShRNA3:ATGCATGGTGCTTACTAATAATTCAAGAGATTATTAGTAAGCACCATGCATTTTTTT。
[0013]2、检测lncRNA HIF1A
‑
AS3基因表达的试剂在制备肺癌诊断试剂盒中应用。
[0014]本专利技术优选的，所述lncRNA HIF1A
‑
AS3基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。
[0015]本专利技术优选的，所述试剂盒包含SEQ ID NO.2和SEQ ID NO.3所示的引物组。
[0016]3、lncRNA HIF1A
‑
AS3基因在筛选肺癌治疗药物中的用途。
[0017]所述lncRNA HIF1A
‑
AS3基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。
[0018]本专利技术的有益效果在于：本专利技术发现了一个与肺癌发展密切相关的新型lncRNA HIF1A
‑
AS3，该非编码RNA的细胞定位及功能未见报道，HIF1A
‑
AS1是响应于压力应激而被激
活，主要定位于细胞核，少量表达于细胞质，HIF1A
‑
AS3在肺癌组织中表达高于癌旁组织，在肺癌患者血清中表达高于健康人群；HIF1A
‑
AS1与HIF
‑1ɑ
、VEGF、CD206、CD11b的表达呈正相关，在A549和H1299细胞中过表达HIF1A
‑
AS3均促进HIF
‑1ɑ
和VEGF表达，敲低HIF1A
‑
AS3抑制HIF
‑1ɑ
和VEGF表达；在缺氧条件下，过表达HIF1A
‑
AS3可促进肺癌细胞增殖和迁移。HIF1A
‑
AS3可能发挥促癌作用，具有成为肺癌诊断标记物的潜力。
附图说明
[0019]为了使本专利技术的目的、技术方案和有益效果更加清楚，本专利技术提供如下附图进行说明：
[0020]图1为慢性应激促进小鼠肺癌皮下肿瘤的生长实验；
[0021]其中，A为造模流程；B为小鼠肿瘤块拍照；C为肿瘤生长曲线；D为肿瘤重量；E为造模后小鼠糖水偏好实验；F为造模后小鼠旷场实验；
[0022]图2为HIF1A
‑
AS3在慢性应激后肿瘤组织中升高；
[0023]其中，A为RNA
‑
seq测序结果火山图；B为各组差异基因热图；C为HIF1A
‑
AS3在应激组转录水平升高；D为HIF1A
‑
AS3在肺癌细胞的定位主要在细胞核；E为原位杂交HIF1A
‑
AS3主要定位在细胞核中；
[0024]图3为慢性应激使肿瘤组织内HIF
‑
1α/VEGF信号通路及M2型巨噬细胞标记物高表达；
[0025]其中，A～C为RT
‑
PCR检测肿瘤组织内各基因的表达水平；D～F为各基因表达水平的相关性分析；
[0026]图4为pcDNA3.1
‑
P2A
‑
GFP(8M)载体图谱；
[0027]图5为HIF1A
‑
AS3敲低和过表达情况；
[0028]其中，A为A549细胞过表达HIF1A
‑
AS3促进HIF
‑1ɑ
和VEGF表达；B为H1299细胞过表达HIF1A
‑
AS3促进HIF
‑1ɑ
和VEGF表达；C为H1299细胞敲低HIF1A
‑
AS3抑制HIF
‑1ɑ
和VEGF表达；D为有氧和缺氧条件下，过表达或敲低HIF1A
‑
AS3对HIF
‑1ɑ
表达的影响；
[0029]图6为过表达HIF1A
‑
AS3促进肺癌细胞增殖和缺氧环境下的迁移；
[0030]其中，A为细胞增殖曲线；B为没有基质胶的细胞侵袭实验；C为划痕愈合实验；
[0031]图7为敲低HIF1A
‑
AS3抑制肺癌细胞增殖和迁移；
[0032]其中，A为细胞增殖曲线；B为没有基质胶的细胞侵袭实验；C为划痕愈合实验；
[0033]图8为HIF1A
‑
AS3对巨噬细胞极本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.lncRNA HIF1A
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AS3基因抑制剂在制备治疗肺癌的药物中的应用。2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于：所述lncRNAHIF1A
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AS3基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于：所述lncRNA HIF1A
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AS3基因抑制剂为以lncRNAHIF1A
‑
AS3基因或其转录本为抑制靶标或沉默靶标的dsRNA、反义核酸、小干扰RNA、微小RNA，或者能表达或形成所述dsRNA、反义核酸、小干扰RNA、微小RNA的构建物。4.根据权利要求1所述的应用，其特征在于：所述小干扰RNA的核苷酸序列为：shRNA1:GAGCCAAGACAAGGGAATAAATTCAAGAGATTTATTCCCTTGTCTTGGCTCTTTTTT；或shRNA2:TCCCAAAGTG...

【专利技术属性】
技术研发人员：杜静，刘翠兰，董洪亮，虞甬，于国兴，崔冰杰，
申请(专利权)人：滨州医学院附属医院，
类型：发明
国别省市：