可溶性环氧化物水解酶抑制剂的新用途制造技术

本发明专利技术公开了可溶性环氧化物水解酶抑制剂的新用途，具体为可溶性环氧化物水解酶抑制剂在制备治疗慢性疼痛所致记忆受损的药物中的应用。本发明专利技术涉及生物医药技术领域，本发明专利技术首次提出可溶性环氧化物水解酶抑制剂在制备治疗慢性疼痛所致记忆受损的药物中的应用，经实验表明，利用可溶性环氧化物水解酶抑制剂能够显著缓解动物疼痛，且可溶性环氧化物水解酶抑制剂不影响动物记忆的形成，可以显著改善慢性疼痛下的情境记忆行为。性疼痛下的情境记忆行为。性疼痛下的情境记忆行为。

【技术实现步骤摘要】
可溶性环氧化物水解酶抑制剂的新用途


[0001]本专利技术涉及生物医药
，具体为可溶性环氧化物水解酶抑制剂的新用途。

技术介绍

[0002]记忆受损是困扰慢性疼痛患者的常见临床问题，据统计，我国慢性疼痛患者超过3亿人，超过三分之二的慢性疼痛患者表现出记忆损伤症状。然而，因记忆损伤与慢性疼痛发病机制不同，传统镇痛药物不能有效治疗记忆损伤，目前临床上对于慢性疼痛所致的记忆损伤仍缺乏有效的治疗手段。因此，探索治疗记忆损伤的新型药物是当前疼痛研究领域亟待解决的重要科学问题。可溶性环氧化物水解酶(solubleepoxidehydrolase,sEH)是花生四烯酸代谢的关键酶之一，sEH抑制剂或sEH基因敲除已被证实对于心血管疾病、糖尿病、炎症等多种疾病具有治疗作用。探索sEH抑制剂在慢性疼痛所致记忆损伤中的作用有助于制备记忆受损的临床治疗药物。

