一种单碱基突变耐药菌的可视化检测技术制造技术

本发明专利技术公开了一种单碱基突变耐药菌的可视化检测技术，属于核酸检测领域。利用ARMS

【技术实现步骤摘要】
一种单碱基突变耐药菌的可视化检测技术


[0001]本专利技术属于核酸检测
，具体涉及一种单碱基突变耐药菌的可视化检测技术。

技术介绍

[0002]近年来，全世界各地经常从家禽养殖场、食品加工厂和市售蛋禽类制品中分离得到耐药沙门氏菌。由于环境的复杂性，甚至能够诱发多重耐药，其出现是过度使用抗生素及病原菌变异的结果。耐药沙门氏菌会严重影响临床上的治疗与防控，并且会增加治疗费用和副作用风险。沙门氏菌对抗抗生素的耐药机制复杂，其中由于单碱基突变诱发的耐药性获得在沙门氏菌中很常见，喹诺酮类耐药主要是由于喹诺酮耐药决定区（quinolone resistance
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determining region, QRDR）基因突变导致。DNA促旋酶是喹诺酮类药物的主要作用靶位，由2个GyrA亚基和2个GyrB亚基组成，分别由gyrA和gyrB基因编码。一旦gyrA发生基因突变，会引发DNA促旋酶的QRDR发生氨基酸突变，能够引起酶结构和功能的变化，从而干扰喹诺酮药物结合靶位，减少病原菌对抗生素的敏感性，因此导致耐药菌的产生。鉴于环境诱发的基本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种单碱基突变耐药菌的可视化检测技术，其特征在于，包括如下步骤：（1）提取扩增，从待测样品中提取基因组DNA，并将提取到的待检DNA样品加入ARMS
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PCR系统进行核酸扩增，用于扩增的ARMS
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PCR体系中包含识别耐药单碱基突变的特异引物；（2）CRISPR/Cas12a反应，对扩增产物进行CRISPR/Cas12a识别和切割，Cas12a反应体系包括Cas12a缓冲液、Cas12a效应蛋白、gRNA、G
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四链体序列和ARMS
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PCR扩增产物溶液；（3）可视化信号输出，向步骤（2）反应液中加入血红素（Hemin）、KCl、3,3',5,5'
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四甲基联苯胺（TMB），通过颜色变化来判断待检样品中是否存在目标单碱基突变耐药基因，利用酶标仪检测反应后的吸光度，通过吸光度的变化对目标单碱基突变耐药基因进行定量。2.根据权利要求1所述的可视化检测技术，其特征在于，所述ARMS
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PCR扩增所需的前引物ARMS
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F的3
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末端的1~5位人为引入了错配，以增强对单碱基突变识别的特异性。3.根据权利要求1所述的可视化检测技术，其特征在于，所述ARMS
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PCR扩增所需的特异性引物ARMS
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F和ARMS
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R序列分别如SEQ ID NO.1~6和SEQ ID NO.7所示。4.根据权利要求1所述的可视化检测技术，其特征在于，所述ARMS
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PCR反应体系总体积为20 μL，包含1~10 μM前引物ARMS
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F、1~10 μM后引物ARMS
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R、1...

【专利技术属性】
技术研发人员：吕远平，朱宇琳，邓锐杰，杨森，夏许寒，何强，
申请(专利权)人：四川大学，
类型：发明
国别省市：