技术实现思路

[0003]针对上述情况，为弥补上述现有缺陷，本专利技术提供了一种可溶性环氧化物水解酶抑制剂的新用途，具体为可溶性环氧化物水解酶抑制剂在制备治疗慢性疼痛所致记忆受损的药物中的应用。
[0004]本专利技术提供如下的技术方案：本专利技术提出的可溶性环氧化物水解酶抑制剂的新用途，具体为可溶性环氧化物水解酶抑制剂在制备治疗慢性疼痛所致记忆受损的药物中的应用。
[0005]进一步的，所述可溶性环氧化物水解酶抑制剂至少能够改善慢性疼痛下的情境记忆行为。
[0006]进一步的，所述可溶性环氧化物水解酶抑制剂至少能够增强海马体的AMPA受体(α
‑
氨基
‑3‑
羟基
‑5‑
甲基
‑4‑
异恶唑丙酸受体，AMPAR)蛋白质水平。
[0007]进一步的，所述可溶性环氧化物水解酶抑制剂至少能够缓解慢性坐骨神经压迫性损伤(Chronicconstrictiveinjuryofthe sciaticnerve,CCI)导致的慢性疼痛。
[0008]进一步的，所述可溶性环氧化物水解酶抑制剂至少能够增加外周环氧花生四烯酸(Eepoxyeicosatrienoicacids，EETs)水平。
[0009]更进一步的，所述可溶性环氧化物水解酶抑制剂不影响记忆的形成。
[0010]采用上述结构本专利技术取得的有益效果如下：本专利技术首次提出可溶性环氧化物水解酶抑制剂在制备治疗慢性疼痛所致记忆受损的药物中的一种新的医药用途，经实验表明，慢性疼痛动物肝脏的可溶性环氧化物水解酶具有活性显著升高，利用可溶性环氧化物水解酶抑制剂能够显著缓解动物疼痛，且可溶性环氧化物水解酶抑制剂不影响动物记忆的形成，可以显著改善慢性疼痛下的情境记忆行为。
附图说明
[0011]附图用来提供对本专利技术的进一步理解，并且构成说明书的一部分，与本专利技术的实施例一起用于解释本专利技术，并不构成对本专利技术的限制。在附图中：
[0012]图1A、图1B、图1C分别为本专利技术一典型实施方案中慢性疼痛导致可溶性环氧化物水解酶活性升高(sEH寡聚体增加、血浆EET水平降低)结果图；
[0013]图2为本专利技术一典型实施方案中可溶性环氧化物水解酶抑制剂显著增加血浆EET水平的实验结果图；
[0014]图3为本专利技术一典型实施方案中可溶性环氧化物水解酶抑制剂显著缓解慢性疼痛的实验结果图；
[0015]图4A和图4B为本专利技术一典型实施方案中可溶性环氧化物水解酶抑制剂对慢性疼痛动物记忆形成和情境记忆行为的影响实验结果图；
[0016]图5A和图5B为本专利技术一典型实施方案中可溶性环氧化物水解酶抑制剂对慢性疼痛动物海马体突触蛋白质的影响实验结果图。
具体实施方式
[0017]下面将结合本专利技术实施例中的附图，对本专利技术实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本专利技术一部分实施例，而不是全部的实施例；基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本专利技术保护的范围。
[0018]需要说明的是，下面描述中使用的词语“前”、“后”、“左”、“右”、“上”和“下”指的是附图中的方向，词语“内”和“外”分别指的是朝向或远离特定部件几何中心的方向。
[0019]实施例
[0020]一、实验步骤
[0021]1.实验动物与实验设计：
[0022]C57BL/6J小鼠购自北京维通利华实验动物技术有限公司，并于徐州医科大学繁殖。小鼠饲养于温度为23
±
2℃，湿度为40
±
10％的标准动物房，12h/12h(8:00照明)昼夜节律，自由饮食。本实验经徐州医科大学动物伦理委员会审批，并严格按照国家卫生研究院的实验室动物护理和使用指南执行。
[0023]2.试剂：
[0024]可溶性环氧化物水解酶抑制剂购自美国Cayman Chemical公司。
[0025]3.抗体：
[0026]sEH抗体购自武汉爱博泰克生物科技有限公司；其他抗体购自美国Cell Signaling Technology公司；辣根过氧化物酶标二抗购自上海碧云天生物技术有限公司。
[0027]4.慢性神经病理性疼痛模型构建：
[0028]采用小鼠单侧坐骨神经压迫性损伤(Chronic constrictive injury ofthe sciatic nerve,CCI)模型。小鼠麻醉、消毒并切开左侧股骨上段皮肤，钝性剥离肌肉，暴露股骨中段下方坐骨神经。用3根无菌、不可吸收的4
‑
0丝线以适当力度结扎坐骨神经，结扎间隔约1.0mm。回纳坐骨神经，缝合伤口并消毒，待小鼠完全清醒后放回原饲养笼内。对照组不进行坐骨神经结扎，其余步骤相同。
[0029]5.条件性恐惧记忆实验：
[0030]提前一个小时把动物放到实验房间或附近适应环境，条件性恐惧训练(环境A)：将小鼠置于实验箱中自由探索3分钟，呈现30秒的纯音刺激(CS，3.7kHz，80dB)，在纯音刺激的最后1秒，给予小鼠单次电击(US，0.65mA，1s)，共进行四次配对刺激训练，间隔80秒；最后一次配对刺激后，让小鼠在实验箱内自由活动2分钟。恐惧环境检测(环境A)：将小鼠置于实验箱中自由探索3分钟。
[0031]6.血浆EETs测定：
[0032]小鼠血浆样品加入等体积的内标液，低温充分震荡，使蛋白充分变性，将样品放入
‑
80℃冰箱沉淀蛋白1.5小时，离心吸取上清液，并通过滤膜过滤。应用超高效液相色谱串联质谱法(UPLC
‑
MS/MS)进行检测，检测结果使用Tracefinder 3.3sp1软件进行处理与分析。
[0033]7.Western Blot分析：
[0034]取对应小鼠组织于裂解液中，经超声破碎后以12000g离心15min并取上清液用于Western Blot分析。使用上海碧云天公司产BCA试剂盒测定蛋白浓度。蛋白样本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.可溶性环氧化物水解酶抑制剂的新用途，其特征在于：具体为可溶性环氧化物水解酶抑制剂在制备治疗慢性疼痛所致记忆受损的药物中的应用。2.根据权利要求1所述的可溶性环氧化物水解酶抑制剂的新用途，其特征在于：所述可溶性环氧化物水解酶抑制剂至少能够改善慢性疼痛下的情境记忆行为。3.根据权利要求2所述的可溶性环氧化物水解酶抑制剂的新用途，其特征在于：所述可溶性环氧化物水解酶抑制剂至少能够增强海马体的AMPA受体蛋白质水平，所述海马体的AMPA受体为α
‑
氨基
‑3‑
羟...

【专利技术属性】
技术研发人员：吴周，张红星，曹君利，张锦，余雨媚，
申请(专利权)人：徐州医科大学，
类型：发明
国别省市：